烧伤脓毒症大鼠血清培养巨噬细胞中Nrf2的表达

目的研究内毒素和烧伤脓毒症大鼠血清培养的巨噬细胞中Nrf2的表达。方法在动物模型中,将大鼠分为正常对照组、LPS组、单纯烧伤组、烧伤合并铜绿假单胞菌脓毒症组、烧伤合并金黄色葡萄球菌脓毒症组。先将后4组制备成40%面积的Ⅲ度烧伤创面,分别将金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌及LPS注入大鼠腹腔内,在验证脓毒症动物模型后,感染8 h心脏穿刺收集血液制备血清备用。然后取RAW 264.7细胞为靶细胞,以不同组血清干扰8 h后,分别运用RT-PCR和Western blotting技术检测Nrf2在靶细胞中的表达情况。结果所有组Nrf2明显高于正常对照组。RT-PCR示Nrf2 mRNA表达水平在单纯烧伤组中最高(P<0.01),其次分别是内毒素组(P<0.01)、假单胞菌组(P<0.01)和葡萄球菌组(P<0.01)。Western印记示Nrf2蛋白表达在内毒素组中最高(P<0.01),其后分别是单纯烧伤组(P<0.01)、绿脓杆菌和葡萄球菌组(P<0.05)。结论当受到细菌或内毒素及内源性抗氧化系统对抗氧化应激损害干扰后,内源性抗氧化系统出现于巨噬细胞RAW264.7中,并可能作为治疗目标应用于严重烧伤合并MODS、脓毒症休克等患者中。

热休克蛋白70抑制大鼠脓毒症血清诱导的心肌细胞凋亡及其信号转导通路的研究

目的初步探讨热休克蛋白70（heat shock protein 70，HSP70）抑制脓毒症血清所致心肌细胞凋亡及其机制。方法将原代培养心肌细胞分组：正常对照组、正常大鼠血清组、脓毒症血清组、转空载体对照组和转HSP70基因组，转HSP70基因组以重组质粒pcDNA3．1-HSP70转染后36h后验证基因和蛋白表达；各组以相应血清混合培养2h；分别行Hoechst33258染色后计数以及DNA“梯状”条带检测心肌细胞凋亡，再应用Western—blot分析HSP70过表达对Caspase-3，8，9活化和Bid裂解的影响情况。结果处理后12、24、36h凋亡率，转HSP70基因组心肌细胞为（12．48±2．39）％、（23．96±3．12）％、（25．40±3．96）％，明显低于脓毒症血清组[（28．66±2．24）％、（55．76±5．69）％、（46．89±8．74）％，t=5．851、5．932、6．027，P〈0．01]，亦明显低于转空载体组[（34．25±3．42）％、（50．71±6．38）％、（47．62±5．74）％，t=5．876、5．903、6．122，P〈0．01]，但明显高于正常对照组和正常血清组（3．13％-6．75％，t=6．324、6．578、6．137、5．987、6．032、6．871，P〈0．01）；在Caspase-3、8、9活化表达中，P11、P20和P10条带比值，转HSP70基因组分别为（12．5276±2．1247、9．3481±4．5423、16．1349±6．0641），低于脓毒症血清组（27．13244-2．1564、25．5643±4．3018、36．5647±6．7135，t=5．856、5．902、5．891，P〈0．01），低于转空载体组（28．0314±2．0367、25．6413±4．1356、34．5648±5．9473，t=3．861、3．933、4．281，P〈0．05），高于正常对照组（8．0324±1．5234、5．1246±1．3274、2．0314±0．6423，￡=3．286、3．867、4．031，P〈0．05）和正常血清组（8．5649±1．2136、6．0324±1．0214、3．2146±0．1325，t=5．898、5．969、6．879，P〈0．01）；tBid条带比值，转HSPT0基因组（12．0316±2．3641）低于脓毒症血清组（27．0536±5．3214，t=3．274，P〈0．05）和转空载体组（27．1034±3．6741，t=3．301，P〈0．05），但高于正常对照组（6．0347±2．1304，t=5．924，P〈0．01）和正常血清组（7．3121±1．3021，t=5．871，P〈0．01）。结论HSPT0通过干预死亡受体通路和线粒体通路而抑制脓毒症血清所致的细胞凋亡。