实验性中耳积液中耳粘膜中纤维粘连蛋白及层粘连蛋白的免疫组化研究

目的探讨细胞外基质成分———纤维粘连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）和层粘连蛋白（ｌａｍｉｎｉｎ）在中耳积液时中耳粘膜增生中的作用。方法在内窥镜引导下３０只豚鼠行双侧咽鼓管管内烧灼，造成实验性中耳积液动物模型，以过氧化酶标记的链霉卵白素法（ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＳＰ）行中耳粘膜中纤维粘连蛋白、层粘连蛋白的检测。结果实验性中耳积液动物模型成功２８耳。免疫组化染色发现，中耳积液豚鼠纤维粘连蛋白和层粘连蛋白在中耳粘膜的表达比正常豚鼠增强，随着病变时间的延长，纤维粘连蛋白在增生中耳粘膜中的成纤维细胞上表达增多，层粘连蛋白在基底膜及新生血管内皮上表达明显。结论实验证实纤维粘连蛋白、层粘连蛋白在中耳积液时参与中耳粘膜的增生反应，这可能对解释中耳粘膜增生、中耳粘连的发生机理有一定意义。

中耳细菌感染对内耳及机体免疫功能长期影响的实验观察

目的 探讨中耳细菌感染后内耳热休克反应是否会长期存在 ,及其对内耳功能的潜在影响。方法 6 0只BALB/c鼠随机分为肺炎克雷白杆菌、金黄色葡萄球菌 (简称金葡菌 )、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌和生理盐水对照 6个组 ,每组 10只。中耳注射致病菌 135d后测试畸变产物耳声发射并取材进行光镜与电镜观察 ,检测内耳热休克蛋白 (heatshockprotein ,HSP) 70相关表位分子的表达 ,行单个核细胞核因子κBp6 5和抗肺炎克雷白杆菌抗体、抗膜迷路蛋白抗体的测试。结果 所有标本核因子κBp6 5未发生明显核内转移。金葡菌感染组 3只、肺炎克雷白杆菌组和变形杆菌组 2只、绿脓杆菌组 3只以及对照组 1只动物的抗肺炎克雷白杆菌抗体阳性。经外加电场固定液相分子快速斑点免疫分析筛选 ,金葡菌感染组 2只、肺炎克雷白杆菌组 2只、绿脓杆菌组和生理盐水对照组各 1只抗膜迷路蛋白抗体阳性 ,其中金葡菌组和肺炎克雷白杆菌组抗膜迷路蛋白和抗肺炎克雷白杆菌双阳性。经免疫转印分析 ,其阳性条带除 1例相对分子质量为 6 80 0 0以外 ,其余均为小分子 ,以 2 6 0 0 0～ 30 0 0 0为主 ,380 0 0～ 410 0 0次之 ,46 0 0 0～ 5 0 0 0 0有微弱反应。除变形杆菌组右耳和绿脓杆菌组左耳 16 2 5Hz畸变产物耳声发射检测显著异常外 。

豚鼠耳蜗毛细胞损伤定量分析的初步探讨

豚鼠耳蜗毛细胞损伤定量分析的初步探讨孙建和李兴启姜泗长于黎明王沛英（解放军总医院耳鼻咽喉科解放军耳鼻咽喉科研究所，北京１００８５３）选用耳廓反射灵敏健康杂色豚鼠６只，体重２５０～３００ｇ，月龄３个月，随机分为每天每公斤体重庆大霉素（ＧＭ）、２５、５０...

豚鼠壶腹嵴毛细胞内钙离子活动及ATP的影响

目的 探讨离体前庭毛细胞（ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒ ｈａｉｒｃｅｌｌｓ，ＶＨＣ）去极化时细胞内钙离子活动特征及内耳活性物质ＡＴＰ对离体ＶＨＣ内钙离子浓度的影响及其机制。方法 采用酶孵育后机械分离法分离豚鼠壶腹嵴ＶＨＣ，６ μｍｏｌ／Ｌ钙荧光探针Ｆｌｕｏ３ 染色，利用激光扫描共聚焦显微镜（ｌａｓｅｒ ｓｃａｎｎｉｎｇｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ＬＳＣＭ） 记录静息状态下、加入高Ｋ＋ 液及不同浓度ＡＴＰ时代表ＶＨＣ内［Ｃａ２＋ ］ｉ 的荧光强度相对值的变化。结果 细胞外有Ｃａ２＋ 存在时，７５ ｍｍｏｌ／ＬＫ＋ 可引起所观察５ 个ＶＨＣ内［Ｃａ２＋］ｉ均升高，细胞体和皮板区的［Ｃａ２＋］ｉ 变化一致；在细胞外无Ｃａ２＋ 的情况下，所观察的５ 个ＶＨＣ 中，高Ｋ＋ 并不能引起细胞内［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高。在细胞外存在Ｃａ２ ＋ 时，不同浓度（１ ．０ ｍｍｏｌ／Ｌ，０．１ ｍｍｏｌ／Ｌ）ＡＴＰ可引起绝大多数（１８／１９）ＶＨＣ 内［Ｃａ２＋ ］ｉ 迅速升高，达高峰后下降，恢复至静息时的水平；细胞外无Ｃａ２ ＋ 时，ＡＴＰ仅引起极少数（１／１０）ＶＨＣ内［Ｃａ２＋］ｉ 升高；而对照组加入与ＡＴＰ等体积的Ｈａｎｋ 液，不引起ＶＨＣ

斑点亲和纯化法——一种用于纯化由微量混合抗原产生抗体的方法

斑点亲和纯化法——一种用于纯化由微量混合抗原产生抗体的方法邹静１姜泗长２顾瑞２杨伟炎２由微量混合抗原产生的抗体，不能通过常规方法分离纯化。Ｏｌｓｍｓｔｅｄ、Ｓｍｉｔｈ和Ｆｉｓｈｅｒ等建立了用电转移至偶氮纸或硝酸纤维素（Ｎｉｔｒｏｃｅｌｕｌｏｓｅ，ＮＣ...