神经干细胞移植的临床应用及儿科应用展望

神经干细胞(NSCs)移植治疗中枢神经系统(CNS)疾病在动物实验及临床研究都取得令人鼓舞的进展。国内外NSCs移植治疗CNS疾病在成人临床应用中取得了较好结果。新生动物的实验研究及人NSCs移植治疗缺氧缺血性脑病(HIE)的临床应用,提示NSCs移植在儿科将会有较好治疗前景。

“和谐使命-2011”儿科医疗服务工作回顾

目的分析在加勒比地区进行海外医疗服务时儿童门诊就诊情况,为今后开展类似的医疗服务提供经验。方法根据此次前出执行任务所登记的内容进行分类统计分析。结果 4国门诊患儿以呼吸系统疾病、皮肤过敏性疾病、运动系统疾病及先天性畸形为主,疾病中以上呼吸道感染、湿疹、哮喘为主,使用药物中以抗生素和抗过敏药物为主。结论通过本次执行任务对当地的儿童卫生状况有了初步的了解,分析了相关问题。为今后开展此类工作提供了经验。

第五届全国、全军儿科细胞治疗学学习班暨高峰论坛

由中华医学会再生医学会、干细胞工程学会、中国医师协会神经修复学会、中国生物医药协会再生医学分会主办，中国人民解放军海军总医院儿科承办的第五届全国、全军儿科细胞治疗学学习班暨高峰论坛将于2015年4月17-19号在北京举行（16日报到）。

第五届全国、全军儿科细胞治疗学学习班暨高峰论坛通知

由中华医学会再生医学会、干细胞工程学会、中国医师协会神经修复学会、中国生物医药协会再生医学分会主办，中国人民解放军海军总医院儿科承办的第五届全国、全军儿科细胞治疗学学习班暨高峰论坛将于2015年4月17-19号在北京举行（16日报到）。

第五届全国、全军儿科细胞治疗学学习班暨高峰论坛通知

由中华医学会再生医学会、干细胞工程学会、中国医师协会神经修复学会、中国生物医药协会再生医学分会主办，中国人民解放军海军总医院儿科承办的第五届全国、全军儿科细胞治疗学学习班暨高峰论坛将于2015年4月17～19日在北京举行（16日报到）。

骨髓间充质干细胞移植治疗小儿重度脑性瘫痪的疗效观察

目的观察自体骨髓间充质干细胞移植治疗重度脑性瘫痪儿童的临床疗效。方法对50例重症脑性瘫痪患儿进行骨髓间充质干细胞移植,移植前、后6个月进行自身对照,比较患儿粗大运动和综合功能的进步程度,并随访移植后0、1、3、6、12个月患儿一般情况。结果 50例患儿自体骨髓间充质干细胞培养均成功。移植后6个月失访1例,至12个月失访4例,余46例完成观察。移植后6例患儿在手术后3～5 d即出现显著临床改善,大部分患儿在移植后3个月左右运动能力进步,6个月之后进步幅度减缓。移植前6个月综合功能评估进步程度为(19.14±9.82)%,移植后6个月为(28.49±10.52)%,移植后进步显著大于移植前(P=0.001),其中以运动和认知改善明显。粗大运动功能评估总百分比从移植前的(23.80±10.64)%,上升到移植后(27.31±11.72)%,平均每月上升(1.05±0.49)%,显著大于移植前6个月进步幅度(P=0.001)。结论自体骨髓间充质干细胞移植对康复治疗效果不佳的重症脑瘫患儿有明显临床改善作用,能够有效促进患儿各功能区的发育。

低体质量石骨症患儿外周血干细胞采集及其临床意义

目的探讨低体质量石骨症(OP)患儿进行外周血干细胞(PBSCs)采集的安全性及其临床意义。方法对1例低体质量OP患儿使用CS-3000plus血细胞分离机进行外周血采集,观察采集过程的安全性,记录采集前后单个核细胞(MNC)和CD34+细胞的细胞数,分析其临床意义。结果低体质量OP患儿能耐受PBSCs采集过程,采集物MNC和CD34+细胞分别为10.06×108/kg,2.74×106/kg。结论OP患儿无需使用粒细胞刺激因子动员即能采集到足够PBSC,为移植失败提供一补救措施;低体质量儿PB-SC采集是安全的。

长效核黄素预防大剂量甲氨喋呤化疗毒副反应疗效观察

目的观察长效核黄素对大剂量甲氨喋吟(HD-MTX)化疗常见毒副反应的预防效果。方法1996年10月至2004年8月期间,26例患儿共接受72个疗程HD-MTX化疗(3.0g/m2,持续静滴12 h),观察组41个疗程同时应用长效核黄素,对照组31个疗程不用。根据WHO抗癌药物毒副反应分度标准,观察比较两组患儿治疗后口腔黏膜损害、肝功能变化及骨髓抑制程度。结果观察组口腔黏膜损害发生率(12.2%,5/41)明显低于对照组(45.2%,14/31),且观察组损害程度较重(P=0.002)。两组间肝功能变化及骨髓抑制程度差异无显著性。结论HD-MTX化疗中应用长效核黄素可有效预防口腔黏膜损害,对肝功能损害及骨髓抑制无明显预防作用。

高压氧对外源性人神经干细胞移植治疗损伤脑组织神经元病理状态的改善效应

目的:研究证明高压氧治疗能明显减轻缺氧后宿主脑区深部水肿,减少内源性神经元变性与坏死,并增加围产期鼠新生神经元数量与碱性成纤维生长因子活性。实验拟进一步观察缺氧缺血性脑损伤大鼠移植人神经干细胞后予高压氧治疗对脑组织神经元病理改变的影响。方法:实验于2007-04在解放军海军总医院完成。①细胞来源及动物:经医院伦理委员会授权,孕妇知情同意下留取孕12周流产的人胎儿脑组织。新生7d龄SD大鼠20只,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法:取胎儿脑组织,在无菌条件下培养扩增并制备成人神经干细胞单细胞悬液。20只大鼠均建立缺氧缺血性脑损伤模型,3只死亡,剩余鼠随机数字表法分为2组,细胞移植+高压氧组9只,单纯细胞移植组8只。造模后3d,两组大鼠均于左侧侧脑室进行细胞移植,注射位点以前囟为参照点,AP=-1mm,ML=-1.5mm,DV=-4.0mm,缓慢注入2×106L-1细胞悬液5μL。移植后1h,将细胞移植+高压氧组大鼠放入高压氧舱内,给予高压氧通气,升压及降压过程各15min,最终达压力为1.8个绝对大气压,稳压60min,1次/d,连续10d。两组大鼠麻醉后断头取脑,制备组织切片。③实验评估:免疫荧光法检测神经干细胞巢蛋白的表达、人神经干细胞植入后神经丝蛋白表达及其向神经元分化情况。尼氏染色检测移植后脑组织皮质、海马神经元形态、结构的变化。结果:移植过程中细胞移植+高压氧组有1只鼠因麻醉死亡,高压氧通气过程中没有动物死亡。①人神经干细胞的鉴定:人胎儿脑组织体外培养12d获取生长旺盛的人神经干细胞小集落,即神经球。倒置显微镜下观察可见每个小集落为数十个细胞构成,细胞折光性强,周边有清晰的光晕。免疫荧光标记大部分活细胞表达巢蛋白。②人神经干细胞植入后神经丝蛋白表达及其向神经元分化:植入后10d,两组在皮质及海马区均可见神经丝蛋白阳性细胞,即植入细胞分化形成的神经元,其细胞形态与宿主内源性细胞相似。③神经元尼氏染色:两组大鼠均没有发现肿瘤形成。移植后10d与单纯细胞移植组相比,细胞移植+高压氧组海马及皮质区组织细胞水肿程度明显减轻,且海马CA1区、CA3区、齿状回神经元排列更整齐,组织结构更完整。结论:缺氧缺血性脑损伤新生大鼠移植人神经干细胞后,高压氧治疗可减轻损伤易感区组织细胞水肿程度,并使海马区神经元结构更加完整,推测有可能促进细胞的成活、迁移及分化。

英夫利西单抗与 IVIG 治疗 IVIG 初治无效川崎病效果比较

目的比较英夫利西单抗与静脉注射免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin, IVIG)治疗 IVIG 初治无效川崎病的效果。方法选取2013年1月至2017年10月本院儿科诊断的88例 IVIG 初治无效川崎病患儿为研究对象,其中22例患儿接受英夫利西单抗治疗(英夫利西单抗组),66例患儿追加 IVIG 治疗(IVIG复治组)。比较两组患儿持续发热时间、不同时间点的退热率、冠状动脉病变(coronary artery lesions,CALs)发生率及不良反应发生情况。结果英夫利西单抗组患儿平均持续发热时间[(16.8±2.9)小时]显著短于 IVIG 复治组[(56.3±8.6)小时](P<0.001),不同时间点退热率均显著高于 IVIG 复治组(P<0.05)。治疗后第10天,英夫利西单抗组1例患儿出现CALs,治疗后第56天恢复正常; IVIG 复治组9例患儿出现CALs,治疗后第56天病变仍存在。 IVIG 复治组1例患儿出现严重不良反应(治疗后3周川崎病复发);英夫利昔单抗组患儿便秘发生率显著低于 IVIG 复治组(P<0.05),治疗期间无一例患儿发生支气管炎; IVIG 复治组8例患儿发生支气管炎。两组患儿其他不良反应发生率比较均无显著差异(P>0.05)。结论英夫利西单抗能加速川崎病患儿退热,缩短患儿持续发热时间,且安全性良好,可有效治疗 IVIG 初治无效川崎病。

非血缘相关脐血移植治疗儿童高危白血病的临床观察

目的非血缘脐血具有快速寻求、容易得到和HLA配型不严格的特点，该文进行了非血缘相关脐血移植（UD-UCBT）治疗儿童恶性白血病的研究并探讨其疗效问题。方法对6例难治性白血病患儿，包括3例急性淋巴细胞白血病（2例高危CR1，1例标危CR2），2例幼年慢性粒单细胞白血病（1例缓解期，1例加速期）和1例急性髓系白血病（AML—M5，CR1）进行了非血缘相关脐血移植，HLA高分辨1例全相合，1例5个位点相合，1例4个位点相合，3例3个位点相合。预处理选用白消安／环磷酰胺／ATG或全身放疗／环磷酰胺／ATG为主方案。于0d回输脐血，有核细胞中位数为8．51×10^7／kg，CD34^＋细胞中位数为1．81×10^5／kg。预防移植物抗宿主病（GVHD）采用环孢霉素A、甲基泼尼松龙和骁悉或CD25单抗。结果中性粒细胞绝对值（ANC）≥0．5×10^9／L和PLT≥20×10^9／L的中位天数分别是＋13d、＋30d，移植证据均为供者型。4例出现Ⅰ-Ⅲ度GVHD，均控制。随访中位时间12个月，未发生慢性GVHD，现存活4例血型均转为供者型，无复发。结论脐血提供快速有效的造血干细胞，为治疗儿童白血病提供良好时机，非血缘相关脐血移植能耐受HLA多个位点不相合。急性GVHD发生率也较高，存在移植物抗白血病作用。

反复上呼吸道感染与婴幼儿饮食结构的相关性研究

目的探讨婴幼儿饮食结构与反复上呼吸道感染的关系。方法对270例足月正常产并反复上呼吸道感染患儿进行问卷调查(病例组),选择同期于本院体检的健康儿童270例作为对照组。采集两组研究对象出生、抚育、生长发育及既往病史等基本信息,分析饮食结构与反复上呼吸道感染的关系,对饮食结构中影响反复上呼吸道感染的多因素进行Logistic回归分析,比较两组研究对象血清微量元素、免疫球蛋白(Ig)及T细胞亚群水平。结果 Logistic回归分析表明,未按时添加维生素A+D、肉类蛋白类、蔬菜水果类及喜甜食、经常饮用煲汤是反复上呼吸道感染的危险因素。病例组患儿血清维生素D3、锌、铁、铜、镁、Ig G、Ig A、Ig M、CD4+、CD4+/CD8+水平均低于对照组,CD8+水平明显高于对照组,差异均具有显著性(P<0.05)。结论婴幼儿不良饮食习惯与反复上呼吸道感染发作密切相关,合理的饮食结构和指导在预防和治疗小儿反复上呼吸道感染的发生发展中具有重要作用。

粒细胞集落刺激因子联合神经干细胞移植治疗重度缺氧缺血性脑病疗效分析

目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联合神经干细胞(NSCs)移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)的疗效,为临床更有效的治疗HIE提供理论基础。方法新生7 d的SD大鼠建立重度HIE模型后,分为对照组、G-CSF组、NSCs组和G-CSF+NSCs组。G-CSF组在建模后1 h皮下注射G-CSF 50μg/(kg·d),共5 d;NSCs组在建模后第2天经脑室移植NSCs;G-CSF+NSCs组则在每天注射G-CSF的基础上进行NSCs移植;对照组注射等量生理盐水。在建模1、2和4周后通过脑重和mNSS评分分析治疗效果,并在建模4周后对大鼠脑组织行冰冻切片进行病理学分析。结果建模1、2和4周后,对照组大鼠的脑重明显低于其他三组,且4周后NSCs组、G-CSF+NSCs组大鼠脑重高于G-CSF组,差异均有统计学意义(P<0.01)。建模1、2和4周后,对照组大鼠mNSS评分显著高于其他三组;建模2、4周后,G-CSF+NSCs组大鼠mNSS评分低于G-CSF组,差异均有统计学意义(P<0.05)。病理检查显示,G-CSF+NSCs组神经细胞排列最整齐,未见变性坏死的神经细胞。结论单独G-CSF或NSCs移植均可减轻HIE的神经损伤症状,联合治疗可取得最佳疗效。

人神经干细胞移植到缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内的存活及分布

目的：新生儿缺氧缺血性脑病是导致脑性瘫痪的重要原因,至今缺乏有效疗法。将体外培养的人神经干细胞经脑室移植入缺氧缺血性脑损伤新生鼠,观察植入细胞在宿主脑内的存活、迁移及分化。方法：实验于2005-01/09在解放军海军总医院儿科实验室完成。①对象：神经干细胞来源于孕12周流产的人胎儿脑组织,孕妇签署知情同意书,符合医院伦理委员会规定。清洁级SD新生鼠80只,随机数字表法分为细胞移植组、模型对照组,40只/组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：取人胚胎脑组织,机械分散法分离单个核细胞,接种于添加表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中,获取生长旺盛的人神经干细胞球,制成单细胞悬液,浓度约为5.0×10^11 L^-1,培养6d后行PKH标记用于植入后示踪。两组新生鼠均建立缺氧缺血性脑损伤模型,造模后3d,细胞移植组损伤侧脑室缓慢注入5μL人神经干细胞悬液,模型对照组于相同部位注入等量生理盐水。③实验评估：取未经PKH标记的细胞球,通过免疫细胞化学染色鉴定巢蛋白的表达及其向神经元、星形胶质细胞的分化情况。分别于细胞移植后1,2,4周及3个月,常规取脑组织,行免疫组织化学和荧光分析,观察植入后细胞存活及分布情况。结果：在造模及细胞移植过程中,因麻醉、出血细胞移植组新生鼠死亡5只,模型对照组死亡7只,存活率85%～90%。①神经干细胞的鉴定及分化：80%活细胞巢蛋白呈阳性表达,并可分化为神经元、星形胶质细胞。②神经干细胞植入后存活及分布情况：植入后1周,神经丝蛋白阳性细胞多位于损伤侧皮质及海马处,纹状体、脑干、小脑、嗅球也有少量分布。植入后2周,海马和皮质可见神经丝蛋白阳性细胞,胞体伸出的神经微丝更长,细胞数量与1周时基本相似。植入后4周及3个月时PKH阳性细胞数量明显减少。结论：在含有表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中形成的人神经干细胞球,具有良好的增殖能力,可分化为神经元,移植至缺血缺氧新生鼠脑中能够向损伤区迁移,分布范围广。

经CD34^+纯化的自体外周造血干细胞移植治疗小儿皮肌炎1例报告

目的探讨经CD34+纯化的自体外周造血干细胞移植治疗小儿皮肌炎的疗效。方法1例3岁皮肌炎患儿接受经CD34+纯化的自体外周造血干细胞移植。采用环磷酰胺(CTX)+粒细胞集落刺激因子(G-CSF)方案动员外周血干细胞后,通过CliniMACS细胞分选仪分选CD34+细胞,预处理选用CTX、兔抗人T淋巴免疫球蛋白(ATG)和马法兰(MeL)。0天回输CD34+细胞数9.45×106/kg。观察症状体征变化、造血重建及免疫恢复情况。结果动员获得单核细胞数为1.04×107/kg,经纯化获得CD34+细胞占94%,CD34+细胞回收率达67%,去除3个对数级CD3+。+9d粒系植入,+14d巨核系植入。+19d皮损恢复正常,四肢肌力由移植前Ⅱ级或Ⅲ级转为Ⅳ级。+180d免疫恢复,+210d肌力恢复Ⅴ级。结论对常规治疗无效的小儿皮肌炎,可选择CD34+纯化自体外周造血干细胞移植。

非血缘脐血及骨髓移植治疗儿童血液病的meta分析

目的观察非血缘脐血移植(UCBT)和非血缘骨髓移植(UBMT)对儿童血液病的治疗效果。方法计算机检索Cochrane、Medline、CNKI、CBM在1999-2007年期间发表的关于儿童脐血移植和非血缘骨髓移植的研究文献。从干细胞植入、移植并发症、早期死亡、生存率等方面对比分析了UCBT和UBMT的临床疗效。采用Review Manager 4.2软件进行meta分析,发表性偏倚采用倒漏斗图(funnel plot)显示。结果检索出292篇文献,最终纳入6个试验共668例患儿。UCBT与UBMT相比,因植入延迟使植入失败率增高、早期移植相关死亡率增加,但巨细胞病毒(CMV)感染并未明显增加,而慢性移植物抗宿主病(GVHD)减少使两者的长期生存率相似。结论儿童UCBT和UBMT移植后的长期生存率无明显区别,目前文献表明,UCBT也是儿童血液病的有效治疗方法。

单倍体造血干细胞移植骨髓采集术供者的心理护理和健康教育

目的使骨髓供者能够正确认识骨髓移植对受者的作用及重要性,了解采髓术的安全性,积极主动的为受者提供骨髓的捐献,从而保障骨髓采集顺利进行。方法我们根据供者年龄、知识背景以及对知识的接受程度、供者的心理状态,灵活的采取了口头讲解、书面教育、随机性教育三种教育方式,对50例供者有针对性地采取相应的心理护理和健康教育。结果 50例供者中有12例供者在骨髓采集前产生焦虑、紧张、入睡困难等不适,30例供者担心手术后会影响自身的健康,8例供者对骨髓采集术知识缺乏,通过我们的健康教育和心理护理,38例供者完全了解了骨髓移植对受者的重要性及采髓术的全过程,捐献骨髓对供者的健康没有影响;12例供者不同程度地消除了焦虑、紧张、恐惧等心理,减轻骨髓移植供者的心理负担,促使了手术的顺利进行,挽救了患者的生命。结论通过对供者实施健康教育和心理护理,可以使供者了解捐献骨髓的相关知识,调动了供者的主观能动性,树立正确观念,消除紧张、恐惧的心理,减轻心理负担,为移植受者提供了更多的生存几率。

含照射与纯化疗的两种不同移植预处理方案对急性、慢性髓系白血病的治疗效果:Meta分析

本研究旨在观察含照射与纯化疗的两种不同的移植预处理方案对急、慢性髓系白血病患者采用造血干细胞移植(HOCT)的治疗效果和不良反应。计算机检索Cochrane、MEDLLINE、CNKI、CBM在1990-2007年期间发表的关于急、慢性髓系白血病HSCT中不同预处理方案的研究文献;从干细胞植入、移植后的并发症、长期生存率等方面进行对比分析;采用Review Manager软件进行Meta分析。结果显示:检索出2 149篇英文文献和46篇中文文献,最终纳入9个临床对照试验共3 039例患者。分析结果表明,TBI/CY和BU/CY两种预处理方案在植入失败率和移植相关死亡率无明显区别,但BU/CY组移植后的并发症如并发肝静脉闭塞症、出血性膀胱炎明显增加,而TBI/CY组病人移植后的急性移植物抗宿主病、间质性肺炎及白内障等明显增加;不同的疾病在两种预处理方案结局不同,对AML病人TBI/CY组移植后的复发危险明显低于BU/CY组,移植后的长期无病生存也明显优于BU/CY组,但对CML病人则TBI/CY组移植后的复发危险明显高于BU/CY组,而两种预处理方案的长期无病生存无明显区别。结论:目前有限文献表明两种不同移植预处理方案各有优缺点,对AML病人TBI/CY组优于BU/CY组,而对CML病人两组无明显区别。本结果对临床医生合理选择预处理方案具有参考意义。

婴幼儿浅静脉留置针置入术的护理及其效应

目的 减少护患矛盾 ,提高家长对护士技术的满意度。方法 将 80例 10～ 18个月、体重超标 10 %～ 2 0 %的首次住院、首次输液的急性病患儿随机分成两组 ,对观察组患儿及家长在操作前、中、后进行心理护理 ,比较两组患儿家长对护士技术的满意度。结果 两组患儿家长对护士技术的满意度有显著差异。结论 在婴幼儿浅静脉留置针置入术中 。