miR-21-5p通过靶向TGF-β1改善LPS诱导的脓毒症实验研究

目的确定miR-21-5p与转化生长因子-β1(TGF-β1)的靶向关系,并探索miR-21-5p和TGF-β1相互作用对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症小鼠的影响。方法构建LPS诱导的脓毒症小鼠模型,检测其降钙素和超敏C反应蛋白的水平以确定构建成功。将小鼠分为对照组、脓毒症组、NC antagomir组、miR-21-5p antagomir组、siRNA-NC组、si-TGF-β1组,每组6只。miR-21-5p antagomir组静脉注射miR-21-5p antagomir以低表达miR-21-5p,si-TGF-β1组静脉注射si-TGF-β1以低表达TGF-β1,通过qRT-PCR检测miR-21-5p和TGF-β1的表达情况。用Target Scan软件预测miR-21-5p与TGF-β1的靶位点,将miR-21-5p antagomir和si-TGF-β1分别转染293T细胞,用Western blot检测TGF-β1的表达水平,通过双荧光素酶报告分析测定野生型(TGF-β1-wt)和突变型(TGF-β1-mut)对荧光素酶活性影响,进一步确定miR-21-5p与TGF-β1的靶向关系。测定对照组、脓毒症组、miR-21-5p antagomir组、si-TGF-β1组小鼠血清中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、降钙素和超敏C反应蛋白的水平。结果构建LPS诱导的脓毒症小鼠血清降钙素和超敏C反应蛋白、TGF-β1水平高于对照组,miR-21-5p低于对照组(P<0.05,P<0.01)。分别转染miR-21-5p antagomir和si-TGF-β1到模型小鼠后,miR-21-5p和TGF-β1表达显著降低,瞬转成功。在TGF-β1的3’UTR区425-432 bp区域有2个hsa-miR-21-5p潜在的靶向结合位点。与对照组比较,将si-TGF-β1转染到293T细胞后TGF-β1的表达量显著下降,而与对照组和转染si-TGF-β1组比较,转染miR-21-5p antagomir后TGF-β1的表达量显著提升(P<0.05,P<0.01)。相对于TGF-β1-mut,TGF-β1-wt能使荧光素酶的活性显著下降(P<0.05)。与对照组比较,脓毒症组小鼠血清IL-6、TNF-α、MDA、降钙素和超敏C反应蛋白的水平都显著提升,SOD活性显著下降(P<0.05,P<0.01);与脓毒症组比较,miR-21-5p antagomir组上述指标更加恶化,而si-TGF-β1组则显著改善(P<0.05)。结论miR-21-5p通过靶向抑制TGF-β1的表达来减轻LPS诱导的脓毒症引起的炎症、氧化应激反应,进而改善脓毒症。

组蛋白去乙酰化酶8抑制剂与硝苯地平联用对左旋硝基精氨酸诱导的高血压大鼠降压效果

目的探讨硝苯地平与组蛋白去乙酰化酶8抑制剂PCI-34051联合用药对左旋硝基精氨酸诱导的高血压大鼠模型的降压效果,并探讨其降压机制。方法选用7周龄,SPF级,重量165~210g,雄性Wistar大鼠50只,采用腹腔注射左旋硝基精氨酸方法复制高血压大鼠模型,设立正常组、模型组、硝苯地平组(0.5 mg/Kg)、PCI-34051组(0.7 mg/Kg)、硝苯地平与PCI-34051联合用药组(0.5 mg/Kg+0.7 mg/Kg),每组10只。采用无创性套尾法测定大鼠清醒状态下尾动脉血压及心率,酶联免疫吸附法测定大鼠血清内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)、肾素(Renin)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮(ALD)的含量;H&E染色评估主要器官的毒性情况。结果与模型组比较,单次给药24 h和连续给予4周后,硝苯地平组、PCI-34051和联合用药组均降低收缩压和舒张压,并降低血清ET-1、Ang Ⅱ和ALD水平,提高NO水平(均P<0.05),其中联合用药的降压效果显著强于单用硝苯地平组或PCI-34051组(P<0.05)。此外,与正常组比较,硝苯地平组加快了实验大鼠的心率(P<0.05),而PCI-34051组和联合用药组则对心率无显著性影响(P>0.05);硝苯地平组对肾素没有影响(P>0.05),而PCI-34051组和联合用药组能够降低血清肾素(P<0.05)。结论硝苯地平与组蛋白去乙酰化酶8抑制剂PCI-34051联合用药对左旋硝基精氨酸诱导的高血压大鼠有明显的协同降压作用,其机制与降低血清ET-1,升高NO水平以改善血管内皮功能障碍,降低血清肾素、AngⅡ和ALD水平以抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统活性有关。

血常规指标与脓毒症患者短期预后的相关性研究

目的 探讨外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)及二者联合预测脓毒症患者短期预后的效能。方法 回顾性分析2019年5月1日—2021年4月30日收治的脓毒症80例。根据28 d生存情况分为存活组(62例)和死亡组(18例)。比较2组一般资料及实验室指标,采用多因素Logistic回归分析探讨影响脓毒症患者短期预后的因素;采用Pearson相关性分析探讨各指标间的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评估预测患者短期预后的效能。结果 死亡组淋巴细胞计数低于存活组,NLR、PLR及红细胞分布宽度与淋巴细胞比值高于存活组(P<0.05,P<0.01)。多因素Logistic回归分析显示NLR、PLR是影响脓毒症患者短期预后的独立危险因素(P<0.05,P<0.01)。Pearson相关性分析显示,NLR与PLR呈正相关(r=0.376,P<0.01)。ROC曲线分析显示,NLR预测脓毒症患者短期预后的曲线下面积(AUC)为0.743,PLR预测的AUC为0.718,NLR、PLR联合预测的AUC为0.776,联合预测效能较高。结论 NLR、PLR是影响脓毒症患者预后的潜在危险因素,二者联合预测效能更高,可作为基层医务工作者快速判断脓毒症患者预后的指标。