MF59佐剂增强热灭活卡介苗的免疫原性

目的 研究MF59佐剂[一种由角鲨烯、山梨糖醇三油酸酯（Span85）、吐温80和柠檬酸缓冲液组成的水包油乳剂]对热灭活BCG（hBCG）免疫小鼠诱导免疫应答的影响,验证自制MF59增强hBCG诱导细胞免疫反应的作用.方法 BALB/c （SPF级）小鼠分成A～G组,每组8只,于第0、2、4周皮下注射0.2 ml MF59、低剂量hBCG（0.025 mg/ml）、中剂量hBCG（0.25 mg/ml）、高剂量hBCG（2.5 mg/ml）、MF59＋低剂量hBCG、MF59＋中剂量hBCG、MF59＋高剂量hBCG.末次免疫2周,解剖小鼠.取小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞,并在体外经BCG PPD刺激培养,ELISA检测培养上清γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-1β、Ib-2、IL-4、IL-12含量,酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测脾细胞分泌IFN-γ、IL-2和IL-4的斑点形成细胞数（SFCs）.所有试验组的平均值比较采用一元方差分析、每两组平均值比较采用最小显著差异法,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 MF59作为高剂量hBCG的佐剂（G组）免疫小鼠,其脾细胞体外经BCG PPD刺激培养,分泌IFN γ的SFCs[（151.3±66.6）个]、IL-2的SFCs[（247.8±58.0）个]和IL-4的SFCs[（65.8±24.6）个]显著高于其他组[其他组IFN-γ、IL-2和IL-4的SFCs的最高平均值分别为（30.4±13.0）个、（37.1±10.8）个和（16.4±9.7个）]（分泌IFN-γ的SFCs比较,t=3.2,P=0.007;分泌IL-2的SFCs比较,t=3.6,P=0.003;分泌IL-4的SFCs比较,t=3.0,P=0.01）.MF59与不同剂量hBCG联合免疫小鼠,其腹腔巨噬细胞体外经BCG PPD刺激培养,培养上清IL-1β水平分别为（663.3±177.5） pg/ml、（813.8±193.4）pg/ml和（742.3±316.1）pg/ml,均显著高于A、B和C组[分别为（104.7±65.8）pg/ml、（82.9±54.8） pg/ml和（66.5±53.5） pg/ml]（E、F和G与A组比较：t=2.9,P=0.01;t=3.5,P=0.004;t=2.5,P=0.031.E、F和G与B组比较：t=3.1,P=0.007;t=3.6,P=0.003;t=2.6,P=0.024.E、F和G与C组比较：t=3.0,P=0.01;t=3.5,P=0.004;t=2.5,P=0.031）.A、C和G组小鼠的腹腔巨噬细胞体外经BCG-PPD刺激培养,培养上清IL-12水平[分别为（36.3±20.5）pg/ml、（94.5±20.6）pg/ml和（128.2±54.6） pg/ml]均显著低于E和F组[（545.7±97.2） pg/ml和（665.5±295.4） pg/ml]（A、C和G组与E组比较：t=-5.1,P=0.000;t=-4.5,P=0.000;t=-3.7,P=0.002.A、C和G组与F组比较：t=-4.4,P=0.001;t=-3.7,P=0.002;t=-2.9,P=0.012）.结论 MF59与高剂量hBCG联合免疫小鼠,可以增强脾细胞体外分泌BCG-PPD特异的IFN-γ、IL-2和IL-4;MF59与低、中剂量hBCG联合免疫小鼠,可以增强腹腔巨噬细胞体外分泌BCG-PPD特异的IL-1β和IL-12.