伯舒替尼诱导急性髓系白血病细胞分化和细胞凋亡

目的探讨伯舒替尼对人急性髓系白血病（AML）细胞株HL-60、THP-1和U937细胞分化和凋亡的影响及其作用机制。方法伯舒替尼0~20μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞48 h,MTT法检测细胞增殖;伯舒替尼0~5μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,流式细胞仪检测细胞CD11b表达;伯舒替尼0~10μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,胱天蛋白酶（caspase）广谱抑制剂benzyloxy-carbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethyl-ketone（Z-VAD-FMK）预处理1 h后加入伯舒替尼处理U937细胞48 h,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;不同浓度伯舒替尼（0~5μmol/L）分别处理HL-60和U937细胞24 h后,Western印迹法检测细胞分化相关转录因子C/EBPβ、P21和c-Myc以及凋亡相关分子Mcl-1、Bax和Caspase 3蛋白表达的改变。结果伯舒替尼剂量依赖性抑制AML细胞增殖。与空白对照组相比,不同浓度伯舒替尼处理AML细胞72 h后,细胞CD11b表达和细胞凋亡率均明显增加（P〈0.05或P〈0.01）。伯舒替尼处理HL-60细胞有效上调C/EBPβ和P21的蛋白表达水平,引起U937细胞Mcl-1表达降低和Bax表达增强,并激活caspase 3,而Z-VAD-FMK预处理U937细胞显著抑制伯舒替尼诱导的细胞凋亡。结论伯舒替尼可有效抑制AML细胞增殖,诱导细胞分化和促进其凋亡,可作为有效治疗AML的潜在药物。

嘧螨酯诱导急性髓系白血病细胞凋亡

目的探讨嘧螨酯(fluacrypyrim,FAPM)对人急性髓系白血病(AML)细胞株NB4、THP-1和HL-60细胞凋亡的影响及其作用机制。方法不同浓度嘧螨酯(1.25、2.5、5和7.5μmol/L)处理NB4、THP-1和HL-60细胞72 h,锥虫蓝染色法检测细胞增殖;嘧螨酯(1.25、2.5和5μmol/L)处理NB4和THP-1细胞48 h,或嘧螨酯(2.5、5和7.5μmol/L)处理HL-60细胞72 h,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;嘧螨酯(1.25、2.5和5μmol/L)处理NB4细胞24 h,Western印迹法检测凋亡调控蛋白Bax、Mcl-1和胱天蛋白酶(Caspase)3蛋白表达的改变;Caspase广谱抑制剂benzyloxy-carbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethyl-ketone(Z-VAD-FMK)20μmol/L预处理1 h后加入嘧螨酯2.5μmol/L处理NB4细胞24 h,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;嘧螨酯(1.25、2.5和5μmol/L)处理NB4细胞24 h后,Western印迹法检测细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号分子ERK、JNK和P38磷酸化蛋白及其总蛋白表达的改变。ERK抑制剂U0126 10μmol/L、JNK抑制剂SP600125 10μmol/L或P38抑制剂SB203580 10μmol/L预处理1 h后加入嘧螨酯2.5μmol/L处理NB4细胞24 h,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果嘧螨酯(2.5、5和7.5μmol/L)处理72 h均可显著抑制NB4、THP-1和HL-60细胞增殖(P<0.01)。与空白对照组相比,嘧螨酯5μmol/L处理NB4、THP-1细胞48 h和嘧螨酯7.5μmol/L处理HL-60细胞72 h,均可显著诱导细胞凋亡(P<0.01);嘧螨酯2.5、5μmol/L处理NB4细胞24 h,可显著诱导促凋亡分子Bax蛋白表达上调(P<0.01,P<0.05),降低抗凋亡分子Mcl-1蛋白表达水平(P<0.01),引起Caspase 3酶原降解而激活Caspase(P<0.01);Z-VAD-FMK预处理明显阻断嘧螨酯诱导的NB4细胞凋亡(P<0.01)。此外,与空白对照组相比,不同浓度嘧螨酯(2.5、5μmol/L)能增强ERK、JNK、P38磷酸化蛋白表达(P<0.01),而U0126预处理NB4细胞显著抑制嘧螨酯诱导的细胞凋亡(P<0.01)。结论嘧螨酯能够有效抑制AML细胞增殖,并诱导Caspase依赖性细胞凋亡,其中ERK/MAPK信号途径的激活可能发挥重要作用。

中性粒细胞胞外诱捕网在抗磷脂综合征中的检测及形成机制的初步研究

目的检测APS患者外周血中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)水平,并初步探讨其形成机制。方法收集27例APS患者和30名健康对照者血浆,PicoGreen核酸定量分析试剂盒检测血浆中循环游离DNA(cf-DNA)的含量,ELISA法分析血浆中瓜氨酸化组蛋白3(CitH3)浓度,并分析cf-DNA/NETs含量与APS患者血栓事件的关联。密度梯度离心法分离健康对照组中性粒细胞,体外用抗β2糖蛋白I(β2-GPI)/β2GPI复合物(100 μg/ml)刺激4 h,测定培养上清中cf-DNA/NETs的含量,进一步采用Toll-样受体4(TLR4)抑制剂-TAK242(5 μmol/L),观察是否能够干预抗β2GPI/β2GPI复合物对细胞的刺激效应。组间差异采用方差分析或秩和检验,两两比较采用Sidak或Dunnett′s,变量间的相关性采用Spearman相关分析。结果与健康对照组相比,APS患者血浆cf-DNA/NETs浓度和CitH3含量均显著升高[175.7(70.6,205.7)ng/ml与29.8(7.6,115.7)ng/ml,Z=-3.654,P<0.05;19.5(7.8,26.4)ng/ml与3.3(0.84,10.3)ng/ml,Z=-3.932,P<0.05],且CitH3含量与cf-DNA/NETs浓度两者具有相关性(r=0.447,P=0.019);在APS患者组,动脉血栓患者与静脉血栓患者的血浆cf-DNA/NETs差异无统计学意义[177.1(67.8,297.2)ng/ml与184.7(82.4,233.9)ng/ml,Z=-0.301,P=0.786],而新近发生血栓事件的患者(时间≤1个月)血浆cf-DNA/NETs含量高于既往有动静脉血栓发生的患者[192.1(83.6,328.8)ng/ml与90.0(42.8,184.7)ng/ml,Z=-2.006,P=0.046]。体外实验中,抗β2GPI/β2GPI复合物(100 μg/ml)能够刺激中性粒细胞释放cf-DNA/NETs,与对照组相比差异有统计学意义(t=10.39,P<0.05),而TAK242明显抑制抗β2GPI/β2GPI复合物对细胞的刺激效应(t=4.22,P<0.05)。结论APS患者外周血cf-DNA/NETs水平显著增加,其可能在APS血栓形成中发挥重要作用;抗β2GPI/β2GPI复合物通过TLR4诱导cf-DNA/NETs形成,参与APS病理过程。