HBV/HIV共感染抗反转录病毒治疗后乙型肝炎临床治愈的研究进展

由于HBV和HIV有类似的传播途径,HBV/HIV共感染现象十分普遍。值得注意的是,在接受抗病毒治疗后,HBV/HIV共感染患者中HBsAg清除率显著高于单独感染HBV的人群。然而,对于此现象背后的影响因素和具体机制,现有研究较少且结果存在差异。本文回顾了国内外关于HBV/HIV共感染的流行病学研究、临床特点以及乙型肝炎(简称乙肝)临床治愈率高的影响因素,并对未来的研究方向和趋势进行了展望。推测HBV/HIV共感染患者乙肝临床治愈率高可能与感染HBV的时间及基因型有关,但是尚未有明确的免疫学机制解释。

copGFP和Puro^(R)双标记基因慢病毒融合表达载体的构建及应用

目的:构建具有绿色荧光蛋白(copGFP)和嘌呤霉素抗性基因(PuroR)融合表达双筛选标记的慢病毒过表达载体,检测其嘌呤霉素抗性和绿色荧光蛋白表达的特性。方法:从pCDH-CMV-MCS-copGFP载体中扩增copGFP编码区DNA序列,从pLKO.1载体中扩增Puro^(R)编码区DNA序列,运用重组PCR方法,扩增copGFP与Puro^(R)基因融合编码序列并克隆至经BamHⅠ+SalⅠ双酶切的pCDH-CMV-MCS-copGFP载体片段中,构建含copGFP和Puro^(R)融合表达双筛选标记的慢病毒过表达载体;载体的融合标签序列进行测序确证;将该载体用辅助包装质粒PLP1、PLP2、VSVG在293T细胞中包装成慢病毒后感染肝癌细胞MHCC97H,检测感染细胞对嘌呤霉素的抵抗作用以及绿色荧光蛋白的表达情况;为验证该载体表达外源目的基因的有效性,将Sp1编码区DNA序列插入该载体中包装成慢病毒,用对照及表达Sp1的慢病毒感染肝癌细胞MHCC97H,感染细胞经1 mg/ml嘌呤霉素筛选7 d后获得稳定感染细胞株,提取稳定感染细胞的总RNA及总蛋白,分别运用RT-qPCR和Western blot方法检测Sp1在对照及表达Sp1的慢病毒感染的肝癌MHCC97H细胞中的mRNA和蛋白表达水平的差异。结果:成功构建含copGFP和Puro^(R)融合表达双筛选标记的慢病毒过表达载体;该载体与辅助质粒包装出的慢病毒感染肝癌细胞后,感染细胞同时具有嘌呤霉素抗性和表达绿色荧光蛋白特性;将Sp1编码序列插入该载体,包装慢病毒并肝癌细胞,Sp1的mRNA水平对照细胞相比分别升高3.3倍,蛋白水平升高2.2倍(P<0.01)。结论:成功构建含copGFP和Puro^(R)融合表达双筛选标记的慢病毒过表达载体,该载体编码的融合双标记基因具有嘌呤霉素抗性和绿色荧光蛋白表达的特性,可高水平表达长片段的目的基因。