中国实验用小型猪血液指标正常参考值分析

本试验旨在建立中国农业大学教授专家团队培育的小型猪(命名为"中国实验用小型猪")血液生理和生化指标的正常参考值范围,为小型猪作为人类疾病模型提供参考依据。用全自动化生化仪测定1、3、6和12月龄中国实验用小型猪血液的9项生理指标和22项生化指标,对同一月龄不同性别的血液测定值进行单因素独立样本t检验。试验结果显示,中国实验用小型猪绝大多数血液生理生化指标同一月龄不同性别间差异不显著(P>0.05),仅红细胞体积分布宽度和肌酐等指标存在显著差异(P<0.05)。中国实验用小型猪血液指标与巴马小型猪、贵州小型猪和五指山小型猪相比,大多数血液测定值接近。试验结果表明,中国实验用小型血液生理生化指标稳定,与人类正常参考值相比,小型猪9项血液生理指标中有4项和人类相接近,22项血液生化指标中有15项和人类相接近。

Toll样受体系统在肾脏衰老中的表达变化

目的观察Toll样受体(TLRs)系统在肾脏衰老中的表达变化。方法用免疫印迹和实时定量PCR(qRT-PCR)技术分析3月龄组(青年组,n=20)、12月龄组(中年组,n=20)和24月龄组(老年组,n=20)大鼠肾脏中TLRs系统分子、核转录因子(NF-κB)信号通路分子以及炎症因子包括趋化因子配体3(CCL3)、CCL4、CCL5、CD80、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-12b(IL-12b)的表达变化情况。结果①12月龄组和24月龄组体重[(466.86±32.62)、(617.8±57.34)g]、肾重[(43.25±0.50)、(5.01±1.00)g]、三酰甘油(TG)[(2.32±0.46)、(3.22±0.82)mmol/L]和尿蛋白/肌酐比值[(164.81±38.31)、(256.00±49.39)mg/mmoL]高于3月龄组[(236.3±12.28)g、(1.67±0.68)g、(1.20±0.32)mmol/L、(146.01±22.72)mg/mmoL],差异有统计学意义(P<0.05);24月龄组大鼠血尿素氮(BUN)水平[(6.86±1.10)mmol/L]高于3月龄组[(5.73±0.47)mmol/L],差异有统计学意义(P<0.05);而血肌酐(SCR)、血糖(GLU)和胆固醇(CHOL)水平三组差异无统计学意义(P>0.05)。24月龄组肾重[(5.01±1.00)g]和尿蛋白/肌酐比值[(256±49.39)mg/mmoL]高于12月龄组[(3.25±0.50)g、(164.81±38.31)mg/mmoL],差异有统计学意义(P<0.05)。②12月龄组和24月龄组TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR11表达水平均高于3月龄组,24月龄组TLR1和TLR3水平高于3月龄组,24月龄组TLR9水平高于3月龄组,差异均有统计学意义(P<0.05);三组TLR6、TLR7、TLR10水平差异无统计学意义(P>0.05);TLR8未检测到。24月龄组TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR11水平高于12月龄组,差异均有统计学意义(P<0.05)。③12月龄组和24月龄组IK-Bα和活化的磷酸化NF-κB p65(Phospho-NF-κB p65)水平高于3月龄组,差异有统计学意义(P<0.05);24月龄组NF-κB p65水平高于3月龄组,差异有统计学意义(P<0.05)。24月龄组NF-κB p65和Phospho-NF-κB p65水平高于12月龄组,差异有统计学意义(P<0.05)。④24月龄组CCL3、CCL4、CCL5、CD80、TNF-α和IL-12b水平高于3月龄组,差异有统计学意义(P<0.05);12月龄组CD80和IL-12b水平低于3月龄组,差异有统计学意义(P<0.05)。24月龄组CCL3、CCL4、CCL5、CD80、TNF-α和IL-12b高于12月龄组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TLRs系统可能通过激活NF-κB信号通路、促进炎症因子的表达而在肾脏衰老过程中发挥重要作用。

IgA肾病联合诊断数学模型的建立与验证

目的建立并评价实验室检验指标联合诊断IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)数学模型,探索无创性诊断IgA肾病的方法。方法采集并分析解放军总医院2013年至2015年行肾活检病理学检查的588例住院患者(200例IgAN,388例Non-IgAN)的实验室检查数据。结果 t检验或Mann-Whitney U秩和检验分析表明,在31项实验室检查指标中有23项在IgAN与Non-IgAN中差异具有统计学意义(P<0.05)。多参数Logistic回归分析表明,血清白蛋白(ALB)、血清肌酐(CREA)、血清总胆固醇(CHO)、血清纤维蛋白(FIB)、血清D-二聚体(D-D)、血清IgA(s IgA)、血清IgG(s IgG)7项实验室检查指标对IgAN的诊断具有意义。用这7项指标建立联合诊断数学模型,该模型诊断将单一指标诊断IgAN的ROC曲线下面积(AUC)从0.747从提高到0.890。模型验证结果表明,诊断IgAN与Non-IgAN的总准确度、灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为0.813、0.737、0.849、0.700、0.871。结论实验室检查项目ALB、CREA、CHO、FIB、D-D、IgA和IgG具有联合诊断IgAN的能力,基于多项实验室检查、联合诊断和数据分析的方法可用于IgAN的诊断,具有较好的临床应用价值。

Toll样受体在糖尿病肾病发病中的作用

Toll样受体(TLRs)是机体固有免疫系统的受体之一,外界微生物可与TLRs结合并激活固有免疫、炎性反应,并进一步启动获得性免疫反应。近年研究发现一些内源性配体也可与TLRs结合,激活炎性反应。近年来,糖尿病的发生率逐年递增,由此导致的糖尿病肾病(DN)成为导致终末期肾脏疾病最主要的原因之一。目前对于TLRs与DN关系的研究较少,仅限于TLR2和TLR4。研究表明,TLR2和TLR4可通过介导代谢性炎性反应而调节糖尿病及DN的发生、发展过程。

肾脏衰老的功能变化及发生机制

衰老是一个伴随器官功能逐步衰退的复杂过程。随着年龄增长，肾脏出现诸多生理学及病理学改变，并导致肾脏功能减退，推动机体衰老进程。阐明肾脏衰老的发病机制，预防和延缓肾脏衰老是减少衰老肾脏相关疾病发病的重要环节。

肾脏器官衰老机制的研究进展

器官衰老是连接细胞衰老和生物体整体衰老的桥梁。肾脏是人体中衰老较快的器官之一，表现为功能减退、修复能力下降、易于向病态转化。本文介绍了近年来肾脏衰老机制研究的新进展。

不同年龄健康人肾脏滤过功能评价指标的生理范围及影响因素

目的:建立不同年龄健康人的肾脏滤过功能指标的生理范围,并分析其增龄和性别的影响。方法:通过询问一般情况、病史及体格检查,并检测血常规、尿常规、生化等指标,入选1 803例健康人群。自动生化分析仪检测血清尿素氮(BUN)及肌酐(Scr,胱氨酸酶法测定),免疫比浊法检测血清胱抑素C(Cys C),3种CKD-EPI公式计算e GFR。结果:(1)获得不同年龄组别、不同性别的BUN、Scr、Cys C及3种公式计算e GFR的95%参考值范围。(2)无论性别,Scr、BUN、Cys C均随增龄升高,GFRCr、GFRCys C、GFRCr-Cys C随增龄逐渐降低;但男>80岁组的Scr值较60岁~80岁组明显降低。(3)各年龄组中女Scr和BUN、女<60岁的Cys C低于男,60岁以上年龄组Cys C无性别差异。(4)除年龄>80岁以及20岁~40岁女组外,同年龄组同性别人群的3种CKD-EPI公式计算的GFR差异均存在统计学意义。结论:本研究提供了不同年龄、性别的临床常用肾脏滤过功能评估参数的生理范围,并证实了年龄和性别对这些参数的影响,为临床正确评估肾功能提供参考。

炎性小体在炎性衰老及老年性疾病发生中的作用

近年研究发现免疫炎症与衰老的发生有关.在机体衰老过程中,固有免疫反应被激活,导致机体出现一种低水平、慢性炎症状态,即炎性衰老（inflammaging）.炎性小体（inflammasome）是由细胞内感受分子如pattern recognition receptors（PRRs）与接头蛋白ASC及procaspase-1蛋白组装而成的高分子量多蛋白复合物,是固有免疫系统的重要组成部分.炎性小体能被多种外源性病原微生物或内源性危险信号分子激活,进而诱导caspase-1酶活化.

雷帕霉素对高糖诱导的肾系膜细胞自噬抑制、氧化损伤和衰老的影响

目的探讨雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤(3-MA)对高糖诱导的原代大鼠系膜细胞自噬、氧化损伤及衰老的影响。方法从大鼠肾分离培养原代肾小球系膜细胞(GMCs),分为正常对照组、高糖组、高糖+雷帕霉素(自噬增强剂)及高糖+3-甲基腺嘌呤(自噬抑制剂)干预组。在细胞培养24 h、72 h及10 d时,Western blotting观测自噬标志物-自噬相关基因LC3及泛素结合蛋白p62/SQSTMI的表达变化;硫代巴比妥酸法检测细胞脂质损伤产物-丙二醛(MDA)水平,2,4-二硝基苯肼(DNPH)比色法测定细胞蛋白质损伤产物-羰基含量,通过进行衰老相关β-半乳糖苷酶活性(SA-β-gal)染色及衰老相关异染色质斑块(SAHF)分析检测细胞的衰老程度。结果与对照组相比,细胞经高糖处理72 h和10 d后,自噬标志物LC3表达降低,p62/SQSTMI升高,MDA及羰基含量上升(均P<0.05);处理72 h细胞SA-β-gal染色阳性率增加(P<0.05),细胞核异染色质斑块形成增加。高糖培养的细胞用雷帕霉素干预72 h和10 d后,LC3表达升高,p62/SQSTMI表达下降,MDA及蛋白质羰基含量均下降(均P<0.05),72 h后细胞SA-β-gal染色阳性率下降(P<0.05),细胞核异染色质斑块形成减少;高糖培养的细胞用3-MA干预72 h和10 d后,LC3表达下降,p62/SQSTMI表达升高,MDA及蛋白质羰基含量升高(均P<0.05),72 h细胞SA-β-gal染色阳性率上升(P<0.05),细胞核斑块形成增多。结论高糖可抑制系膜细胞自噬功能,促进系膜细胞氧化损伤,加速细胞衰老;雷帕霉素干预可减轻高糖对系膜细胞自噬功能抑制,减少氧化损伤,延缓衰老;3-MA加重高糖对系膜细胞自噬功能的抑制,进一步加重细胞氧化损伤,加速衰老。

思维导图在中西医结合诊疗慢性肾衰竭教学中的应用

20世纪50年代以来,越来越多的临床专家意识到,走中医和西医相结合的道路,具有扬长避短的独特优势,并在临床和基础科研上取得了一系列的防治成果[1~3]。我们团队牵头开展的一项全国性综合医院肾脏病专科调查研究显示,48.5%的慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者使用中成药(未发表数据)[4]。赵静等[5]调查8家医院中医师和西医师中成药的辩证用药准确率分别为52.1%和16.7%。可见,如何在中西医结合临床诊疗过程中进行合理辩证,是中西医结合临床教学的重点和难点。

血清分离后室温放置24小时内多肽质谱的变化

目的探讨血清分离后室温放置24h内多肽质谱的变化,为确立血清多肽质谱分析最适时间提供参考。方法募集6名志愿者(男性2名,女性4名,平均年龄30岁)分别采集静脉血,离心分离血清后,根据在室温下放置的时间(0h、2h、6h、10h、24h)分装血清冻存并分成5组待测。用弱阳离子磁珠提取多肽,用Clin-TOF平台进行检测,通过BioExplorer软件和SPSS 22.0进行多肽峰的比较。结果5个不同时间组共出峰58个,5个多肽峰差异有统计学意义(P<0.05),在5组峰强度最大的前10个多肽峰中,8个均相同,且峰强无差异(P>0.05);6h组和10h组正态分布的血清多肽峰最多(51个),全峰强度6h组最高(1599499);峰强度大于300的血清多肽峰数为6h组最高(24.7±1.37),峰强累积值为6h组最高(132674);根据正态分布多肽峰个数、全峰强度、峰强大于300的多肽峰数、差异峰4049.9m/z的峰强度这4个因素综合评价,6h组得分最高。结论在室温条件放置24h之内血清多肽变化不足以影响分析,最优的检测时间是采血分离血清后室温放置6h,在这一条件下进行质谱检测,出峰均一性最佳,且峰强度最大,较易获得阳性结果。

研究型科室医疗质量管理探讨

分析建设研究型科室面临的人员工作分配不合理、工作量及工作压力大、人员素质参差不齐、管理手段落后等主要问题,在此基础上,从人员培训、提升科室团队管理能力、完善科室管理制度、优化管理流程及实现信息化管理等方面,对加强研究型科室医疗质量管理进行了探讨。

多囊肾病小型猪肾脏组织中增殖和凋亡的改变

目的:观察ADPKD小型猪肾脏组织中细胞增殖和凋亡的改变。方法:使用PKD1基因敲除的小型猪模型,用Western blot和免疫组化方法检测肾脏组织中细胞增殖指标PCNA;增殖相关的mTOR信号通路分子(phospho-mTOR、phospho-p70S6、phospho-4EBP1)和ERK信号通路分子(phospho-PKA、phospho-MEK、phospho-ERK)的表达水平以及内皮细胞粘附分子CD31以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase 3的表达变化。结果:在ADPKD小型猪肾脏组织中,增殖指标PCNA表达显著升高。mTOR信号通路分子phospho-mTOR、phospho-p70S6、phospho-4EBP1水平明显升高,ERK信号通路分子中phospho-PKA、phospho-MEK、phospho-ERK水平明显升高。CD31表达明显升高,Bax/Bcl-2的比值以及caspase 3的表达水平显著升高。结论:本研究显示在ADPKD小型猪肾脏组织中,细胞增殖和凋亡信号通路明显激活。

组织金属蛋白酶抑制剂-1低表达系膜细胞模型的建立

目的利用3种不同组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1)si RNA转染大鼠系膜细胞,建立高效、稳定的TIMP-1低表达系膜细胞模型,为肾疾病研究奠定实验基础。方法分别设计合成3条TIMP-1特异性si RNA序列,并以标记了绿色荧光基团6-羧基荧光素(6-carboxy-fluorescein,FAM)的无义si RNA作为对照,利用脂质体转染方法转染原代大鼠系膜细胞,收集转染后48 h的细胞,利用荧光显微镜观察绿色荧光,明确其转染成功率;同时用Trizol法分离提取系膜细胞的总RNA,利用Taqman探针方法检测试验组及对照组TIMP-1的m RNA表达水平。结果荧光显微镜观察,利用脂质体转染方法,si RNA转染效率可以达到90%以上;Taqman探针荧光定量PCR结果显示,3种不同序列的si RNA均有抑制TIMP-1表达的作用(P<0.01),且si TIMP1-1的效果最佳。结论本研究利用si RNA转染技术,成功建立了TIMP-1低表达系膜细胞模型。

健康人群中eGFR不是颈动脉内中膜厚度的危险因素

目的:探讨健康人群中伴随增龄的肾功能改变与颈动脉内中膜厚度关系。方法:随机抽取北京市10个社区,按入选标准筛选健康居民1 112例,采用CKD-EPI公式估算肾小球滤过率(e GFR),超声检测颈动脉内中膜厚度(CIMT)。分为动脉壁增厚组(CIMT≥0.9 mm)与正常组(CIMT<0.9 mm);以及年轻组(<65岁)和老年组(≥65岁)。结果:与年轻组比较,老年组收缩压明显升高,e GFR水平明显降低;CIMT明显增厚,颈动脉斑块比例明显增加。与CIMT正常组比较,CIMT增厚组年龄、BMI、SBP、DBP、PP、FBG、TC、TG、LDL、HDL、Scr、BUN及UA水平明显升高,Alb和e GFR水平明显降低。单因素相关分析结果显示CIMT与年龄SBP、DBP、PP、FBG及BUN呈明显正相关,与e GFR呈明显负相关。非条件Logistic回归分析显示,年龄、SBP、FBG、Alb是CIMT增厚的独立危险因素,未发现e GFR与CIMT的增厚独立相关。结论:北京健康居民中,增龄性e GFR减退与CIMT增厚未见独立相关;更严格的血压、血糖控制,更好的营养状态可能对于防治健康人群动脉硬化更为重要。

固有免疫系统Toll-Like受体和炎性小体在炎症及衰老中的作用

Toll样受体（Toll-1ike receptors，TLRs）作为固有免疫系统受体之一，在启动和调节天然免疫及诱导获得性免疫中发挥重要作用。炎性小体也是固有免疫的重要组分，能被多种类型的病原体或危险信号所激活，在机体免疫反应和疾病发生过程中具有重要作用。