从人源性噬菌体抗体库分离出1株含有异常序列的抗HBsAg Fab克隆

曾从人源性噬菌体抗体库中筛选出１株抗人乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的Ｆａｂ克隆，为了筛选出新的抗ＨＢｓＡｇＦａｂ段，采用抗原屏蔽法，用已得到的Ｆａｂ段封闭相应的抗原决定基，对该抗体库进行了再次筛选，得到了１株新的人抗ＨＢｓＡｇＦａｂ段克隆，经序列分析发现其轻链可变区基因来源于Ｖκ１亚群和Ｊκ４基因，重链可变区基因来源于ＶＨ１亚群和ＪＨ４基因，但在ＶＨ第７７位和第７８位氨基酸残基之间出现了７个多余的氨基酸残基，经对基因数据库检索未能查到该序列的来源，但显然这段序列未影响抗体的抗原结合活性。

伽马刀放疗腹膜后淋巴结转移癌对肠道菌群的影响

目的:观察腹膜后淋巴结转移癌γ刀放疗后肠道菌群的变化。方法:选取经临床表现及影像学、病理学确诊的腹膜后淋巴结转移癌并拟行γ刀放疗患者40例为观察组,健康志愿者20例为正常对照组,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测观察组及正常对照组粪便中大肠杆菌、肠球菌属、双歧杆菌属及乳酸杆菌属细菌数量,并对两组结果进行比较分析。结果:与正常对照组比较,观察组患者γ刀放疗前及放疗后1周时粪便中4种目标菌群细菌数量无明显变化(P>0.05);γ刀放疗1个月后,粪便中大肠杆菌及肠球菌属细菌数量仍无显著变化(P>0.05),但双歧杆菌属及乳酸杆菌属细菌数量明显减少(P<0.05)。结论:使用γ刀放疗腹膜后淋巴结转移癌1个月不会引起大肠杆菌及肠球菌属细菌数量的改变,但可导致双歧杆菌属及乳酸杆菌属细菌数量明显下降。

肝细胞肝癌重要表面标志的表达和定位

目的肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我国常见恶性肿瘤。作为其主要标志分子的甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)表达具有一定局限性,临床需要联合其他标志分子以提高诊断准确性。文中旨在探讨若干候选生物标志物在中国人源HCC细胞和正常肝细胞中的表达和定位。方法采用直接或间接免疫荧光染色方法,探讨角蛋白(cytokeratin,CK)、去唾液酸糖蛋白受体1(asialoglycoprotein receptor1,ASGR1)和ASGR2、细胞表面分子(GPC3、CD90、CD133和EpCAM)等7种主要HCC表面标志分子在Bel-7402、Bel-7404和SMMC-7721等人HCC及正常肝细胞HL-7702的表达与定位情况。结果 CK、ASGR1和ASGR2在所有的肝来源细胞均表达;GPC3仅在HCC细胞表达。CD90、CD133和EpCAM仅在少量肝肿瘤干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)表达。结论 CK、ASGR1和ASGR2为肝细胞标志,GPC3是HCC相关标志;CD90、CD133和EpCAM仅在极少数肝肿瘤干细胞表达。

肝癌组织DNA-PKcs过量表达及其靶向siRNA分子的抗增殖作用

目的:研究肝癌组织中DNA依赖蛋白激酶催化亚基DNA-PKcs的表达差异及其生物学意义.方法:用组织芯片和免疫组化法检测肝胆癌组织86例,肝胆管结石切除肝组织17例标本和正常肝组织70例中DNA-PKcs蛋白表达情况,Western blot检测培养细胞中DNA-PKcs表达,Lipofectamine 2000介导DNA-PKcs的siRNA质粒DNA转染,细胞生长曲线分析细胞增殖,克隆形成法分析细胞辐射敏感性.结果:组织芯片检测显示,60例肝癌组织细胞中DNA-PKcs阳性表达率<25%(极低表达),25%-50%(低表达),51%-75%(中等表达)和>75%(高表达)分别占15%,20%,23.3%和41.7%,而64例正常肝组织中各DNA-PKcs阳性表达率分别为68.7%,10.9%,12.6%和7.8%,表明癌组织DNA-PKcs的表达水平显著高于正常组织(P=0.0008).26例肝癌组织病理切片的免疫组化结果也显示,其DNA-PKcs表达水平显著高于23例非肿瘤性肝组织(P= 0.001).Western blot检测结果显示,体外培养的肝癌细胞HepG2,7721和7402中DNA-PKcs表达水平,同样显著高于正常肝细胞LO2.siRNA分子靶向抑制DNA-PKcs表达,不但显著提高HepG2细胞对电离辐射的敏感性,同时还降低肝癌细胞的增殖速度.随着DNA-PKcs表达的抑制,癌基因c-Myc蛋白表达水平也显著降低.结论:肝癌组织细胞中DNA-PKcs表达水平显著高于正常肝组织和非肿瘤性肝病理组织,siRNA抑制DNA-PKcs表达,具有抗癌细胞增殖和放射增敏作用,c-Myc蛋白表达抑制可能是其抗增殖作用的相关机制之一.

从大容量噬菌体抗体库中筛选抗DNA-PKcs人源单链抗体

目的:从单链大容量噬菌体抗体库中筛选特异性的抗DNA-PKcs的人源抗体,用于肿瘤治疗或诊断目的。方法:经抗原性分析及BLAST比对,选定人DNA-PKcs蛋白中抗原性高且与其他蛋白没有同源性的片段,进行原核表达及纯化后将其固定在抗原管上,通过4轮"吸附-洗脱-扩增"过程从大容量抗体库中筛选特异性抗体,转化HB2151菌,制备抗DNA-PKcs的可溶性单链抗体;ELISA检测抗原-抗体结合活性。结果:经生物信息学分析,确定抗原性高且与其他蛋白没有同源性的DNA-PKcs片段DPK3(250个AA)、DPK4(257个AA)。经过4轮筛选,获得26个特异性结合DPK3及31个特异结合DPK4的克隆,指纹分析分别有5种和21种不同的可变区片段;成功制备了可溶性抗体。并做了抗原结合活性鉴定。结论:利用单链大容量抗体库获得抗DNA-PKcs的噬菌体抗体基因并且成功制备成可溶性抗体,为今后的研究和应用奠定了基础。

肿瘤间隙液的研究进展

肿瘤间隙液（tumor interstitial fluid,TIF）是由肿瘤内部产生的、肿瘤细胞与毛细血管/淋巴管之间营养交换和代谢产物运输的液体介质,其包含多种由组织局部产生或远处组织产生经血液循环而来的细胞因子和生长因子等物质,与细胞外基质和基质细胞一起,共同构成了肿瘤的微环境,对肿瘤的生长、浸润和转移起着重要作用^（[1-2]）。近20年来,随着蛋白质组和分泌组等学科的兴起,

益肺活血颗粒对血小板衍生生长因子诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及转化生长因子活性的影响

目的观察益肺活血颗粒(Yifei Huoxue Granule,YFHXG)对血小板衍生生长因子(platelet-de-rived growth factor BB,PDGF-BB)刺激大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖的抑制作用及对转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)活性的影响。方法采用组织块贴壁法原代培养大鼠PASMCs,取对数生长期PASMCs随机分为对照组,PDGF-BB组,YFHXG高、中、低剂量组(PDGF-BB+YFHXG,终浓度为7·5、1·5、0·3mg/mL)。噻唑蓝(MTT)比色法测定各组PASMCs的增值率,流式细胞仪测定细胞周期构成比和增殖指数(proliferation index,PI),链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(SP法)测定胞内TGF-β蛋白的表达量。结果与对照组比较,PDGF-BB组PASMCs增殖明显活跃(P<0·01);与PDGF-BB组比较,随着YFHXG各剂量组药物浓度的升高,大鼠PASMCs的生长明显受抑制、G0/G1期比例显著升高,S+G2/M期比例显著降低,PI显著降低,且TGF-β蛋白的表达量降低并呈浓度依赖关系(P<0·05,P<0·01)。结论 PDGF-BB可以直接刺激PASMCs的增殖,YFHXG可以显著抑制PDGF-BB对大鼠PASMCs的促增殖作用,并可调节TGF-β蛋白的表达。

提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体的表达和抗体的功能鉴定

目的 探讨人-鼠嵌合抗体ch-BD1体内和体外的表达和功能。方法 用分子生物学方法得到系列弱化表达的双氢叶酸还原酶(DHFR)基因片段,将其克隆入载体pDHL-BD1中构建得系列弱化表达DHFR基因的人-鼠嵌合抗体pWSD1-BD1,pWSD2-BD1,和pWSD3-BD1。将这些嵌合抗体以及pDHL-BD1分别转染缺陷表达DHFR基因的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)/DHFR-细胞,以Northern印迹鉴定其DHFR基因表达水平。将不同浓度的氨甲蝶呤(MTX)加入转染细胞的培养液,测定上清中的抗体水平。用 ^(99m)标记纯化的ch-BD1,加入系列稀释的人膀胱癌EJ细胞溶液中,测定结合在细胞上的抗体放射活性,计算标记抗体的亲和常数。将人膀胱癌EJ细胞注射入3只Balb/C小鼠后肢根部,4周后对肿瘤进行放射免疫显像。将标记抗体注射入小鼠尾静脉,分别于2 h,6 h,22 h和24 h后进行放射显像。结果 构建载体的 DHFR基因表达活性由强至弱的顺序为 pDHL-BD1>pWS1-BD1>pWS3-BD1>pWS2-BD1。MTX浓度为10^(-6)mol/L时ch-BD1的表达水平与DHFR基因的基础表达水平明显相关,DHFR基础水平越高抗体的表达水平亦越高。EJ细胞与标记抗体孵育后,ch-BD1的免疫活性分数为76％,亲和常数为3.56×10~9 M^(-1);鼠单抗BD1的免疫活性分数为81％,亲和常数为1.22×10~9M^(-1)。^(99m)标记的ch-BD1经尾静脉?