CXCR7沉默对HeLa细胞侵袭和迁移能力的影响及其在宫颈癌中的表达

目的:探讨趋化因子受体7(CXCR7)沉默对HeLa细胞侵袭及迁移能力的影响及其在宫颈癌及正常宫颈组织中的表达情况。方法:靶向CXCR7的短发夹RNA(shRNA)质粒(CXCR7-shRNA)或对照质粒(Ctrl-shRNA)转染HeLa细胞后,通过Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力变化。利用免疫组织化学方法检测CXCR7在宫颈癌组织及正常宫颈组织中的表达情况。结果:CXCR7蛋白在20例宫颈癌组织中有16例呈阳性表达。5例正常宫颈组织中CXCR7蛋白表达均呈阴性。Transwell侵袭实验和迁移实验表明,CXCR7-shRNA转染组迁移穿过膜的数量明显低于Ctrl-shRNA转染组和未转染组。结论:宫颈癌组织中特异性高表达CXCR7,抑制宫颈癌细胞CXCR7的表达可显著抑制其侵袭及迁移,因此,CXCR7有望成为宫颈癌治疗的重要靶点。

双侧肾上腺非霍奇金性淋巴瘤1例并文献复习

淋巴瘤在病理学上分为霍奇金病(Hodgkin’s disease,HD)和非霍奇金性淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)两类,其中NHL占淋巴瘤的90%左右,其发展迅速、易发生早期远处转移。肾上腺淋巴瘤有原发性和继发性之分,原发性肾上腺恶性淋巴瘤(primary adrenal lymphoma,PAL)非常罕见,仅占结外恶性淋巴瘤的3%[1]。PLA是指淋巴瘤仅局限于肾上腺(单侧或双侧)而全身无其他部位的淋巴瘤病灶。因其发病率低、相对罕见,因此目前PAL在国内外均为个案报道。本文旨在提供PAL详实的影像、病理等临床资料,为积累PAL的病例资料和治疗提供依据。

HPLC-MS/MS法测定大鼠肺透析液中头孢哌酮/舒巴坦的浓度

目的建立液质联用(HPLC-MS/MS)法测定大鼠肺部透析液中头孢哌酮/舒巴坦的浓度。方法微透析样品通过HPLC-MS/MS检测,用Agilent Elipse XDB-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.125%甲酸水,等度洗脱,以负离子扫描多反应监测扫描方式进行检测。检测的离子对头孢哌酮m/z 644.2→m/z 115.2,舒巴坦m/z 232.0→m/z 140.0,内标奥美拉唑m/z344.3→m/z 194.1。结果头孢哌酮/舒巴坦的线性范围分别为0.2~20μg·mL^(-1),0.05~10μg·mL^(-1);日间和日内精密度相对偏差均小于15%;准确度和稳定性均符合生物样品的测定要求。结论本方法灵敏度高,操作简便快捷,适用于微透析样品中头孢哌酮/舒巴坦的浓度测定。

三阴性乳腺癌细胞对磷脂酰肌醇3激酶抑制剂产生抗药性的分子机制

目的 探讨三阴性乳腺癌（TNBC）细胞对磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂产生抗药性的分子机制。方法 运用脂质体2000试剂盒将siFZD7、siWANT5B或siGSK3转染TNBC细胞HCC70，Western blot法测定WNT/β-连环蛋白（WNT/β-catenin）和磷脂酰肌醇3激酶/苏氨酸激酶/雷帕霉素靶蛋白（PI3K/AKT/mTOR）信号通路关键蛋白的表达。将PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂作用TNBC细胞HCC70、雌激素受体（ER）阳性乳腺癌细胞MCF-7和人表皮生长因子受体2（HER2）阳性乳腺癌细胞SK-BR3，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖抑制率，并计算半数抑制浓度（IC50）；Western blot和荧光素酶报告基因实验检测WNT/β-catenin和PI3K/AKT/mTOR信号通路的活性变化对乳腺癌细胞增殖的影响；免疫荧光实验检测β-catenin蛋白核转位。将BKM120处理的乳腺癌细胞皮下注入裸鼠体内，观察其致瘤能力，采用免疫组化法检测肿瘤组织中磷酸化肺耐药相关蛋白6（p-LRP6）、磷酸化eIF4E结合蛋白1（p-4EBP1）和β-catenin蛋白的表达。结果 siRNA转染的HCC70细胞中，卷曲蛋白7（FZD7）、细胞外因子5B （WANT5B）、糖原合成酶激酶3（GSK3）表达显著降低，WNT/β-catenin活性升高，PI3K/AKT/mTOR活性降低。PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂能抑制MCF-7和SK-BR3细胞的增殖，GDC-094、BKM120、XL147、perifosine、everolimus、BEZ235对MCF-7细胞的IC50分别为0.46 mmol/L、1.44 mmol/L、4.34 mmol/L、11.35 μmol/L、53.71 μmol/L和12.87 μmol/L，对SK-BR3细胞的IC50分别为0.63 mmol/L、0.58 mmol/L、3.74 mmol/L、13.22 μmol/L、60.00 μmol/L和11.38 μmol/L。荧光素酶报告基因检测显示，经BKM120处理后，HCC70、MCF-7和SK-BR3细胞中的荧光素酶活性分别为1.75±0.05、1.13±0.02和0.43±0.01，对照组的荧光素酶活性为1.00±0.02，HCC70、SK-BR3细胞中的荧光素酶活性与对照组差异有统计学意义（P〈0.05）。BKM120能抑制mTOR的活性，提高WNT/β-catenin活性能解除BKM120对mTOR活性的抑制。BKM120能抑制MCF-7和SK-BR3细胞的体内致瘤能力，但对HCC70细胞的致瘤能力无影响。免疫组化检测显示，BKM120处理的HCC70细胞接种于裸鼠后，肿瘤组织中β-catenin蛋白发生核转位，p-LRP6蛋白表达增加，p-4EBP1蛋白表达无变化；BKM120处理的MCF-7细胞接种于裸鼠后，肿瘤组织中β-catenin蛋白未发生核转位，p-LRP6和p-4EBP1蛋白表达降低。结论 HCC70细胞对PI3K抑制剂具有抗药性，WNT/β-catenin信号通路可调节PI3K/AKT/mTOR信号通路，从而诱导TNBC细胞对PI3K抑制剂的抗药性。

表达炭疽保护性抗原的日本脑炎病毒复制型DNA载体的免疫原性研究

目的探讨应用日本脑炎病毒(JEV)复制子pCMW-2M构建炭疽JEV复制子DNA疫苗候选株的可能性。方法实验起止时间:2009年1—5月。将炭疽保护性抗原(PA)基因插入复制子pCMW-2M,构建重组质粒pCMW-2MPA。选取6~8周龄的SPF级雌性BALB/c小鼠18只,将其随机分为pCMW-2MPA组(6只,注射pCMW-2MPA)、pCMW-2M组(6只,注射pCMW-2M)、PBS组(6只,注射PBS),进行pCMW-2MPA免疫小鼠实验。观察重组Trx-PA在大肠杆菌中的表达和纯化情况,检测pCMW-2MPA在BHK-21细胞中的表达情况,测定各组小鼠第1、2、3次免疫血清抗PA抗体滴度,检测各组小鼠T细胞刺激指数。结果用SalⅠ和Bsp EⅠ酶切鉴定重组质粒pCMW-2MPA,出现2 025bp和12 500bp两个条带。重组Trx-PA分子量约30KD,与预期一致,其中500 mmol/L咪唑洗脱组分目的蛋白含量较高、杂蛋白几乎没有,重组Trx-PA水平约为300ng/ml。pCMW-2MPA在约30%的BHK-21细胞中呈阳性表达,呈现绿色荧光。pCMW-2MPA组、pCMW-2M组、PBS组随着免疫次数的增多,血清抗PA抗体滴度逐步增高(P<0.05)。pCMW-2MPA组、pCMW-2M组、PBS组第1次免疫、第2次免疫、第3次免疫血清抗PA抗体滴度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。pCMW-2MPA组、pCMW-2M组、PBS组T细胞刺激指数比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的炭疽JEV复制子pCMW-2MPA以DNA形式免疫小鼠后能够产生特异性体液免疫反应和细胞免疫反应,可作为炭疽JEV复制子DNA疫苗候选株。