复方肾怡治疗狼疮肾炎小鼠的疗效及对补体旁路途径激活的研究

背景狼疮肾炎(LN)是系统性红斑狼疮严重并发症之一,相关研究表明中药复方肾怡(SY)可以调节机体免疫及抑制肾脏纤维化。目前运用复方SY治疗LN的疗效及机制尚不清楚。目的探究复方SY对LN小鼠的治疗作用及补体旁路途径激活的影响。方法2021年4—7月,选取35只SPF级MRL/lpr小鼠(8周龄)、6只SPF级C57BL/6J小鼠(8周龄)进行实验。将MRL/lpr小鼠依据随机数字表法分为MRL/lpr组(n=8)及SY低剂量组(n=9)、SY中剂量组(n=9)、SY高剂量组(n=9),C57BL/6J小鼠为正常对照组(n=6)。SY低、中、高剂量组分别以15.34、46.02、92.04 g/kg剂量进行复方SY汤剂灌胃,正常对照组及MRL/lpr组以0.5 ml 0.9%氯化钠溶液灌胃。从小鼠12周龄开始干预,1次/d,持续14周。观察各组动物体征,检测尿蛋白与肌酐比值(UPCR),血清抗双链DNA抗体(anti-dsDNA)、抗核抗体(ANA)水平,肾脏组织病理情况,肾脏组织C3、免疫球蛋白G(IgG)、C5b-9免疫沉积情况,肾脏组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、Fibronectin及补体蛋白水平。结果截至干预结束,正常对照组6只小鼠存活,MRL/lpr组3只小鼠存活,SY低、中、高剂量组分别有5、7、9只小鼠存活。(1)正常对照组、SY中剂量组、SY高剂量组小鼠体征量化分值均低于MRL/lpr组(P<0.05)。(2)正常对照组、SY各剂量组小鼠干预第9、10、11、12、13周UPCR均低于MRL/lpr组(P<0.05)。(3)正常对照组、SY低剂量组、SY高剂量组小鼠干预14周后血清anti-dsDNA水平低于MRL/lpr组(P<0.05);正常对照组、SY各剂量组小鼠干预14周后血清ANA水平低于MRL/lpr组(P<0.05)。(4)干预14周后,HE染色可见MRL/lpr组小鼠肾小球内有免疫复合物沉积,PAS染色可见肾小球内有新月体形成;HE染色可见SY各剂量组小鼠肾小球大致正常,而PAS染色可见SY中、高剂量组小鼠肾小球内有系膜细胞增生,伴少量炎细胞浸润。(5)正常对照组、SY各剂量组小鼠干预14周后肾脏组织C3、C5b-9沉积低于MRL/lpr组(P<0.05);SY低剂量组、SY高剂量组小鼠干预14周后肾脏组织IgG免疫沉积低于MRL/lpr组(P<0.05)。(6)SY高剂量组小鼠干预14周后肾脏组织CollagenⅠ、Fibronectin、C3、C5、CD35蛋白水平低于MRL/lpr组(P<0.05);SY低、中剂量组小鼠干预14周后肾脏组织Fibronectin、C3、C5、CD35蛋白水平低于MRL/lpr组(P<0.05);正常对照组小鼠干预14周后肾脏组织Fibronectin蛋白水平低于MRL/lpr组(P<0.05)。结论复方SY可改善MRL/lpr小鼠狼疮肾脏损伤,延缓疾病进展,其作用机制可能是通过抑制补体旁路途径的激活。

重症监护病房中急性肾损伤患者发生急性呼吸窘迫综合征及不良预后的相关危险因素分析

背景急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)和急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)均为重症监护病房患者的常见并发症。AKI为发生ARDS的危险因素,当AKI合并ARDS时患者死亡率显著升高。目的分析重症病房中急性肾损伤患者发生急性呼吸窘迫综合征以及不良预后的相关危险因素。方法回顾性分析2013年1月1日-2020年1月1日解放军总医院第一医学中心重症监护病房AKI患者临床资料。根据是否发生ARDS分为ARDS组(154例)和非ARDS组(102例)。根据是否发生不良预后(住院死亡或出院时未脱离机械通气伴应用血管活性药物维持循环)分为不良预后组(164例)和正常出院组(92例)。通过单因素与多因素logistic回归分析AKI患者发生ARDS及不良预后的危险因素。结果校正混杂因素后结果显示,AKI 3期(OR:4.81,95%CI:2.20~10.54)、肾性AKI(OR:6.00,95%CI:2.87~12.56)和应用血管活性药物(OR:3.72,95%CI:1.70~8.12)是AKI患者发生ARDS的独立危险因素;年龄(OR:1.02,95%CI:1.01~1.04)、休克(OR:3.12,95%CI:1.62~6.00)、AKI 3期(OR:3.44,95%CI:1.61~7.35)是AKI患者发生不良预后的独立危险因素。不良预后组入院体温(OR:0.66,95%CI:0.45~0.97)更低,ICU住院时间(OR:0.99,95%CI:0.98~0.99)更短。结论AKI 3期、肾性AKI和应用血管活性药物为重症病房中AKI患者发生ARDS的独立危险因素。不良预后组入院体温更低,年龄、休克和AKI 3期为AKI患者不良预后的独立危险因素。

尿液外泌体蛋白质组学在糖尿病肾病无创性诊断中价值

目的筛选糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)患者与单纯2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)患者尿液外泌体中最优差异表达蛋白,探讨蛋白质组学在T2DM患者DN诊断中的价值。方法经肾脏穿刺活检组织病理检查确诊的DN患者12例,随机选取4例为DN筛选蛋白组,余8例DN患者为DN蛋白验证组;单纯T2DM不合并肾功能损害患者8例,随机选取4例为T2DM筛选蛋白组,余4例为T2DM蛋白验证组。分别收集DN筛选蛋白组与DN蛋白验证组患者肾脏穿刺活检前及T2DM筛选蛋白组与T2DM蛋白验证组患者晨起尿液标本,采用超高速离心联合0.22μm超滤法分离纯化尿液外泌体,应用透射电镜观测尿液外泌体形态特征,采用纳米颗粒跟踪分析尿液外泌体粒径;采用Western blot法检测4组尿液外泌体中经典外泌体识别蛋白ALIX、TSG101、Syntenin、CD9阳性表达情况;采用数据非依赖性采集质谱法鉴定4组患者尿液外泌体蛋白质及其表达量,分析DN筛选蛋白组与T2DM筛选蛋白组肾脏疾病生物途径相关的最优差异表达蛋白;比较DN蛋白验证组与T2DM蛋白验证组最优差异表达蛋白表达量;绘制ROC曲线,评估尿液外泌体最优差异表达蛋白对DN的诊断效能。结果分离纯化的尿液外泌体均符合尿液外泌体双层膜泡结构特征,符合外泌体粒径,经典外泌体识别蛋白ALIX、TSG101、Syntenin或CD9阳性表达均>3个,提示尿液外泌体分离纯化成功。DN筛选蛋白组与T2DM筛选蛋白组尿液外泌体中共鉴定出3 654个蛋白,差异性表达蛋白1 133个,其中DN筛选蛋白组467个蛋白表达较T2DM筛选蛋白组降低[log_(2)(FC)≤-1,P<0.05],666个蛋白表达较T2DM筛选蛋白组升高[log_(2)(FC)≥1,P<0.05];根据差异表达排名及肾脏疾病生物途径筛选出C8G[log_(2)(FC)=8.500]、CD5L[log_(2)(FC)=8.330]、C5[log_(2)(FC)=7.570]、C7[log_(2)(FC)=7.414]、C9[log_(2)(FC)=6.965]、ANXA1[log_(2)(FC)=-3.247]、CALB1[log_(2)(FC)=-2.661]、CLOCK[log_(2)(FC)=-2.649]为最优差异表达蛋白。DN蛋白验证组患者尿液外泌体CD5L、C5、C9蛋白表达量高于T2DM蛋白验证组(P<0.05),CALB1、CLOCK蛋白表达量低于T2DM蛋白验证组(P<0.05);C8G、C7、ANXA1蛋白表达量与T2DM蛋白验证组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。DN与T2DM患者尿液外泌体最优差异表达蛋白CALB1、C9、CD5L、C5表达量最佳截断值分别为0.36×10^(5)、1.70×10^(5)、0.77×10^(5)、1.04×10^(5)时,诊断DN的AUC分别为0.969(95%CI:0.876~1.000,P=0.011)、0.906(95%CI:0.720~1.000,P=0.027)、0.906(95%CI:0.733~1.000,P=0.027)、0.938(95%CI:0.796~1.000,P=0.017),灵敏度分别为100.0%、87.5%、75.0%、87.5%,特异度分别为87.5%、100.0%、100.0%、100.0%。结论蛋白质组学有助于筛选尿液外泌体中与肾脏疾病生物途径相关差异表达蛋白质,CALB1、C9、CD5L、C5可能作为T2DM患者诊断DN的无创生物学标志物。