免疫、变态反应与耳鼻咽喉疾病

过敏性鼻、鼻窦炎和诸多耳鼻咽喉慢性炎症疾病,都是机体免疫机制对入侵异己成份的应答表征。免疫学的研究与运用在耳鼻咽喉头颈外科领域内,必然受到日益增多的关注,并将更多地体现在临床诊疗活动中。

免疫、变态反应与耳鼻咽喉疾病

人们最早的免疫学（Immunology）知识，从牛痘天花开始。上世纪60年代以后现代免疫学研究获得突破性进展。有文史记载的千百年来，大量屠杀人类的多种烈性传染病，像天花、霍乱、鼠疫、脑炎、脊髓灰白质炎等，使用疫苗接种预防，已获得了严格的控制，并趋于消灭。对新发现的传染病，如AIDS、非典、禽流感等，科学家们正忙于研制特异性疫苗。如上种种，说明免疫反应或称应答（Immune Response）是机体有效地抵御病原体入侵，保持自身稳定的重要机制。姜泗长院士在顾之燕教授编著的《耳鼻咽喉科变态反应性和免疫性疾病》一书的序言中指出：从整体上来分析，慢性炎症反应是体液和细胞介导的免疫机制的表达，极其深刻地揭示了机体抗病毒和修复现象的本质。

18个省市聋校学生非综合征性聋病分子流行病学研究(Ⅰ)-GJB2 235delC和线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变筛查报告

目的通过统一的调查、标本采取和基因筛查方法进行全国性重度感音性耳聋的分子流行病学调查和研究。方法通过标准化的流行病学调查设计、行政组织、标本采取和GJB2 235delC和线粒体DNA 12SrRNA A1555G筛查方法进行全国18个省市自治区的重度感音神经性耳聋患者的一般情况和常见分子病因学调查。结果收集来自18个省市2065例重度至极重度感音神经性耳聋病例,其中非综合征性耳聋病例2016例,筛查出线粒体 DNA 12SrRNA A1555G突变病例57例,GJB2 235纯合突变148例,GJB2杂合突变157例。调查显示在中国各地, 线粒体DNA 12SrRNA A1555G和GJB2 235delC突变相关性耳聋占有较高的比例,同时各地区间检出率差异较大。结论在中国广大地区的重度神经性耳聋患者中,常见突变引起的遗传性耳聋占有较大的比例,基因筛查方法是进行耳聋病因流行病学调查的有用工具。

新一代测序技术在遗传性耳聋基因研究及诊断中的应用

超过50%的耳聋由遗传基因缺陷所致,伴随着基因组学技术的发展,耳聋分子遗传学研究逐渐成为耳科学研究的前沿领域。新一代高通量测序技术的出现,提供了以数据为导向的新的遗传性疾病研究模式,革新了人们对遗传性疾病的认识过程,使得对遗传性疾病的研究策略也发生了重大转变。近年来新一代测序技术(Next generation sequencing,NGS)在耳聋研究中的应用,大大加快了耳聋基因发现的速度,并逐渐向临床应用方向转化。文章总结了遗传性耳聋的特点和研究现状,以及新一代测序技术在耳聋研究中的应用和前景,以及基于NGS技术的耳聋基因研究和临床耳聋基因诊断的发展方向。

60岁以上门诊老年听力障碍患者听力损失分布的初步研究

目的对2017全年来我院行纯音听力检查的所有老年患者的结果进行横断面分析,初步了解现阶段我国局部地区门诊就诊的老年听力障碍患者听力损失的分布特点。方法调查门诊全年内首次就诊的60岁以上(含60岁)老人4794例,男2136例,女2658例,男女比例为1:1.24,平均年龄为68.87±5.80岁,中位数为67岁。按年龄分为三组:年轻老年人组(60～74岁)、老年人组(75～89岁)和长寿老人组(90岁以上),分析所有患者纯音测听结果。按照WHO1997年听力障碍分级标准将受试者每耳的听力进行分析。结果全部年轻老年人组3761例,占总例数78.45%,其中男性1615例(42.9%),女性2146例(57.1%);老年人组1000例,占总例数20.86%,其中男性498例(49.8%),女性502例(50.2%);长寿老人组33例,占总例数0.69%,其中男性23例(69.7%),女性10例(30.3%)。研究数据中听力正常:555例(男169例,女386例),占总例数11.58%;轻度听力损失:1007例(男393例,女614例),占总例数21.01%;中度听力损失:1469例(男694例,女775例),占总例数30.64%;重度听力损失:1020例(男540例,女480例),占总例数21.28%;极重度听力损失:743例(男340例,女403例),占总例数15.50%。结论门诊就医的年轻老年人(60～74岁)的数据量明显高于其他两组,年龄组别越高,就诊检查的患者数量随之减少,男女比例逐渐趋于一致。本文纳入的听力结果以轻度、中度、重度听力下降为主,随着年龄的增长,所患听力疾病的损失程度有向愈加严重的趋势。同时三个年龄组的各频率纯音听阈值在跨组时均有10 dB左右的下降。

噪声引起小型猪耳蜗炎症复合体的激活及蛋白质组学研究

目的通过研究炎症复合体及相关通路在猪耳蜗中的激活,探讨噪声介导炎症复合体激活的关键分子机制,为噪声性耳聋的预防和治疗提供新靶点。方法采用小型猪为研究对象,建立噪声性耳聋模型,测试噪声暴露前后动物的ABR阈值,应用蛋白质组学iTRAQ、生物信息学、western blot、荧光实时定量PCR等技术,研究噪声刺激引起耳蜗炎症复合体的激活以及作用机制。结果正常小型猪ABR阈值为35.4±2.6 dB SPL,噪声后一天ABR阈值平均提高到72.1±4.1dB SPL,在4k Hz处听力损失最严重,高频听力损失较低频严重;噪声后七天平均ABR阈值恢复至52.8±4.7dB SPL,4k Hz以上听力恢复较低频稍差。iTRAQ实验共鉴定到蛋白质2158种,噪声暴露后较正常组具有显著差异表达的蛋白质共227个,富集在免疫过程的差异表达蛋白包括:ASC, caspase-1, IL-1 beta,CD59等。富集的KEGG pathway包括:阿尔兹海默病信号通路,帕金森病信号通路,MAPK信号通路,,氧化磷酸化通路等。结论噪声暴露后可能激活耳蜗内NLRP3受体介导的炎症复合体,通过caspase-1活化IL-1β、IL-18,并间接促进TNF-α等炎症因子上调,加剧耳蜗内炎症反应,导致耳蜗内重要结构的损伤,这一机制可能是噪声引起听力损失的重要原因。

老年性聋的基础研究和听觉康复

老年性聋也称为年龄相关性聋，主要是指随着年龄的增加逐渐发生的以高频听力下降为主的感音神经性听力损失。随着人口老龄化的加剧，老年性聋的发生率呈现逐渐增加的趋势，其占单纯听力残疾人口的比例高达51．61％以上。

PEDF-GFP基因转染大鼠视网膜的实验研究

目的将重组表达质粒色素上皮衍生因子-绿色荧光蛋白(pigment epitheliumderived growthfactor-greenfluorescent protein,PEDF-GFP)以脂质体介导转染BN大鼠视网膜组织,观察其表达及定位。方法以脂质体介导的方法将重组表达质粒PEDF-GFP注射到BN大鼠视网膜下,于一定时间内分别用荧光显微镜观察GFP表达情况,用RT-PCR方法检测PEDF表达情况。结果在荧光显微镜下观察GFP表达情况,第1d即可见明显的绿色荧光分布于视网膜全层包括RPE细胞层,第2、3周荧光强度比第1周增强,荧光范围也有所扩大,可以持续表达4周。RT-PCR方法结果类似,转染后第1d即有PEDF mRNA表达,第1、2周表达明显增强,到第4周治疗眼的视网膜组织中PEDF mR-NA仍有较高水平的表达。结论阳离子脂质体可有效将PEDF-GFP基因转染视网膜组织、RPE细胞并得到持续表达,可望用于视网膜、脉络膜疾病的基因治疗。

成年与老年大鼠耳蜗核胆碱乙酰化酶免疫组织化学研究

采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法，对成年（２～３月龄）和老年（２０～３６月龄）Ｗｉｓｔａｒ大鼠耳蜗核组织进行ＣｈＡＴ免疫组织化学显色，并利用计算机图像分析系统对免疫反应阳性细胞进行计数。观察老年大鼠耳蜗核组织胆碱乙酰化酶（ＣｈＡＴ）免疫反应的变化，研究其与老年性聋的发病关系。结果发现ＣｈＡＴ免疫反应阳性神经元主要散在分布于背侧核（ＤＣＮ）的梭型细胞层，老年大鼠耳蜗背侧核ＣｈＡＴ阳性细胞数目少于成年组（Ｐ＜０．００１）。实验结果提示，耳蜗核ＣｈＡＴ阳性细胞数目的减少可能与老年性聋的发病有关。

中国散发听力损失患者中GJB2基因突变分子流行病学研究

目的在一组中国北方耳聋人群中进行 GJB2基因突变分子流行病学研究。方法调查214例散发聋病患者,分布在中国长江以北的14个省份,全部为汉族;另外募集正常听力者86名作为对照针对GJB2的编码区进行 PCR 扩增,然后直接测序检测突变,对测序结果进行分析。结果检测到 GJB2基因9种序列改变方式,其中良性多态有2种(79G→A、341A→G),致病突变6种(35delG、109G→A、235delC、504insGCAA、299-300delAT 和176-191dell6),另有一种序列改变方式(455A→C)。耳聋患者中携带纯合致病变10例,其中109G→A纯合突变3例,235delC 纯合突变7例;有21例患者携带 GJB2基因杂合致病突变,其中235delC 杂合突变9例,109G→A杂合突变6例,176-191dell6杂合突变3例,504insGCAA 杂合突变1例,35delG 杂合突变1例.299-300delAT 杂合突变1例。21例患者中复合杂合突变(235delC/176-191dell6、235delC/504insGCAA、455A→G/109G→A)3例。结论在中国耳聋人群中235delC 突变率最高,在语前聋患者中更是这样;而 GJB2基因的35delG 在中国耳聋人群中并不常见。GJB2基因突变在听神经病患者中的作用还有待进一步研究,GJB2基因突变可能不是导致大前庭水管综合征耳聋病理基础。

bFGF-Math1基因诱导UEC-4细胞产生毛细胞的实验研究

目的进一步探讨bFGF-Math1基因在前庭上皮细胞系(UEC-4)细胞中的表达及生物学作用。方法利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导bFGF-Math1基因真核表达质粒(pCI-bFGF-Math1)转染UEC-4细胞,利用RT-PCR技术检测基因在细胞中的表达,并利用免疫组织化学方法观察细胞的分化及特异性抗体的表达。结果脂质体介导的基因可在细胞内获得良好的表达,转染后24h,相差显微镜下观察细胞形态发生变化,免疫组织化学显示转染后细胞可以表达毛细胞特异性蛋白Myosin7a。结论bFGF-Math1基因有良好的生物学特性,可以有效地诱导支持细胞向毛细胞样细胞转变。

常染色体显性遗传非综合征型耳聋致病基因定位研究

耳聋具有高度的遗传异质性,迄今已定位了51个常染色体显性遗传非综合征型耳聋(autosomaldominantnon-syndromicsensorineuralhearingloss,DFNA)基因位点,20个DFNA相关基因被克隆。文章收集了一个DFNA巨大家系,家系中有血缘关系的家族成员共170人,对73名家族成员进行了详细的病史调查、全身检查和耳科学检查,提示39人有不同程度的迟发性感音神经性听力下降,未见前庭及其他系统的异常。应用ABI公司382个常染色体微卫星多态标记进行全基因组扫描连锁分析,将该家系致聋基因定位于14q12-13处D14S1021-D14S70之间约7.6cM(3.18Mb)的区域,最大LOD值为6.69(D14S1040),与已知DFNA9位点有4.7cM(2.57Mb)的重叠区,DFNA9致病基因COCH位于重叠区域内。下一步拟进行COCH基因的突变筛查,以揭示该家系耳聋的分子致病机制。

儿童言语和语言障碍的研究现状

正常人是以听和说进行交流，绝大多数交流障碍是和听功能（言语输入）障碍或者说功能（言语输出）障碍有关。耳鼻咽喉科的研究领域涉及到与听（耳）和说（喉）有关的器官的解剖与生理功能。

军事噪声性聋的防治研究回顾

1军事噪声性聋流行病学调查研究和标准制定 80年代初我们攻关小组成员走访了总参炮兵局、装甲兵工程技术学院、海防13师、24军196旅、31军91师、福建海军岸勤部等单位，函调了陆海空总装二炮等60多个单位。

遗传性听力损害基因研究进展

遗传性听力损害具有高度的遗传异质性,据估计与几百个基因有关。随着人类基因组计划的快速进展及为人类的健康事业提供的便利,遗传性听力损害相关基因的定位克隆工作近十年来取得了令人瞩目的进展。本文将简要介绍综合征型和非综合征型听力损害的核基因定位克隆和突变的研究进展,以及遗传性损害基因突变检测的临床应用情况。

牙科治疗器械所致噪声的初步研究

目的:研究不同测量距离下常规牙科治疗时器械所致噪声的强度及变化趋势。方法:在测量距离分别为1cm、10cm、20cm、30cm时测定牙科高速涡轮手机、慢速手机、超声洁治器械在空转和工作状态下所产生的噪声强度,并进行统计学分析。结果:几种器械在20cm以外距离工作所产生的噪声均在80dB(A)以下。在1cm距离上慢速手机磨削普通金属所产生噪声为89.53±1.25dB(A),高速涡轮机头为95.67±0.65dB(A),超声器械为104.90±1.25dB(A)。10cm距离水平高速涡轮机头和超声器械所产生噪声分别为85.25±0.47和86.68±0.84dB(A)。结论:距离手机20cm以上时,常规牙科治疗所产生的噪声对医师的听力无明显影响。但对患者的影响需引起注意。

TECTA基因突变与常染色体显性遗传非综合征型DFNA8/12型聋的研究进展

耳聋病因复杂,由多种因素共同引起,其中约60%属于遗传性聋,遗传性聋分为综合征型和非综合征型聋,常染色体显性遗传性聋约占15%-20%。分子遗传学技术的飞速发展使常染色体显性非综合征型聋的基因定位和克隆工作取得了令人瞩目的进展。

听性脑干反应各波幅度的测量方法-动物实验研究

目的研究高刺激声强(90dB SPL)下豚鼠听性脑干反应(ABR)波Ⅰ、波Ⅲ、波Ⅴ的波幅测量方法。方法11只(22耳)2-3月龄白毛雌豚鼠,初测听力正常,测量短声(Click)、短纯音(4k、8k、12k、16k、24k、32kHz)下的听性脑干反应,记录反应阈及90dB SPL刺激声强下的基线高度、波Ⅰ、波Ⅲ、波Ⅴ的潜伏期、波间期、波峰高度、波谷高度,比较波幅的两种测量方法,即波峰-基线和波峰-波谷在90dB SPL刺激声强下,波Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ两种测量方法的稳定性,并比较两种测量方法下波Ⅰ波幅与Ⅰ/Ⅴ波幅比的稳定性。结果 90dB SPL声强下ABR波Ⅰ、波Ⅲ、波Ⅴ的波幅两种测量方法,波峰至基线比波峰至波谷所得的数据更集中,离散程度更小;两种方法的波Ⅰ波幅的变异系数均小于Ⅰ/Ⅴ波幅比。结论在豚鼠中,使用波峰-基线的幅度测量方法得到的最高刺激声强下的ABR波Ⅰ、波Ⅲ、波Ⅴ波幅更稳定;在正常豚鼠中判断波Ⅰ波幅有无下降,直接通过比较波Ⅰ波幅,比通过Ⅰ/Ⅴ波幅比的变异度更小。