组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA抑制结肠癌HT29细胞增殖作用的机制研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制TSA对结肠癌HT29细胞增殖能力的影响及其作用机制。方法以结肠癌HT29细胞为研究对象,采用浓度梯度TSA处理并计算其对上述细胞的IC50值,并采用MTT法观察不同浓度TSA对结肠癌HT29细胞增殖能力的影响;采用流式细胞术观察不同浓度TSA对结肠癌HT29细胞周期的影响;Western blot法观察不同浓度TSA对结肠癌HT29细胞中Ku70蛋白乙酰化水平以及对细胞周期蛋白CyclinB1、CDC25C和周期抑制蛋白P21及其上游调控蛋白P53表达的影响。结果MTT法和流式细胞术检测结果表明,TSA可浓度依赖性抑制结肠癌HT29细胞的增殖并促进细胞发生G2/M期阻滞;此外,Western blot检测结果表明TSA可明显上调结肠癌HT29细胞中Ku70蛋白的乙酰化水平,同时上调周期抑制蛋白P21和P53的表达,并抑制细胞周期相关蛋白CyclinB1和CDC25C的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂(TSA)可能通过促进结肠癌HT29细胞中Ku70蛋白乙酰化,抑制其与DNA结合的亲和力而抑制DNA损伤修复,进而促进结肠癌HT29细胞发生周期阻滞而发挥抗结肠癌细胞增殖并促进其周期阻止的作用,为以细胞周期调控为靶点的肿瘤治疗策略提供理论依据和实验基础。

Ku70乙酰化修饰介导曲古霉素A(TSA)促结肠癌细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨Ku70乙酰化修饰介导曲古霉素A(TSA)促结肠癌细胞凋亡的作用和机制。方法:选取结肠癌HCT116细胞和SW620细胞,体外培养并采用浓度梯度TSA处理。MTT法观察TSA对细胞的IC 50和活力的影响;Western blot和免疫荧光染色观察TSA对结肠癌HCT116细胞和SW620细胞中Ku70、acetyl-Ku70蛋白水平及胞内分布的影响;流式细胞术检测TSA对结肠癌HCT116细胞和SW620细胞凋亡的影响;Western blot检测TSA对结肠癌HCT116细胞和SW620细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax和Bcl-2表达的影响。结果:MTT结果显示TSA可浓度依赖性抑制结肠癌HCT116细胞和SW620细胞活力且其IC 50值分别为1.023μmol/L和1.076μmol/L(P<0.05);Western blot和免疫荧光染色结果显示TSA可显著上调结肠癌HCT116细胞和SW620细胞中acetyl-Ku70的蛋白水平并促进其核转入(P<0.05);流式细胞术结果表明TSA可促进结肠癌HCT116细胞和SW620细胞凋亡(P<0.05);此外,Western blot结果显示TSA可明显上调结肠癌HCT116细胞和SW620细胞中凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.05)。结论:结肠癌HCT116细胞和SW620细胞中,TSA可能通过增强Ku70乙酰化并促进其核转入,发挥促凋亡作用,为以Ku70翻译后修饰调控为靶点的肿瘤治疗提供新策略和理论依据。

伏立康唑的治疗药物监测在结核病患者中的应用

目的探寻伏立康唑的血药浓度监测对同时联用利福霉素类药物与伏立康唑的结核病患者的意义。方法对伏立康唑联用及从未联用利福霉素类药物的患者,进行伏立康唑血药浓度测定,探寻利福霉素类药物对伏立康唑谷浓度的影响强度。分析不同分组条件下伏立康唑血药浓度及达标率的差异,评估血药浓度与不良反应及疗效的相关性。结果49例患者中联用利福霉素类18例,未联用31例,平均谷浓度为(2.30±1.86)mg/L。以1.0~5.5mg/L为达标范围,30例患者达标,其中联用利福霉素类药物4例,未联用26例。联用患者的平均谷浓度为(1.39±2.00)mg/L,未联用患者的平均谷浓度为(2.82±1.54)mg/L,两组间有显著性差异(P=0.008),联用患者伏立康唑的血药浓度达标率(22.22%)较未联用患者(83.87%)明显降低(P<0.001)。联用利福平与联用利福喷丁,总体达标率无显著性差异(P>0.05),但平均谷浓度利福平组显著高于利福喷丁组(P=0.024)。6例(12.24%)患者出现了不良反应,均未联用利福霉素类药物,平均谷浓度为(5.96±0.66)mg/L;治疗总有效率为69.4%,未联用患者90.3%,联用患者33.3%,两组间差异显著(P<0.001)。结论利福霉素类药物会严重降低伏立康唑血药浓度,不同利福霉素之间对伏立康唑血药浓度影响的差异不显著。对于应用利福霉素类药物的结核病患者,合用伏立康唑时应监测伏立康唑的血药浓度,据此调整剂量,以提高浓度达标率,使治疗安全有效。在浓度达标的前提下,利福霉素类药物对伏立康唑的影响不会影响其临床疗效,临床上需密切监护谷浓度>5mg/L患者不良反应的发生。

注射用多粘菌素B致皮肤色素沉着1例分析

目的探讨临床药师在参与多粘菌素B致皮肤色素沉着的诊断和药物治疗中的作用。方法临床药师参与1例色素沉着患者的诊治过程,根据患者的病情变化,与临床医师共同协商讨论,分析患者出现不良反应的原因,提出药学建议,制定适宜的治疗方案。患者出院后临床药师进行随访,追踪病情转归。结果医师在诊疗过程中采纳临床药师建议,皮肤色素沉着是由多粘菌素B所致,停用后症状未加重但皮肤颜色基线无变浅。结论患者在使用多粘菌素B用药期间,一旦出现皮肤变黑,色素沉着,可以考虑为药品不良反应,临床医师和临床药师需权衡使用多粘菌素B的利弊来平衡疗效和不良事件。同时需谨慎考虑与其他可能导致皮肤样症状的药物合用。临床药师将药学专业技能优势和临床实践相结合,能够提高疾病确诊率、药物治疗水平及患者用药的安全性与有效性。

国产与进口伏立康唑用于肾移植术后肺部真菌感染患者的疗效及安全性比较

目的:探讨国产伏立康唑与进口伏立康唑用于肾移植术后肺部真菌感染患者的疗效及安全性。方法:回顾性选取2018年9月至2020年5月中国人民解放军总医院第八医学中心肾移植术后可疑或确诊为肺部真菌感染的患者60例,按照治疗药物的不同分为国产伏立康唑组和进口伏立康唑组,每组30例。比较两组患者的临床疗效、不良反应发生情况、平均治疗时间和治疗费用的差异。结果:进口伏立康唑组患者的治疗有效率为83.3%(25/30),明显高于国产伏立康唑组的63.2%(19/30),差异有统计学意义(χ^2=5.08,P=0.024)。进口伏立康唑组、国产伏立康唑组患者的不良反应发生率分别为13.3%(4/30)、20.0%(6/30),差异无统计学意义(χ^2=0.48,P=0.49)。进口伏立康唑组患者的平均治疗时间为(19.35±5.47)d,平均治疗费用为(35710.21±4762.18)元;国产伏立康唑组患者的平均治疗时间为(21.47±6.25)d,平均治疗费用为(12248.05±690.01)元;进口伏立康唑组患者的治疗费用明显高于国产伏立康唑组,差异有统计学意义(t=29.03,P<0.001)。结论:对肾移植术后肺部真菌感染的患者,进口伏立康唑在疗效上优于国产药品,安全性与国产药品未见显著性差异,但治疗费用明显高于国产药品。

PCI术后抗血小板药物抵抗患者的药学监护切入点

临床药师从基因检测、文献回顾、药物相互作用等多角度切入,对1例冠状动脉介入治疗术后患者实行药学监护,并分析其发生抗血小板药物抵抗的原因。调整用药方案后,患者症状好转,生活质量显著改善,随访10个月未发生任何不适症状与药物不良反应。药师参与药物治疗并实施药学监护,对减少或避免心血管缺血事件的发生具有重要的临床意义。

牛贝消核提取物血清药物化学的初步研究

目的:对抗结核中药牛贝消核提取物进行血清药物化学初步研究,通过分析入血成分,探讨牛贝消核发挥药效的物质基础。方法:2018年4月至2019年6月在中国人民解放军总医院第八医学中心全军结核病研究所制备桔梗、白及、鱼腥草和牛蒡子标准品溶液及牛贝消核供试品;55只小鼠随机分为11组,每组5只:1~5组为牛贝消核提取物组,每只小鼠每天给予1.25 mg/g牛贝消核提取物灌胃;6~10组为牛蒡苷组,每只小鼠每天给予0.3 mg/g牛蒡苷灌胃;11组为空白对照组,给予蒸馏水灌胃;连续灌胃7 d。于末次给药后0.5、1、2、4、6 h小鼠眼眶后静脉丛取血,制备血清供试品溶液。采用高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)分析各中药标准品、牛贝消核提取物供试品及各组小鼠给药后血清供试品溶液,分析色谱图中各物质保留时间;然后参照对照品初步鉴定牛贝消核提取物的入血成分。结果:通过牛贝消核提取物和各药材标准品重叠色谱图中可以看出,牛贝消核提取物保留时间为7.1 min处的色谱峰所对应的物质来源于桔梗,保留时间为13.5 min、15.5 min、21.2 min处的色谱峰所对应的物质来源于白及,保留时间为16.3 min的色谱峰所对应的物质来源于牛蒡子,并进一步鉴定为牛蒡苷化合物。牛贝消核提取物和牛蒡苷给药后血清样本与空白血清比较,均在17.5~22.5 min发现有吸收峰。结论:HPLC分析可作为牛贝消核中桔梗、白及、鱼腥草和牛蒡子提取的质量控制方法,检出的牛贝消核提取物血中移行成分可能是牛蒡苷代谢产物,其余药效成分入血微量未检出。

高效液相色谱-串联质谱法测定人脑脊液中一线抗结核药浓度

目的:建立同时测定人脑脊液中异烟肼、利福平、吡嗪酰胺及乙胺丁醇等4种抗结核药浓度的高效液相色谱-串联质谱(high performance liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry,HPLC-MS/MS)方法,实现对结核性脑膜炎患者脑脊液中抗结核药浓度的准确测定,为临床用药提供依据。方法:色谱柱为Agilent Poroshell 120SB C18柱(4. 6 mm×50 mm,2. 7μm),甲醇-0. 2%醋酸溶液为流动相(梯度洗脱),采用电喷雾离子源,以正离子多反应监测方式进行检测。以对乙酰氨基酚为内标,脑脊液经甲醇沉淀蛋白处理后检测。异烟肼m/z 138. 0→121. 0,利福平m/z 823. 2→791. 2,吡嗪酰胺m/z 124. 1→79. 0,乙胺丁醇m/z205. 2→116. 1,对乙酰氨基酚m/z 152. 0→110. 0。分析时间为12 min。结果:脑脊液中内源性物质对测定无干扰,基质效应小。异烟肼、利福平、吡嗪酰胺及乙胺丁醇的线性范围分别为0. 196~9. 8、0. 6~30. 0、1. 0~50. 0及0. 16~8. 0μg/ml,线性范围内线性关系良好。本方法对各药物日内、日间精密度的RSD均<10%,提取回收率高。结论:本方法稳定性好,特异性强,测定结果准确,适合临床脑脊液样本的高通量分析。

去乙酰化酶抑制剂TSA介导Ku70乙酰化对结肠癌HT29细胞凋亡和自噬的影响

目的:探讨不同浓度组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对结肠癌HT29细胞的增殖、凋亡和自噬影响及其机制研究。方法:取对数生长期人结肠癌HT29细胞,采用MTT法检测不同浓度TSA处理对其细胞活力影响,并根据IC50值确定适宜给药浓度;采用流式细胞术检测不同浓度TSA处理后结肠癌HT29细胞的凋亡情况;Western blot验证空白对照组与TSA给药处理组中凋亡标志蛋白Ku70、acetrl-Ku70、Caspase3、Bax、Bcl-2和自噬标志蛋白LC3和Beclin1的表达。结果:MTT法实验结果表明TSA对结肠癌HT29细胞具有时间和浓度依赖性抑制作用,根据IC50=1.12μM,本研究中TSA的给药浓度为0.5μM和1μM;流式细胞凋亡检测结果表明TSA能够显著促进结肠癌HT29细胞凋亡,且其促凋亡作用存在浓度依赖性;此外,Western blot检测结果证实,与空白对照组相比,TSA给药处理可显著上调上述细胞中acetrl-Ku70以及促凋亡蛋白Caspase3、Bax和自噬标志蛋白LC3和Beclin1的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.05)。结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂(TSA)的体外抗结肠癌细胞的增殖、促进细胞凋亡和自噬作用与其上调Ku70蛋白乙酰化密切相关,有望成为临床潜在抗癌靶点。

曲古霉素A通过调控Ku70乙酰化水平对结肠癌HCT116细胞上皮间充质转化和侵袭转移的影响

目的探讨曲古霉素A(TSA)通过调控Ku70乙酰化水平对结肠癌HCT116细胞上皮间充质转化(EMT)和侵袭转移的影响。方法体外培养HCT116细胞,采用MTT法筛选并确定TSA的最佳给药浓度;采用Western印迹(WB)检测对照组(DMSO处理组)和TSA处理组细胞中Ku70及其乙酰化水平以及EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(cadherin)、N-钙黏蛋白、Snail和Slug的表达情况;采用Transwell-迁移和侵袭实验观察TSA介导Ku70乙酰化对HCT116细胞侵袭和转移能力的影响。结果 MTT检测结果表明TSA可明显降低HCT116细胞的活性(P<0.05);WB结果显示,TSA可明显上调HCT116细胞中acetyl-Ku70的蛋白水平并抑制其EMT,表现为上调上皮细胞标志蛋白E-钙黏蛋白的表达,并下调EMT标志蛋白N-钙黏蛋白及EMT相关转录因子Snail和Slug的表达(P<0.05);此外,Transwell-迁移和侵袭实验结果表明,TSA可明显抑制HCT116细胞的迁移和侵袭(P<0.05)。结论 TSA可能通过上调HCT116细胞中Ku70乙酰化水平,降低Ku70与DNA的亲和力,从而抑制肿瘤细胞DNA的损伤修复能力,发挥抑制结肠癌细胞EMT和迁移侵袭的作用,为临床抗结肠癌转移治疗提供新的思路和作用靶点。

HPLC-MS/MS检测万古霉素血药浓度方法的建立及应用

目的鉴于万古霉素的治疗指数低,易引起耳、肾毒性等,研究建立一种测定万古霉素血药浓度的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)方法,满足临床对其进行常规治疗药物监测需求。方法以Agilent Poroshell120SB C18色谱柱(4.6 mm×50 mm,2.7μm)为分析柱,甲醇-0.2%乙酸溶液为流动相,梯度洗脱,采用电喷雾离子源(ESI),以正离子模式,多重反应监测(MRM)方式进行检测。以去甲万古霉素为内标,万古霉素:m/z 725.7→144.1,去甲万古霉素:m/z 717.8→144.1。样本经甲醇沉淀蛋白后进样分析,进样量5μl,分析时间为7.5 min。结果样本中内源性物质对测定无干扰,万古霉素线性范围为1.0~102.0μg/ml,线性范围内线性关系良好。所建方法日内、日间精密度(RSD)及准确度(RE)均<15.0%,提取回收率81.0%~85.0%,基质效应小,稳定性好。用HPLC-MS/MS方法和化学发生微粒子免疫检测法(CMIA)分别对50例样本进行测定,CMIA法所测结果均值较HPLC-MS/MS方法所测结果均值高3.3μg/ml,经统计学分析二者无显著性差异(t=1.935,P=0.056),以HPLC-MS/MS方法测得的结果对CMIA法测得的结果进行相关性分析,二者具有一定的相关性(r=0.9463)。结论研究建立的测定万古霉素血药浓度的HPLC-MS/MS方法,特异性好,准确度高,稳定性好,线性范围宽,且在线性范围内线性关系良好,可满足高通量测定。

抗结核药物性肝损害的研究进展

抗结核药物性肝损害(ATLI)是抗结核治疗中较常见的不良反应。其发生机制较复杂,可能与药物及其代谢产物的直接毒性作用和机体对药物的特异质反应有关。药物干扰肝脏的血流,常表现为无症状性转氨酶升高,也可呈急性肝炎表现,部分患者甚至发生肝衰竭而危及生命。出现肝功能损害往往使患者依从性降低,甚至导致抗结核治疗中断,进而影响抗结核治疗的效果;不同地区、不同抗结核药物引起的肝损害其发病率也不同。在我国,经常使用吡嗪酰胺(PZA)与利福平(RFP),是抗结核药物肝损害的常见原因。发生肝损害后需密切观察,若采取停药、充分休息、积极保肝治疗等措施,大部分患者可逐渐恢复。然而,对于预防性保肝治疗机制,临床尚缺乏确切的循证医学证据。本文就抗结核药物性肝损害的研究进展进行了综述。

枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊联合泮托拉唑对UC患者炎性因子、肠黏膜功能及外周血Th17、CD4+CD25+Treg细胞表达的影响

目的:观察枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊联合泮托拉唑对溃疡性结肠炎(UC)患者炎性因子、肠黏膜功能及外周血Th17、CD4+CD25+Treg细胞表达的影响。方法:研究对象选择2014年7月~2018年9月期间来我院香山路门诊部接受诊治的80例UC患者,随机分为联合组(枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊联合泮托拉唑治疗)、对照组(泮托拉唑治疗),各40例。对比两组的疗效、炎性因子、肠黏膜功能及外周血中Th17及CD4+CD25+Treg细胞表达。记录两组治疗期间不良反应发生情况。结果:联合组的临床总有效率为92.50%(37/40),对照组为70.00%(28/40),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应发生率对比无差异(P>0.05)。联合组治疗6个月后血清白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平均明显比对照组低(P<0.05)。联合组治疗6个月后血清D-乳酸含量、二胺氧化酶(DAO)水平均明显比对照组低(P<0.05)。联合组治疗6个月后外周血中Th17细胞表达比对照组低,CD4+CD25+Treg细胞表达比对照组高(P<0.05)。结论:枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊联合泮托拉唑治疗UC患者,可有效改善肠道环境,使外周血中的Th17细胞表达降低,CD4+CD25+Treg细胞表达增加,并缓解炎症状态,临床效果满意且安全性好。

伏立康唑血浆药物浓度高效液相色谱法的建立及应用

目的旨在开发一种测定伏立康唑血药浓度的方法,用于监测同时使用利福霉素类药物的患者体内伏立康唑血药浓度的变化。方法采用高效液相色谱法(HPLC)进行测定,色谱柱为Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为甲醇/0.2%醋酸溶液(V/V=65:35);检测波长为256 nm;流速为1.0 mL/min;血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,室温条件下进样分析。考察方法的专属性、线性、精密度与回收率等,并用建立的方法进行患者体内伏立康唑血药浓度的测定。结果标准曲线在0.204~10.2μg/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),伏立康唑保留时间为4.5 min,日内、日间精密度(RSD)与准确度(RE)均<10%,提取回收率为91.1%~95.1%。服用伏立康唑的21例结核患者中,17例患者联用利福霉素类药物,其中14例(82.4%)患者伏立康唑血药浓度低于有效范围下限;4例未联用利福霉素类药物的患者血药浓度在有效浓度范围内。服用伏立康唑的36例非结核患者中,仅5例(13.9%)患者伏立康唑血药浓度低于有效范围下限。结论本方法准确度高、稳定性好,简便快捷,适合于临床伏立康唑体内样本的高通量测定。