多孔明胶微球对大鼠脂肪干细胞的生物相容性实验

目的探讨明胶来源多孔微球的生物相容性,为进一步体内实验提供科学依据。方法分离培养大鼠乳鼠脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)并进行三系分化诱导和鉴定。P2代ADSCs体外种植于多孔明胶微球1 d、3 d和5 d后,MTT法检测微球毒性和微球复合细胞后的增殖活性,激光共聚焦显微镜观察微球复合细胞后细胞形态、增殖活性。结果分离培养的大鼠脂肪间充质干细胞呈长梭形,生长良好且三系分化染色呈阳性结果。浸提液组与正常干细胞培养基组的OD值无显著差异。微球复合细胞组的OD值显著高于单纯细胞培养组。激光共聚焦显微镜结果显示微球复合细胞5 d后细胞大量增殖,形态良好。结论明胶多孔微球能够促进脂肪间充质干细胞增殖且无明显毒性,具有良好的细胞相容性,为进一步体内实验奠定了基础。

猪膀胱细胞外基质对人脐带Wharton胶间充质干细胞生物相容性实验

目的探索化学法制备的猪膀胱细胞外基质(porcine bladder accellular matrix,PBAM)对人脐带Wharton胶间充质干细胞(Wharton's jelly mesenchymal stem cells,WJ-MSCs)的生物相容性,为组织工程膀胱的研究提供新的种子细胞。方法采用化学脱细胞法制备PBAM,行HE、甲苯胺蓝、Hoechst33258荧光染色检测脱细胞效果,扫描电镜观察PBAM形态,无水乙醇法检测其孔隙率。组织块法培养WJ-MSCs,观察形态并及行成骨、成脂诱导。比较不同浓度的PBAM浸提液对WJ-MSCs增殖的影响。实验组将WJ-MSCs复合至PBAM进行培养,对照组以DMEM培养,第3、5、7天收集细胞并计数,对细胞-支架复合物行Hoechst33258及AO染色,扫描电镜观察WJ-MSCs在PBAM上的生长状态。结果化学脱细胞法成功制备的PBAM。HE、甲苯胺蓝和Hoechst33258染色证实PBAM上无细胞残留,扫描电镜(SEM)观察PBAM表面呈多孔结构,孔隙率为93%。组织块法培养WJ-MSCs第6天可见WJ-MSCs呈鱼群样排列,行成脂、成骨诱导后,油红"O"和茜素红染色阳性。不同浓度PBAM浸提液对WJ-MSCs的增殖效果与DMEM培养液无差异。两组增殖高峰均在第5天,实验组细胞增加率高于对照组(P <0.05)。将WJ-MSCs复合至PBAM培养第5天后,Hoechst33258染色见大量WJ-MSCs生长于PBAM表面,AO染色提示为活细胞。电镜扫描可见大量人脐带WJ-MSCs黏附生长。结论 PBAM对WJ-MSCs具有较好的相容性,可为进一步研究组织工程膀胱提供实验基础。

大鼠股神经肌支和隐神经损伤前后差异蛋白分析

目的研究股神经肌支和隐神经纤维损伤7 d后二者蛋白表达的差异。方法成年雌性SD大鼠20只,体质量220~250 g。将大鼠右侧股神经干横断,左侧作为对照组不作处理。7 d后分别对正常股神经肌支及隐神经、损伤股神经肌支及隐神经取材,运用同位素标记相对和绝对定量技术标记(114标记正常的股神经肌支;115标记损伤的股神经肌支;116标记正常的隐神经;117标记损伤的隐神经)并结合二维液相色谱-串联质谱技术进行差异蛋白分析。结果共鉴定出3 358个蛋白。其中损伤的股神经肌支与正常的股神经肌支相比差异蛋白293个,表达升高112个,表达降低181个;损伤的隐神经神经与正常的隐神经相比差异蛋白417个,表达升高184个,表达降低233个。结论成功筛选出大鼠股神经运动神经纤维与感觉神经纤维损伤前后的差异蛋白,可为周围神经再生研究提供基础数据。

细胞外基质与能量代谢在骨性关节炎衰老机制中的作用综述

骨性关节炎发病原因众多,其中至关重要的因素是衰老相关的退变。本文主要针对关节软骨中能量代谢障碍和细胞外基质改变进行综述,这些变化导致了炎症反应,加速分解代谢,并伴随关节组织的退变,最终促进骨性关节炎的进展。