大鼠肾脏哺乳动物雷帕霉素靶蛋白随增龄变化的研究

目的研究大鼠肾脏哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）随增龄表达的变化规律。方法选取3月龄、12月龄及24月龄健康大鼠，分别取大鼠肾组织及原代系膜细胞做衰老相关β-半乳糖苷酶活性（SA-β-gal）染色，采用反转录多聚酶链反应（RT-PCR）和Western印迹法（Western blot assay）分别在基因及蛋白质表达水平上检测肾脏组织和细胞中mTOR及磷酸化mTOR（p-mTOR）的表达变化，采用免疫组化和荧光法分别检测mTOR在肾组织及细胞中的表达与定位。结果随增龄，大鼠肾脏组织SA-β-gal活性增强，且肾小球系膜细胞SA-β-gal染色阳性率逐渐增加，3、12及24月龄阳性率分别为（11．93．6）％，（39．0±4．0）％及（86．9±7．4）％，mTOR mRNA表达随增龄逐渐增强，不同月龄比较差异有统计学意义（P〈0．05）。Western印迹亦显示mTOR及p-mTOR蛋白表达随鼠龄增加逐渐增强（P〈0．05）。免疫组化结果显示，mTOR蛋白表达于大鼠肾小球系膜区，其在肾小管-间质也有表达；随增龄，与增龄所致的肾脏病变呈正相关性（与增龄引起小球及小管-间质病变的相关性分别为r=0．838；r=0．742，均为P〈0．01）；免疫荧光结果显示，mTOR在大鼠系膜细胞胞浆及胞核内皆有表达，随增龄表达的荧光强度逐渐升高（P〈0．05）。结论mTOR在大鼠肾组织及肾小球系膜细胞中的表达随龄增加，其可能参与了肾脏衰老的进程。

雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖的影响

目的探讨雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响及其可能涉及的途径。方法高糖培养GMC,以不同剂量雷帕霉素干预,MTT及流式细胞仪等方法观察雷帕霉素对细胞增殖和周期的影响,RT-PCR、Western印迹观察细胞Cyclin D1、CyclinE和p27^(KIP1)的变化。结果高糖刺激下,GMC增殖明显;雷帕霉素能抑制这一作用,且呈剂量依赖性,并下调Cyclin D1、Cyclin E的基因及蛋白水平,上调p27^(KIP1)的蛋白表达;与对照组相比,高糖组G_0/G_1期细胞减少,S期细胞比例增加(P均<0.05);雷帕霉素干预后,G_0/G_1期细胞升高,S期细胞比例减少(P均<0.05)。结论雷帕霉素可抑制高糖状态下GMC的增殖,且呈剂量依赖性;其可能机制是通过下调Cyclin D1、Cyclin E及上调p27^(KIP1),参与了G_1/S期阻滞。