结核病实验室检查技术的研究进展

近年来,分子生物学基因诊断技术及其他新技术引入临床实验室,使结核病病原学诊断等进入了一个崭新的阶段。目前,我国在这方面的研究工作方兴未艾。本文就结核病实验室检查的几项新技术作一介绍。聚合酶链式反应脱氧核糖核酸(DNA)聚合酶链式反应(PCR)又称DNA体外扩增技术。

应用PCR-寡核苷酸探针快速检测结核分支杆菌耐药基因突变

目的:结核分支杆菌耐药是结核病治疗中的棘手问题,由于传统的药敏试验方法烦琐而费时,因此,本研究通过快速检测结核分支杆菌耐药基因突变,以期建立一种敏感、特异、简便、快速的分子药敏试验方法,指导临床化疗.……

应用聚合酶链反应-寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变

目的 应用聚合酶链反应 (PCR) 寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变,建立一种新的分子药敏试验方法。方法 以传统药敏试验、PCR 单链构象多态性和PCR 直接测序方法为对照,对利福平、链霉素(SM)和乙胺丁醇耐药的结核菌基因rpoB、rpsL、rrs和embB的寡核苷酸探针,通过反向斑点杂交检测 78株结核菌临床分离株PCR产物。结果 18株结核菌药物敏感株的 4种耐药基因均为野生型。60株结核菌耐药分离株中, 59株为耐RFP株,rpoB基因突变率为 93. 2%,最常见的突变位点为 531位和 526位密码子, 33株为耐SM株,rpsL基因突变率为 75. 8%,均为 43位密码子AAG→AGG突变,rrs基因突变率为 9 .1%,均为 513位A→C突变,rpsL和rrs基因总突变率为 84 .8%; 43株为耐EMB株,embB基因突变率为 58 .1%,均为 306位密码子突变。结论 应用PCR 寡核苷酸探针反向斑点杂交技术可简便、快速、准确地分析大多数结核菌耐药基因突变,检测其耐药性。

聚合酶链反应-反向斑点杂交鉴定分枝杆菌菌种

目的 建立一种简便、快速、敏感和特异的分枝杆菌菌种鉴定方法。方法 以 16SrDNA为靶序列 ,采用聚合酶链反应 (PCR) 反向斑点杂交检测 2 5种分枝杆菌、11种非分枝杆菌标准株、10株分枝杆菌临床分离株和 2 6份临床痰标本。结果 分枝杆菌、非分枝杆菌标准株经DNA扩增 ,分枝杆菌均出现 5 78bpDNA片段 ,非分枝杆菌除假白喉棒状杆菌可见同样片段外 ,其余菌种均未见扩增。敏感性试验可检测出 10 0fg结核分枝杆菌DNA。探针特异性试验表明 ,17种寡核苷酸探针除pTub1、pFor1、pSme探针可见交叉杂交外 ,其余探针均是特异的。 10株结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌临床分离株PCR 反向斑点杂交结果与常规鉴定结果相符。 2 6份涂片阳性痰标本经该法直接鉴定为结核菌复合体。结论 16SrDNAPCR 反向斑点杂交鉴定分枝杆菌菌种快速、有效 ,具有较高的应用价值。