Akt重组腺病毒载体的构建及其对肝癌细胞生存的影响

目的构建携带Akt基因的重组腺病毒载体,初步研究其对肝癌细胞生存的影响。方法分别将Akt-wt及Akt-dn基因亚克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA,采用RAPAd○RCMV腺病毒表达系统构建重组腺病毒并用PCR鉴定,以蛋白质印迹检测Akt及其下游GSK3β、p-GSK3β的表达,后将Akt重组腺病毒感染肝癌SK-HEP-1细胞,检测血清饥饿24h后细胞存活情况。结果酶切pacAd5 CMV-Akt-wt和pacAd5 CMV-Akt-dn均获得大小为6 kb和1.44 kb(Akt)的两个片段。PCR扩增得到1.44 kb左右的条带。蛋白质印迹结果显示两组中p-GSK3β表达有明显差别,肝癌SK-HEP-1细胞存活率在感染pacAd5 CMV-Akt-dn组较感染Akt-wt腺病毒组明显降低。结论成功构建了Akt-wt及Akt-dn基因重组腺病毒载体,并初步发现其有促进肝癌细胞死亡作用,为体内外进一步研究Akt基因及其相关信号通路在肝癌发生发展中的作用奠定了基础。