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9型腺相关病毒经圆窗膜转导小鼠耳蜗两种方式的对比研究 被引量:2
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作者 齐景翠 祖勉 +4 位作者 陈妮姗 郭维维 伊海金 杨仕明 余力生 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期469-473,共5页
目的通过圆窗膜显微注射和完整圆窗膜途径转导小鼠内耳携带GFP的9型腺相关病毒(adeno-asso-ciated virus,AAV),比较两种方式的可行性、转染效率以及对听力的影响。方法 18只C57BL/6小鼠,随机分为圆窗膜显微注射组和完整圆窗膜途径组,术... 目的通过圆窗膜显微注射和完整圆窗膜途径转导小鼠内耳携带GFP的9型腺相关病毒(adeno-asso-ciated virus,AAV),比较两种方式的可行性、转染效率以及对听力的影响。方法 18只C57BL/6小鼠,随机分为圆窗膜显微注射组和完整圆窗膜途径组,术前均行听性脑干反应(auditory brain response, ABR)测听,术后两周行ABR测听后取双侧耳蜗基底膜铺片及冰冻切片观察GFP表达情况。结果两种转导方法对小鼠听力均无显著影响,圆窗膜显微注射组转染耳蜗内毛细胞GFP可见表达,转染效率由底转到顶转逐渐降低,无毛细胞损伤,经完整圆窗膜途径转染耳蜗未见GFP表达。结论 9型AAV难以通过完整圆窗膜,通过显微注射方式能够将目的基因高效转导内耳,对内毛细胞有选择特异性,且对听力影响较小,是一种安全有效的内耳转导方式。 展开更多
关键词 9型腺相关病毒 圆窗膜 内耳入路 基因转导
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噪声引起小型猪耳蜗炎症复合体的激活及蛋白质组学研究 被引量:8
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作者 塞娜 袁硕龙 +10 位作者 郭维维 唐朝颖 张桐 赵伟豪 陈林军 徐良慰 时晰 张悦 邱仕伟 杨仕明 韩维举 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期474-482,共9页
目的通过研究炎症复合体及相关通路在猪耳蜗中的激活,探讨噪声介导炎症复合体激活的关键分子机制,为噪声性耳聋的预防和治疗提供新靶点。方法采用小型猪为研究对象,建立噪声性耳聋模型,测试噪声暴露前后动物的ABR阈值,应用蛋白质组学iT... 目的通过研究炎症复合体及相关通路在猪耳蜗中的激活,探讨噪声介导炎症复合体激活的关键分子机制,为噪声性耳聋的预防和治疗提供新靶点。方法采用小型猪为研究对象,建立噪声性耳聋模型,测试噪声暴露前后动物的ABR阈值,应用蛋白质组学iTRAQ、生物信息学、western blot、荧光实时定量PCR等技术,研究噪声刺激引起耳蜗炎症复合体的激活以及作用机制。结果正常小型猪ABR阈值为35.4±2.6 dB SPL,噪声后一天ABR阈值平均提高到72.1±4.1dB SPL,在4k Hz处听力损失最严重,高频听力损失较低频严重;噪声后七天平均ABR阈值恢复至52.8±4.7dB SPL,4k Hz以上听力恢复较低频稍差。iTRAQ实验共鉴定到蛋白质2158种,噪声暴露后较正常组具有显著差异表达的蛋白质共227个,富集在免疫过程的差异表达蛋白包括:ASC, caspase-1, IL-1 beta,CD59等。富集的KEGG pathway包括:阿尔兹海默病信号通路,帕金森病信号通路,MAPK信号通路,,氧化磷酸化通路等。结论噪声暴露后可能激活耳蜗内NLRP3受体介导的炎症复合体,通过caspase-1活化IL-1β、IL-18,并间接促进TNF-α等炎症因子上调,加剧耳蜗内炎症反应,导致耳蜗内重要结构的损伤,这一机制可能是噪声引起听力损失的重要原因。 展开更多
关键词 噪声性耳聋 炎症复合体 蛋白质组学iTRAQ 白介素-1Β NLRP3
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60岁以上门诊老年听力障碍患者听力损失分布的初步研究 被引量:15
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作者 陈艾婷 韩莹 +2 位作者 兰兰 周其友 冀飞 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期445-450,共6页
目的对2017全年来我院行纯音听力检查的所有老年患者的结果进行横断面分析,初步了解现阶段我国局部地区门诊就诊的老年听力障碍患者听力损失的分布特点。方法调查门诊全年内首次就诊的60岁以上(含60岁)老人4794例,男2136例,女2658例,男... 目的对2017全年来我院行纯音听力检查的所有老年患者的结果进行横断面分析,初步了解现阶段我国局部地区门诊就诊的老年听力障碍患者听力损失的分布特点。方法调查门诊全年内首次就诊的60岁以上(含60岁)老人4794例,男2136例,女2658例,男女比例为1:1.24,平均年龄为68.87±5.80岁,中位数为67岁。按年龄分为三组:年轻老年人组(60~74岁)、老年人组(75~89岁)和长寿老人组(90岁以上),分析所有患者纯音测听结果。按照WHO1997年听力障碍分级标准将受试者每耳的听力进行分析。结果全部年轻老年人组3761例,占总例数78.45%,其中男性1615例(42.9%),女性2146例(57.1%);老年人组1000例,占总例数20.86%,其中男性498例(49.8%),女性502例(50.2%);长寿老人组33例,占总例数0.69%,其中男性23例(69.7%),女性10例(30.3%)。研究数据中听力正常:555例(男169例,女386例),占总例数11.58%;轻度听力损失:1007例(男393例,女614例),占总例数21.01%;中度听力损失:1469例(男694例,女775例),占总例数30.64%;重度听力损失:1020例(男540例,女480例),占总例数21.28%;极重度听力损失:743例(男340例,女403例),占总例数15.50%。结论门诊就医的年轻老年人(60~74岁)的数据量明显高于其他两组,年龄组别越高,就诊检查的患者数量随之减少,男女比例逐渐趋于一致。本文纳入的听力结果以轻度、中度、重度听力下降为主,随着年龄的增长,所患听力疾病的损失程度有向愈加严重的趋势。同时三个年龄组的各频率纯音听阈值在跨组时均有10 dB左右的下降。 展开更多
关键词 老年人 老年性聋 听力损失
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HA-bPEI纳米颗粒携带Atoh1质粒豚鼠耳蜗转染观察 被引量:1
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作者 王方园 陈志婷 +5 位作者 邓雄威 吴雁 张悦 杨风波 杨仕明 吴南 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第6期803-807,共5页
目的利用透明质酸(HA)修饰分支型聚乙烯亚胺(b PEI)纳米颗粒制备新型非病毒基因载体,包载Atoh1-EGFP质粒,检测其在活体豚鼠内耳的转染效率。方法质粒提取后按照COOH/N/P=4:10:1合成纳米载体基因复合物并进行表征。利用圆窗膜渗透的方法... 目的利用透明质酸(HA)修饰分支型聚乙烯亚胺(b PEI)纳米颗粒制备新型非病毒基因载体,包载Atoh1-EGFP质粒,检测其在活体豚鼠内耳的转染效率。方法质粒提取后按照COOH/N/P=4:10:1合成纳米载体基因复合物并进行表征。利用圆窗膜渗透的方法,导入实验动物耳蜗。术后7天,通过激光共聚焦扫描观察基底膜铺片和切片了解转染情况,并利用Western Blot和RT-PCR技术分别从蛋白和核酸水平验证转染结果。结果按照本研究实验方法可成功合成表面带有负电荷的纳米级别的基因载体复合物颗粒,导入实验动物耳蜗后7天取材,基底膜铺片的共聚焦显微镜观察结果显示:基底膜内外毛细胞可检测到绿色荧光蛋白显色,基底膜底转的转染效率达81.7±4.71%,中转可达33.8±9.02%。结合冰冻切片结果发现,表达的绿色荧光蛋白主要位于耳蜗底转和部分中转,顶转及内外毛细胞以外区域未见绿色荧光蛋白表达。基底膜细胞未见明显变形损伤。Western Blot和RT-PCR结果也验证了Atoh1基因在基底膜上的成功转染。结论 HA修饰b PEI纳米颗粒制备基因载体可成功实现耳蜗的基因转染,且未见对基底膜细胞产生明显的毒性。合成简单、成本较低,是理想的内耳基因转染载体。 展开更多
关键词 透明质酸 分支型聚乙烯亚胺 Atoh1基因 内耳基因转染
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言语测听中信号的发送和强度控制 被引量:3
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作者 冀飞 《中国听力语言康复科学杂志》 2018年第6期470-474,共5页
言语测听(speechaudiometry)作为辅助诊断和效果评估的重要方法,在耳科学和听力学临床实践中的应用越来越广泛。根据不同的测试目的,衍生出了多种不同的言语测听材料和言语测听方法。除了经典的安静测试条件下的言语识别率和言语识别... 言语测听(speechaudiometry)作为辅助诊断和效果评估的重要方法,在耳科学和听力学临床实践中的应用越来越广泛。根据不同的测试目的,衍生出了多种不同的言语测听材料和言语测听方法。除了经典的安静测试条件下的言语识别率和言语识别阈,噪声下言语识别阈、信噪比损失等新的测试指标越来越多地应用于听力学干预的效果评估甚至预估[1~4]。在言语测听的实施过程中保证信号强度的可靠量化非常重要。 展开更多
关键词 言语测听 信号强度 言语识别阈 效果评估 言语识别率 辅助诊断 临床实践 测听方法
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