器官移植受者术后巨细胞病毒感染的监测

目的:评价外周血巨细胞病毒pp65抗原检测在器官移植受者移植术后巨细胞病毒感染监测中的价值,并与巨细胞病毒抗体检测进行对比。方法:选择2005-05/2006-08解放军总医院第二附属医院器官移植中心器官移植受者43例,于移植术后两三个月取外周血检测巨细胞病毒抗原和抗体。①巨细胞病毒早期抗原pp65检测:取5～7mL外周血加入EDTA抗凝,采用间接免疫荧光方法进行,以每2×105个白细胞中发现1个或以上阳性细胞定为阳性。②巨细胞病毒特异性IgG,IgM抗体检测:取3mL外周血,不抗凝,以间接ELISA法检测。结果:43例受试者均进入结果分析,无脱落。①43例中术后外周血巨细胞病毒早期抗原pp65阳性9例,均在检测同时或2～10d后出现明显的巨细胞病毒感染症状。②巨细胞病毒抗体IgG均为阳性,仅能说明受试者有过巨细胞病毒感染史。③巨细胞病毒抗体IgM阳性2例,检出率低于pp65抗原阳性者。结论:应用间接免疫荧光方法检测巨细胞病毒pp65抗原具有快速、特异、更易于接受的优点,适用于器官移植术后巨细胞病毒感染的监测,而巨细胞病毒抗体的检测仅能作为辅助参考。

国内外器官移植的比较研究

随着外科技术的改进,免疫抑制剂的发展,世界器官移植取得了巨大的发展。近年来我国的器官移植已取得了较大的进展,但要完全与国际接轨,还存在许多急需解决的问题。综述了国内外器官移植发展状况及趋势,分析了器官移植中尚待解决的伦理问题,从社会、伦理、经济、文化、心理、医疗等问题探讨了器官移植的新进展。

成人骨髓间充质干细胞对实体器官移植之影响 在诱导耐受中已成为有意义的候选细胞

背景:来源于成人骨髓的间充质干细胞在体内外能够改变同种异体免疫反应,在实体器官移植中具有很大的应用潜力。目的:发展间充质干细胞的抗排斥治疗,进一步明确间充质干细胞免疫调节能力的机制。方法:应用计算机检索Pubmed数据库(1994/2009-03),以Mesenchymal stem cells,Solid organ transplantation,Tolerance,Immunosuppression,Animal model为检索词。结果与结论:共收集262篇关于成人骨髓间充质干细胞对实体器官移植的影响及作用机制的文献,全部为英文。排除发表时间较早、重复及类似研究,纳入49篇符合标准的文献。人间充质干细胞不表达MHC2Ⅱ类抗原和T细胞共刺激分子B7,与同种异体T淋巴细胞共培养不引起T细胞增殖,此外还抑制混合淋巴细胞反应及丝裂原刺激的T细胞增殖。间充质干细胞对T细胞增殖的抑制作用不受主要组织相容性复合物的限制,无论是来自供者、受者的间充质干细胞均具有相似的免疫调节作用。异基因间充质干细胞在体内能够引起免疫反应,不是完全免疫豁免的。间充质干细胞在注射后,在体内的效应强烈依靠其位置和迁移模式。在诱导耐受的临床器官移植研究中,间充质干细胞是有意义的候选细胞。

肝肾器官移植供体切取及修整实践

目的:供体切取技术是器官移植的重要步骤,拟在实践中总结出一套较为合理的供体切取及修整方法,以供参考。方法:①实验对象:2000-01/2006-12解放军总医院第二附属医院器官移植中心共完成无心跳肝肾供体切取100例,手术过程符合医学伦理学要求。采用原位肝肾分开切取24例,原位腹主动脉、门静脉双路灌注肝肾联合快速切取法切取供肝肾76例。②实验方法:对门静脉插管灌注方式进行改进,采用盆腔内引流,供肝修整顺序为下腔静脉、门静脉、肝动脉、胆道;供肾修整顺序为输尿管、肾动脉、肾静脉。③实验评估:术中观察器官色泽、张力及完整度,并记录手术操作时间。结果:①全组供体平均热缺血时间为5min;切取时间:肝肾分取平均为肝12min、肾5min,联合切取平均为15min;保存时间平均为8h。②全组供体均成功移植。结论:本组开展的肝肾切取与修整技术经过长期大量的实践,逐步改进,形成了在插管、引流、手术、灌注、修整等多方面具有特点的一套方法,其最大特点是快速、实用,在临床实际应用中取得了较为满意的效果。

肾移植急性排斥反应时Bcl-2/Bax及Fas/FasL蛋白表达的变化

背景:在器官移植急性排斥反应过程中,靶细胞的凋亡被认为是移植物功能丧失的主要作用途径之一。细胞凋亡受一系列分子调控,其中Bcl-2家族起着决定性作用;Fas系统介导的细胞凋亡亦在移植免疫中起十分重要的作用。目的:分析移植肾发生急性排斥反应时Bcl-2/Bax,Fas/FasL蛋白表达规律与急性排斥反应预后的关联。设计、时间及地点:观察对比实验,于2002/2005在解放军总医院第二附属医院器官移植中心完成。对象:收集肾移植术后发生急性排斥反应的移植肾穿刺活检蜡块标本30例;另选同期20例无明显排斥反应表现肾移植患者的移植肾穿刺活检蜡块标本作为对照组。方法:应用免疫组织化学方法检测移植肾急性排斥反应穿刺活检标本中Bcl-2/Bax,Fas/FasL蛋白的表达水平,并与对照组进行对比。主要观察指标:急性排斥组和对照组移植肾穿刺活检标本中Bcl-2/Bax,Fas/FasL蛋白的表达水平。结果:①Bcl-2/Bax,Fas/FasL蛋白主要在肾小管上皮细胞中表达。②两组肾小管上皮细胞中Bcl-2表达水平差异无显著性意义(P>0.05),急性排斥反应组肾小管上皮细胞中Bax,Fas及FasL蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05)。结论:在肾移植急性排斥反应中Bcl-2家族可能参与调控细胞凋亡,引起移植肾免疫损伤;Fas及FasL可能直接参与移植肾急性排斥反应,造成肾小管上皮细胞凋亡,引起移植肾免疫损伤。

异体脐带间充质干细胞对大鼠心脏移植的免疫调节

背景:有资料表明骨髓间充质干细胞可延长小鼠和狒狒异体皮肤移植存活时间,降低造血干细胞移植后急性和慢性移植物抗宿主病的发生,但目前尚未见关于大鼠脐带间充质干细胞用于心脏移植减少排斥反应的报道。目的:观察异体脐带间充质干细胞对大鼠心脏移植的免疫调节作用。方法:DA大鼠20只作为供体,Lewis大鼠20只作为受体,均随机分为2组,即药物干预组、对照组,每组供受体大鼠各10只。采用双套管法将供体大鼠的左肺动脉和无名动脉分别与受体大鼠心脏的颈外静脉和颈总动脉在显微镜下行端端吻合,建立异位心脏移植模型。Wistar孕鼠1只,采用胶原酶消化法分离培养脐带间充质干细胞。造模后,细胞移植组经尾静脉注射脐带间充质干细胞,对照组同法注射氯化钠注射液。检测移植心脏的存活时间,采用心脏移植急性排斥反应诊断标准对移植心脏进行组织病理学评分,苏木精-伊红染色观察移植心脏淋巴细胞浸润程度。结果与结论:与对照组比较,细胞移植组移植心脏存活时间显著延长(P=0.001),急性排斥反应病理学评分显著降低(P=0.0004)。对照组心肌组织内有大量淋巴细胞和单核细胞浸润,细胞移植组心肌组织内有少量淋巴细胞浸润,心肌间质轻度水肿。结果证实大鼠脐带间充质干细胞可诱导心脏移植免疫耐受,减轻免疫排斥反应,延长心脏存活时间。

亲属肾移植供者77例移植前医疗评估

背景:活体肾移植不仅关系到受者的预后,更重要的是供者的健康利益。在活体肾脏捐赠前,所有的肾脏捐赠候选者必须接受完整的医学和心理学评估,以确保捐赠者的安全。目的:总结分析亲属肾移植供者捐肾前的评估经验。方法:回顾性分析解放军总医院第二附属医院器官移植中心2006-01/2008-03开展的77例亲属肾移植供者捐肾前医疗评估的临床资料。其中,2008-01-20以前依据英国活体供肾指南(2005年版)进行,2008-01-20以后依据活体供肾移植博鳌会议共识进行。依据一般情况、高血压、糖尿病、心血管系统、传染病学、年龄、肥胖、蛋白尿、肾血管、肾功能、供受者HLA分型及医学伦理等12个方面进行循序渐近的系统评估。结果与结论:77例患者中69例评估合格,成功捐赠,移植后痊愈出院,未出现并发症。8例未捐赠者原因:2例高血压合并终末器官损害,2例为糖尿病,1例供肾术中病理证实为恶性肿瘤,1例为乙型肝炎活动期,1例受其妻子家庭阻力,医学伦理未通过。捐赠者平均年龄45.3岁,≥60岁7例,50～59岁24例,30～49岁29例,<30岁9人。父母捐赠给孩子39例,孩子捐赠给父母1例,兄弟姐妹间捐赠19例,三代旁系血清7例,夫妻间捐赠3例。69例成功捐赠者中血压>140/90mmHg(1mmHg=0.133kPa)者8例;成功捐赠者中无自觉心肌缺血症状但心电图ST-T改变者14例;空腹血糖异常者3例;体质量指数平均为23.05kg/m2,均<30kg/m2;传染病评估乙肝表面抗体和乙肝核心抗体阳性者3例,行抗体滴度测定均<500IU/L;肾图评估1.73m2标准体表面积校正后肾小球滤过率为(137.3±28.5)mL/min,左右肾间肾小球滤过率差异无显著性意义(P<0.05);血管三维CT提示左肾多根动脉者3例,占成功捐赠者的4%;术中与血管三维CT不相符者1例,占1%。结果提示,活体肾移植供者评估的首要目的就是确保捐赠者的适应性、安全性和健康性。为了避免捐赠者重要医疗信息的遗漏和不必要的侵袭性检查,以及合理降低医疗评估费用,供者评估应依据熟悉的、公认的,以临床证据为基础的合理程序进行,并灵活性掌握捐赠者评估程序。

同种异体肾移植患者血清细胞因子与亚临床排斥反应的相关性研究

目的:探讨同种异体肾移植术后患者血清细胞因子(IL-2、IL-6、IL-8、IL-10)表达与亚临床排斥反应的关系。方法:采用ELISA检测15例亚临床排斥反应患者(亚临床排斥反应组)血清细胞因子,并与23例无排斥反应患者(无排斥反应组)和20例健康体检者(正常对照组)进行比较。结果:肾移植患者术后4个月肾移植患者血清IL-2、IL-6、IL-8、IL-10水平高于正常对照组,其中IL-6、IL-8、IL-10与正常对照组和无排斥组相比有统计学差异(P<0.05);亚临床排斥反应组干预后血清细胞因子水平明显降低,均达到正常值,其中IL-6、IL-8、IL-10与干预前比较有统计学差异(P<0.05)。结论:术后IL-10与IL-6、IL-8的动态检测,对于及早发现亚临床排斥反应和干预疗效的评估具有重要意义。

肝移植术后急性肺损伤特点

目的：观察分析肝移植术后急性肺损伤发生原因及处理措施。方法：选择2000-02/2005-05在解放军总医院第二附属医院接受原位肝移植患者130例,均签署手术知情同意书。术毕给予呼吸机控制呼吸,自主呼吸恢复后给予呼吸机辅助呼吸,平均6.8h脱呼吸机,之后双鼻导管吸氧3-10L。定时测定血气分析、肝功能、肾功能、血常规、凝血4项、血乳酸、血氨、电解质及血糖,每日做痰、胆汁、腹腔引流液培养。防治细菌感染,预防真菌及病毒感染。进行抗排斥反应、保肝、营养代谢支持、利尿与扩血管等综合治疗。结果：①肝移植受者130例术后48h内死亡3例,术后3-10d内死亡9例均并发肺部感染,存活病例发生肺部感染28例。存活118例发生急性肺损伤87例（占73.7%）,经治疗后各脏器均恢复正常。②患者发生急性肺损伤时间多为术后两三天,其中29例发生急性呼吸窘迫综合征,大部分经加大吸氧浓度或面罩吸氧,增加氧气雾化吸入次数等综合救治措施均恢复。③术中出血量为2000-8000mL者共76例,发生急性肺损伤69例;术中出血量〉8000mL者18例,术后均出现急性肺损伤。急性肺损伤与术后出量（尿量、T管、腹腔引流）关系比较大。④原发病为肝炎肝硬化肝功能失代偿患者急性肺损伤的发病率最高,显著高于原发病为慢性肝炎肝硬化肝癌患者（85%,39%,P〈0.05）。结论：肝移植术后急性肺损伤发生与原发疾病、手术损伤、术中血流动力学不稳定、术后出量有一定关系。临床除氧疗外,应做好全身综合治疗。

单中心长期血液透析人群生活质量横断面研究

目的对单中心终末期肾病患者的健康相关的生活质量进行横断面研究,分析这一特殊人群的生活质量特征。方法病例选择自解放军总医院第二附属医院器官移植中心肾内科维持性血液透析6个月以上的患者,采用KDQOL-SFTM1．3量表进行横断面问卷调查,根据KDQOL-SFTMVeraion1．3／1．2:AManualforuseandscoring计分,采用TheKidneyDiseaseQualityofLife(KDQOLTM)WorkingGroup提供的KDQOL-SFTMVersion1．3ScoringProgram(v3．O)登记汇总数据,应用SSPS分析数据。结果大部分患者的生活质量分值偏低,女性比较男性在SexF和SoS两个领域分值高,具有统计学意义,全部患者数据的临床相关性分析显示患者的年龄和营养状况对生活质量分值有较大影响。结论患者健康相关的生活质量整体水平较低,建议把改善健康相关的生活质量做为评价医疗水准的重要参数。

供体外周血干细胞在活体肾脏移植中的应用研究

目的研究活体肾移植受体接受全身淋巴结照射(TLI)预处理基础上输注供体外周血干细胞(PBSCs)后嵌合体形成情况及其与肾移植的相关性。方法5对供受体进入本研究。供体平均年龄40岁,受体平均年龄27岁。HLA-A、B、DR6个抗原中4个抗原错配1例,3个抗原错配2例,1个抗原错配2例。TLI治疗从移植手术前5天开始,90cGy/d,共5天。术中和术后的免疫抑制药物方案与同时期的活体或尸体肾移植相同,但剂量略减少。供体的PBSCs动员使用瑞雪新,150μg/d,共5天,PBSCs采集和输注共2次,分别在移植手术后的第4、7天。术后应用PCR-SSP检测外周血嵌合体阳性率和持续时间。观察免疫抑制药物的使用情况、移植肾状态和急性排斥反应频率及GVHD等。结果供体经5天的G-CSF动员后,采集的PBSCs平均数为34×106。移植术后1个月5例受体外周血中均可检测到供体的HLD-DR抗原成分。2个月后4个HLA抗原错配,其中HLA-DR均错配的受体外周血中嵌合体PCR检测阴性,3个月后HLA-DR均错配和1个HLA-B错配的受体外周血嵌合体检测阴性,受体3、4和5的外周血中供体DNA仍为阳性。PBSCs输注后没有发生GVHD,没有任何感染发生。观察期内没有发生移植肾排斥反应,移植肾功能正常。免疫抑制剂使用量低于同时期的其他活体肾脏移植和尸体肾脏移植受体。结论非清髓性的TLI治疗可以促进供体PBSCs植入受体造血系统,诱导产生造血嵌合体,而造血嵌合体的形成可以减少肾脏移植的排斥反应,减少免疫抑制剂的应用,提高移植物的长期存活率。PBSCs的采集和输注简便、有效,痛苦小,是一种理想的造血干细胞输注源。

肝移植后真菌感染9例次分析

为了探讨肝移植后真菌感染的诊断和治疗,回顾分析解放军总医院第二附属医院器官移植中心2007-09/2008-12收治的52例肝移植中,8例肝移植受体术后发生真菌感染的诊治情况。52例肝移植患者中,8例患者真菌感染9例次(1例患者发生2次感染),感染率15%(8/52)。感染时间发生在肝移植后2～5个月,感染好发的部位依次为肺(67%,6/9),泌尿系统(22%,2/9),肠道(11%,1/9)。病原菌中白色念珠菌感染占6例次,光滑念珠菌感染占2例次,曲霉菌感染占1例次。在8例患者中6例经抗真菌感染治疗顺利康复,2例患者死亡。可见真菌感染是肝移植术后常见并发症之一,病死率较高,早期诊断和治疗是治愈真菌感染的关键。

肾移植术后受者人巨细胞病毒巢式PCR检测

目的探讨巢式PCR检测肾移植术后受者人巨细胞病毒(HCMV)DNA的方法,并与ELISA法进行比较。方法针对HCMV AD169株IEA基因设计两对巢式PCR引物,对50例肾移植术后受体血、尿标本进行HCMV DNA检测。分离血清作ELISA检测IgGI、gM。结果血液巢式PCR阳性率56%,尿液阳性率46%;ELISA法阳性率:IgG 82%,IgM28%,IgG+IgM 28%。两种方法的阳性率进行统计学分析,P<0.05,存在统计学差异。结论巢式PCR是一种敏感、快速诊断HCMV感染的方法,灵敏度及特异性均高于传统ELISA法,并能弥补ELISA的假阴性。不仅为临床HCMV疾病的诊断与治疗,同时也为选择普遍性预防抑或症状发生前的预先治疗提供可靠的实验室依据。

肾移植术后环孢素A肝毒性防治回顾性分析

目的分析肾移植术后环孢素A(CsA)及普乐可复(FK506)等免疫抑制剂的肝毒性以及防治措施。方法分析346例肾移植患者术后90天内静脉血谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(BILT)、直接胆红素(BILD)含量,判定患者肝功能状况;以及相应的治疗措施及其效果,综合判定治疗措施的合理性。结果CsA组肝功能异常发生率为26.90%,术后两周ALT、AST和BILD明显升高(P<0.01),BILT升高(P<0.05);FK506组肝功能异常发生率为7.14%,ALT、AST、BILT和BILD略升高(P>0.05);骁悉(MMF)和布累迪宁(MRZ)组肝功能异常发生率无明显区别。18例转换FK5061周后,ALT、AST、BILT和BILD均明显降低(P<0.01)。结论CsA肝毒性为肾移植术后常见并发症,FK506肝毒性明显低于CsA;密切检测CsA浓度以及依据CsA浓度下限用药是预防肝毒性的关键;对于严重肝功能障碍患者,转换FK506是有效的治疗途径。

冷保存-再灌注损伤对大鼠移植肝胆管上皮细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响

背景:移植肝胆管上皮细胞凋亡是影响肝移植后胆道功能恢复的因素之一,调控基因bcl-2/bax可能对胆管上皮细胞的生存起到决定作用。目的:观察缺血-再灌注损伤后大鼠肝内胆管上皮细胞的凋亡及调控基因bcl-2/baxmRNA表达的变化。设计、时间及地点:动物实验,细胞形态学观察,于2008-02/08在解放军第三军医大学西南医院肝胆外科研究所实验室完成。材料:健康雄性Wistar大鼠100只,随机分为3组:供肝冷保存1h组40只,冷保存12h组40只,对照组20只。方法:供肝冷保存1,12h组,组内随机配对,体质量相对较轻的大鼠做为供体,供肝置于4℃器官保存液中,分别保存1、12h后行原位肝移植,对照组只行开、关腹手术。在"两套袖法"基础上,以"支架法"建立动脉化大鼠原位肝移植模型,供受体肝总动脉采用改良"支架法"进行端端吻合,重建肝动脉血供。主要观察指标:分别于移植后1,3,7,14d检测血清总胆红素、碱性磷酸酶及肝内胆管上皮细胞的凋亡,实时荧光定量RT-PCR法检测胆管上皮细胞内bcl-2mRNA和baxmRNA的表达。结果:保存1h组移植后1,3d可见轻度胆道损伤的血清学及病理学表现,肝内胆管上皮细胞凋亡指数分别为(4.62±0.23)%,(3.42±0.22)%,(2.91±0.23)%,(2.87±0.16)%,且在移植后7d即与对照组无明显差异。在保存12h组移植后1,3,7d,胆汁郁积征象明显,伴有严重的胆管损伤病理学改变,且肝内胆管上皮细胞凋亡指数明显高于保存1h组和对照组,分别为(6.51±0.33)%,(8.52±0.36)%,(3.51±0.27)%,(2.91±0.28)%。在移植后各时相点,保存1h组肝内胆管上皮细胞内bcl-2mRNA/baxmRNA比值分别为(1.12±0.12)%,(1.34±0.13)%,(1.51±0.14)%,(1.60±0.15)%,在移植后7d即接近对照组水平,而保存12h组则为(0.90±0.08)%,(0.79±0.02)%,(1.36±0.12)%,(1.59±0.14)%,在移植后7d仍明显低于保存1h组和对照组,且与肝内胆管上皮细胞凋亡指数显著负相关(P=0.029)。结论:冷保存时间延长导致胆道功能严重损伤,导致肝内胆管上皮细胞内bcl-2mRNA/baxmRNA下调,促进移植后早期肝内胆管上皮细胞的凋亡。

肾移植受者外周血IL-2 ELISA检测与PBLIL-2 mRNA实时定量PCR检测的比较

目的研究ELISA检测肾移植受者外周血IL-2水平与实时定量PCR(RT-FQ-PCR)检测外周血淋巴细胞(PBL)IL-2 mRNA表达结果的一致性和准确性。方法对20例肾移植受者,采用ELISA和RT-FQ-PCR法分别测定术前、术后7天谷浓度(C0)和峰浓度(C2)时间外周血IL-2和PBLIL-2 mRNA水平;同时选取15例慢性移植肾肾病(CAN)和5例非CAN患者,测定方法同上。结果外周血IL-2水平与PBLIL-2 mRNA表达在术前和手术1年后呈正相关(R2分别为0.58和0.40,P均<0.01),在术后7天C0及C2时间无明显线性关系(R2分别为0.15和0.08,P均>0.05)。术后7天,C2对应外周血IL-2和PBLIL-2 mRNA表达抑制率分别为16.31%±9.59%和69.92%±7.10%;C2与IL-2 mRNA表达抑制率呈正相关,与IL-2抑制率无明显相关性(R2=0.02,P>0.05)。IL-2 mRNA表达抑制率与IL-2抑制率无明显相关性。结论外周血IL-2ELISA检测可以用于肾移植受者术前和术后稳定期免疫状态检测以及免疫耐受研究等,但不能用于肾移植受者围手术期免疫状态和C2效应检测。

肝移植围手术期110例中10例死亡原因分析

目的:回顾性分析110例成人肝移植病例的临床资料,以期筛选出影响肝移植围手术期死亡率的危险因素。方法:选择2005-01/2007-12在解放军总医院第二附属医院器官移植中心完成肝移植的资料完整、符合统计学要求的受者110例,均为经典式同种异体原位肝移植,尸体供肝。其中移植后存活﹤30d的10例患者列入围手术期死亡组,移植后存活≥30d的100例患者列入生存组。对影响两组患者移植后转归的因素进行比较分析,并对差异显著的影响因素进行Logistic回归分析。结果:单因素分析结果显示,死亡组受者的终末期肝病模型评分、凝血酶原国际标准化比值、移植术中出血量及输血量均高于生存组(P<0.01),凝血酶原活动度低于生存组(P<0.05)。Logistic回归分析表明,移植前终末期肝病模型评分、凝血酶原活动度是肝移植围手术期死亡率的独立危险因素。结论:移植前终末期肝病模型高评分、凝血酶原活动度低是导致肝移植患者围手术期死亡的主要原因,改善移植前受者的危重病情及凝血功能障碍能够降低肝移植围手术期的死亡率。

MSCs诱导移植物免疫耐受的研究进展

上世纪60-80年代，Friedenstein和他的同事发现骨髓细胞培养后有一种贴壁生长的成纤维样细胞可以在体内成骨，称之为骨髓间充质干细胞（MSCs）。随后发现，作为多系细胞的祖细胞，MSCs可以从脂肪组织、胎肝和脐带等多种组织中分离出来，在体内外可以分化为多种间充质组织，故可用于再生医学领域。另外，MSCs还具有免疫调节活性，在体外阻断T细胞增殖，