烧伤病房MRSA医院感染暴发的PFGE分型研究

利用表型分型和基因分型的方法解析医院感染常见致病菌——耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)造成医院感染暴发的可能传播途径。本实验对某医院烧伤科、ICU、肿瘤科病房内从患者和环境分离的19株MRSA,进行了16种抗生素的耐药性实验和全基因组稀有位点限制性内切酶酶切脉冲凝胶电泳(PFGE)分析,并聚类分析归纳了菌株之间的相关性。结果发现在19株MRSA中有11株属于同一个菌种A型,在这些菌株中,有8株属于相同的克隆亚型A1型,分别来自烧伤科和ICU患者以及烧伤科医生、护士的手。4株属于B型,均分离自同一烧伤病房。这暗示该医院可能存在MRSA(A型)院内感染的暴发,并且存在B型流行的潜在危险。MRSA很有可能通过医护工作人员的手及鼻腔等媒介在患者间传播。因此,加强医护人员的感染控制观念,利用灵敏、可靠且分辨率强的分型技术加强MRSA感染监控至关重要。

住院患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌定植与感染相关研究

目的调查住院患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)定植及感染的状况,分析MRSA定植与感染的关系。方法对某大医院神经内科住院患者在入院48h内及以后每周一、三、五采集鼻前庭标本,同时收集该期间住院患者送检临床标本中分离的MRSA菌株。以低频限制性位点聚合酶链反应(IRS-PCR)基因分型法对患者鼻前庭标本和临床标本分离的MRSA菌株进行同源性分析。结果共调查265例患者,MRSA定植者14例(5.28%),其中7例为入院前定植,7例为入院后定植;MRSA感染者10例(3.77%),其中8例的鼻前庭标本和临床标本均分离出MRSA,另2例仅临床标本分离出MRSA。IRS-PCR基因分型显示MRSA感染患者临床标本和鼻前庭标本分离出的MRSA具有很高的同源性。结论住院患者定植MRSA是发生MRSA医院感染的一个重要危险因素。

病原真菌感染与TOLL样受体

TOLL样受体(TLR)是参与天然免疫的主要模式识别受体之一,与许多微生物病原体及其产物的病原相关分子模式PAMP结合后通过MyD88依赖性或非依赖性途径启动宿主胞内信号传导途径,引发一系列生物学效应。白色念珠菌表面的特征性糖磷脂甘露聚糖可被TLR2、TLR4识别,诱导前炎性细胞因子的释放及促进中性粒细胞的聚集等来介导宿主的抗真菌免疫反应。烟曲霉则可能利用表型转换(酵母样与菌丝态),通过不同TLRs逃避宿主天然免疫系统的识别。新型隐球菌的多糖荚膜成分葡糖醛氧化甘露聚糖GXM可与TLR2、TLR4、CD14结合,在单核细胞、巨噬细胞对GXM的内化、吞噬中起重要作用,而不是诱导细胞因子的分泌;酿酒酵母胞壁成分酵母多糖则可激活TLR2、TLR6异源二聚体。总之,TLR与真菌配体相互作用的具体机制及其活化后胞内信号传导调控机制的深入研究与分析,对临床真菌病的免疫调节及治疗具有重要意义。

李斯特菌诱导宿主细胞骨架重排与磷脂酶D

无论是免疫细胞对病原体的主动吞噬,还是病原体诱导非吞噬细胞的被动吞噬,均是不同细胞膜受体介导的细胞肌动蛋白骨架重排过程,受到单体G蛋白和肌动蛋白骨架相关蛋白的精密调控。细胞内重要信号蛋白,磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D(PLD)的活性变化与细胞肌动蛋白骨架重排密切相关,其参与调节了由抗体受体(FcγR)及补体受体(CR3)介导的免疫细胞的主动吞噬,而细胞肌动蛋白骨架解聚蛋白cofilin被磷酸化后可与PLD结合并激活PLD,进而调节肌动蛋白骨架重排。另一方面,cofilin磷酸化状态严格调控李斯特菌感染细胞过程中的肌动蛋白骨架重排。因此,阐明PLD是否在李斯特菌感染细胞过程中被激活并参与调节肌动蛋白骨架重排,将有助于揭示PLD激活对感染发生的调控作用,对透彻理解细菌感染宿主细胞的分子机制具有重要意义。

Toll样受体在烟曲霉侵染宿主细胞过程中作用的研究进展

烟曲霉侵染宿主细胞时伴有明显的细胞肌动蛋白骨架重排,而重要模式识别受体PRRs(pattern recognition receptors)之一,Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)参与调节病原细菌诱导的宿主细胞肌动蛋白骨架重排,其中TLR2和TLR4两亚型可以识别烟曲霉的病原相关分子模式PAMP(pathogen-assosiated molecular patterns),并诱发炎症因子表达等一系列效应信号,在宿主细胞抗烟曲霉天然免疫中发挥重要作用,但在烟曲霉内化侵入过程中TLR能否特异性介导细胞肌动蛋白骨架重排尚不清楚。因此,研究揭示TLR激活在烟曲霉侵入宿主细胞的调控作用,对寻找可能的抗真菌药物作用靶点具有重要意义。

李斯特菌侵染宿主细胞过程中磷脂酶D活性变化的初步研究

磷脂酶D(phospholipase,PLD)在感染和炎症反应中发挥重要作用,然而其在单核增生李斯特菌(简称李斯特菌)侵染非洲绿猴肾细胞(Vero)中是否被激活尚未见报道。对李斯特菌刺激下的Vero细胞内PLD的活性变化进行了初步研究。以李斯特菌、佛波醇PMA分别刺激正常细胞及高效表达PLD2-K758R功能缺陷蛋白腺病毒预感染的Vero细胞,研究Vero细胞内PLD活性变化。结果发现,与对照组相比(不给予刺激),在李斯特菌和佛波醇PMA刺激正常Vero细胞过程中,胞内PLD活性增强非常显著。mPLD2-K758R蛋白的过度表达对Vero细胞的PLD基础活性无影响,但对李斯特菌和PMA诱导的PLD激活有明显抑制作用。这初步表明,在李斯特菌诱导的Vero细胞对其吞噬过程中的确伴有PLD的激活,并且可能主要是PLD2亚型被激活,但此吞噬过程中PLD的激活机制及激活后PLD的具体功能尚有待进一步研究。

IRS-PCR对临床分离株MRSA的分型研究

目的探讨稀有限制区多聚酶链式反应(infrequent-restriction-site PCR,IRS-PCR)在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant staphylococcus aureus,MRSA)基因分型中的应用价值,为临床治疗和预防提供科学依据。方法用头孢西丁纸片扩散法检测分离自神经内科病房患者的MRSA,PCR扩增MRSA菌株mecA基因,并利用IRS-PCR对MRSA菌株进行基因分型。结果临床分离株MRSA经PCR扩增出533bp的mecA基因片段,ISR-PCR产物电泳结果显示,10株MRSA临床分离株分为A(6株)、B(2株)和C(2株)共3个亚型。结论IRS-PCR能对MR-SA菌株快速分型,是一种有价值的分子流行病学研究工具。