糖尿病肾病中医证型与CRP指标关系探讨

目的:探讨糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)患者中医证型分布特征与炎症指标C反应蛋白(CRP)的关系。方法:将2010年中国人民解放军总医院门诊及住院部糖尿病肾病患者64例分为阴虚燥热、气阴两虚、脾肾气虚(阳)、阴阳两虚4种本证组和兼湿证、兼瘀证、兼痰瘀证3种标证组,并选择50名健康志愿者为正常对照组(NC组),所有纳入者以速率散射比浊法测定C反应蛋白。结果:与正常健康人50例作对照,糖尿病肾病患者CRP水平(1.73±2.91)mg/dl明显高于NC组(0.54±0.16)mg/dl,差异具有统计学意义(P<0.05)。DN各本证证型组血清CRP水平的比较显示,随着证型由阴虚燥热、脾肾气(阳)虚、气阴两虚、阴阳两虚的演变,患者血清CRP水平逐渐升高,且阴虚燥热、脾肾气虚、气阴两虚分别与阴阳两虚组比较,结果差异均有统计学意义(P<0.05)。标证中,痰瘀证与NC组、无兼证组与NC组及痰瘀证与血瘀证组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:血CRP水平与中医证型相关,在一定程度上为中医辨证分型提供客观依据。

IgA肾病患者尿蛋白成分与临床病理指标的相关性

目的:探讨IgA肾病(IgAN)患者尿中白蛋白(Alb)、转铁蛋白(TRF)、免疫球蛋白(IgG)、α1-微球蛋白(α1-MG)、β2-微球蛋白(β2-MG)与临床及病理指标的关系。方法:采集143例原发性IgAN患者肾穿刺前新鲜晨尿,用免疫散射比浊法检测Alb、TRF、IgG、α1-MG、β2-MG的浓度;收集患者血压、血肌酐、24h尿蛋白定量以及病理分级、肾小球病变积分、肾小管间质损害积分、血管病变等资料,并进行对比分析。结果:143例IgAN患者,尿Alb、TRF、IgG、α1-MG、β2-MG升高的比例分别为95.8%、100%、91.6%、63.6%、74.1%。IgAN患者血压升高组较血压正常组尿Alb、IgG、α1-MG明显升高;肾功能异常组较肾功能正常组尿IgG、α1-MG、β2-MG明显升高。随病理Lee氏分级、肾小球硬化程度、肾小管间质损害加重,尿Alb、IgG、α1-MG明显升高;随肾小球系膜增殖程度加重,尿Alb、IgG、α1-MG以及TRF明显升高;随血管病变出现,尿α1-MG明显升高。结论:IgAN患者尿Alb、TRF、IgG、α1-MG、β2-MG与多种反应疾病进展的临床及病理指标变化一致而又各有侧重,可以更全面地反映IgAN患者肾脏病变的程度,对判断病情、随访疗效具有一定的实际意义。

血清乙型肝炎病毒DNA载量对乙型肝炎相关性肾炎临床及病理表现的影响

目的研究血清乙型肝炎病毒(HBV DNA)载量对乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)的临床表现及肾脏病理的影响。方法根据HBV DNA复制程度将135例患者分为4组:病毒复制阴性组(n=52)、低度复制组(n=21)、中度复制组(n=20)、高度复制组(n=42)。收集患者血常规、血生化指标、免疫球蛋白、血清补体C3、C4;尿常规、24h尿蛋白定量,尿NAG酶等数据。用半定量积分法分析各组间临床指标与病理表现的差异。结果随着血清HBV DNA载量的增加,患者中肾病综合征比例增高,而慢性肾炎综合征比例下降(P<0.01)。随着血清HBV DNA载量的增加,患者尿蛋白定量升高(P<0.01),血浆白蛋白降低(P<0.05),血清C3、C4降低(P<0.05);膜性肾病患者肾小球损伤加重,IgA肾病的患者小管及间质损害加重。病毒复制阴性组乙肝标记物沉积以HbsAg为主,而中、低度复制组以HbcAg和HBsAg共同沉积为主,与阴性组比较差异有统计学意义(P<0.01)。随着血清HBV DNA的增加,肾脏C4沉积增加,与血清HBV DNA有一定相关性(r=0.343,P<0.01)。结论随着血清HBV DNA载量的增加,HBV-GN患者的临床及肾脏病理表现加重,相关结果可为HBV-GN患者的抗病毒治疗提供依据。

葡天胶囊对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨葡天胶囊预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法:雄性Wistar大鼠24只,随机分为假手术组(Sham组)、模型对照组(Control组)、葡天胶囊预处理组(PT组),每组各8只。模型对照组及葡天胶囊160mg.kg-1.d-1预处理组手术建立肾脏缺血再灌注模型,缺血后1h恢复灌注,分别在恢复灌注后24h、48h、72h后检测血肌酐、尿素氮及血清白蛋白水平,并观察肾脏病理变化。结果:与假手术组相比,模型组血肌酐水平升高(P<0.05);葡天胶囊预处理组再灌24h、48h及72h血肌酐水平明显低于模型组(P<0.05);肾脏病理显示葡天胶囊预处理组肾组织病变轻于模型对照组。结论:葡天胶囊对肾脏缺血再灌注损伤有保护作用,具有一定的临床应用价值。

利用电转染技术对大鼠原代系膜细胞进行Septin2质粒和siRNA转染的研究

目的:利用电转染技术,对大鼠原代系膜细胞进行Septin2质粒和siRNA转染,制备出Septin2过表达和低表达的细胞模型。方法:培养原代系膜细胞,利用电转染方法,转染pEGFP-C1、pRK5和pRK5-Septin2质粒,以及Septin2的siRNA。结果:通过荧光显微镜观察,pEGFP-C1转染的阳性率可达40%,pRK5-Septin2质粒转染组Septin2表达显著升高,而Septin2siRNA转染组Septin2表达显著下降。结论:利用电转染方法转染Septin2质粒和siRNA,成功的建立了Septin2过表达和低表达的细胞模型,为日后研究Septin2的功能建立基础。

单克隆抗体OX7的制备及大鼠抗Thy1系膜增生性肾炎模型的建立

目的:制备单克隆抗体OX7(monoclonal antibody OX7,mAb OX7)及建立大鼠抗Thy1系膜增生性肾炎模型。方法:弗氏不完全佐剂预免疫Balb/c小鼠,腹腔注射OX7细胞,Protein A亲和层析法纯化腹水,用SDS-PAGE鉴定纯化后抗体的纯度。将所得抗体尾静脉注射Wistar大鼠,PAS染色观察正常对照组注射前及注射后第3天、第7天大鼠肾脏病理组织学改变。结果:SDS-PAGE电泳显示,纯化的抗体有IgG的轻链和重链两条带,无其他杂带,抗体浓度为2.06 mg/ml。PAS染色显示正常对照组肾小球结构正常,毛细血管袢开放良好;模型组第3天开始出现大量系膜细胞破坏,系膜基质溶解,肾小球毛细血管扩张;第7天系膜细胞重度增生。结论:通过将OX7细胞注入小鼠腹腔并用Protein A亲和层析法纯化腹水,可成功制备高效价、高纯度及特异性强的mAb OX7,该抗体可成功建立抗Thy1系膜增生性肾炎动物模型。

腈水解酶2基因沉默细胞模型的制备

目的为腈水解酶2(NIT2)基因研究奠定基础。方法采用siRNA质粒转染技术制备NIT2基因沉默细胞模型,用筛网方法从大鼠肾脏中提取出肾小球用于培养原代系膜细胞,将NIT2靶序列构建pGU6/GFP/Neo质粒中(siNIT2质粒),采用JETPRIME脂质体转染法将质粒转染入原代系膜细胞中,48h后荧光显微镜观察转染效率,利用SYBR GREEN 1定量PCR法检测NIT2基因表达,琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物。结果荧光显微镜下转染阳性率可达50%,定量PCR结果示siNIT2质粒转染后NIT2 mRNA显著降低,琼脂糖电泳结果示PCR产物无明显杂带。结论 siRNA质粒转染法可抑制原代系膜细胞NIT2基因的表达;为NIT2基因功能研究奠定了基础。

利用双向电泳技术分析正常大鼠肾小球蛋白质组方法的建立

目的:利用双向电泳技术分析大鼠肾小球蛋白质,以建立肾小球蛋白质组分析的方法。方法:选取体重约200g的雄性Wistar大鼠,分离肾小球并提取蛋白质。使用24cm、pH3-11的IPG胶条对蛋白质进行一相等电聚焦,采用12.5%聚丙烯酰胺凝胶进行二相分离。Decyder软件分析凝胶上的蛋白质点,切取1个蛋白质点,经过胰蛋白酶消化后,使用飞行质谱获取肽指纹谱,并用Mascot软件分析。结果:纯化的肾小球纯度在90%以上,在双向电泳的凝胶上,共发现1240个肾小球蛋白质;切取的蛋白质点经鉴定为CAPZA2蛋白质,Mascot得分为137分(阈值为61分)。结论:成功建立了双向电泳分析大鼠肾小球蛋白质组的方法。