重组人γ-干扰素在耐多药结核病小鼠治疗作用中的研究

目的探讨重组人γ干扰素（rh-IFN-γ）在MDRTB小鼠中的治疗作用及其免疫学机制。方法72只成年雄性Balb／c小鼠，用含耐多药Mtb的气溶胶感染，感染后第2天处死4只以确定小鼠肺脏植入的菌量，感染后21d（设定治疗0周）脱颈处死4只小鼠作空白对照；余下64只小鼠采用随机数字表法分为对照组、rh-IFN-γ组、莫西沙星组和联合治疗组（莫西沙星＋rh-IFN-γ每组16只，于治疗0周开始给药。治疗4、8、16、20周各组分别脱颈处死4只，以测定小鼠的肺、脾质量指数和肺、脾菌落形成单位（CFU）、8周血清细胞因子IFN-γ和白细胞介素（IL）-10的水平。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组内两两比较采用SNK法和Games-Howell法。结果肺脾质量指数：莫西沙星组8周肺指数为“5．99±0．72”、低于对照组的“8．01±0．91”（F=6．28，P〈0．01）；莫西沙星组8周脾指数为“2．87±0．15”，低于对照组的“3．87±0．41”（F=8．37，P〈0．01）。肺、脾CFU：莫西沙星组、联合治疗组4周肺组织CFU分别为（4．37±0．20）lgcFu／ml和（4．35±0．18）lgCFU／ml，均低于对照组[（5．30±0．21）lgCFU／ml]和rh-IFN-7组[（5．29±0．13）lgCFU／m1]（F=35．55，P〈0．01），莫西沙星组、联合治疗组8周肺组织CFU分别为（2．86±0．29）lgCFU／ml和（2．63±0．08）lgCFu／ml，均低于对照组[（5．00±0．23）lgCFU／m1]和rh_IFN-γ组[（4．82±0．55）lgCFU／ml]（F=56．83，P〈0．01），且均于16周始无菌化（即无Mtb生长）；rh-IFN-γ组20周脾组织CFU为（3．21±0．40）lgCFU，低于对照组的（4．31±0．06）lgCFU／ml（t=5．45，P〈0．01）；莫西沙星组和联合治疗组的脾组织从4周始无菌化。治疗8周小鼠血清r干扰素和IL-10的水平：rh-IFN-γ组、莫西沙星组和联合治疗组血清IFN-γ水平分别为（3．40±0．64）ng／L、（1．32±0．53）ng／L和（0．47±0．44）ng／L，低于对照组的（10．34±2．09）ng／L（F=55．973，P〈0．01），莫西沙星组和联合治疗组血清IFN_7水平分别为（1．32±0．53）ng／L和（0．47±0．44）ng／L，低于rh-IFN-γ组的（3．40±0．64）ng／L（F=55．973，P〈0．01）。对照组、rh-IFN-γ组、莫西沙星组和联合治疗组血清IL-10水平分别为（6．68±1．30）ng／L、（9．76±3．97）ng／L、（8．74±4．48）ng／L和（21．34±17．58）ng／L，差异无统计学意义（F=2．013，P〉0．05）。结论rh-IFN-γ可降低MDR-TB小鼠脾组织的菌量负荷，下调小鼠血清γ-干扰素水平，但对降低肺组织的菌量负荷和减轻肺脾组织炎症上无明显作用。rh-IFN-7辅助莫西沙星治疗耐多药结核病小鼠，在降低病变器官的菌量负荷和减轻炎症方面无辅助作用。

我国结核病基础研究的回顾与展望

结核病基础科研围绕着人体与结核分枝杆菌斗争的方方面面全方位地展开,从结核分枝杆菌的基因组DNA到转录组RNA,从其表达的蛋白质到其代谢的产物,再到结核分枝杆菌对人体的致病作用及人体对其产生的免疫应答,希望寻找出干预的措施、控制的手段.研究内容非常丰富,篇幅所限,难以面面俱到,笔者只是根据中文文献试图阐述我国在细菌学、免疫学、分子生物学、疫苗、新药方面的主要研究和取得的重要进展,也试图指出研究的前景和存在的问题.

合理应用药物敏感性试验提高耐多药结核病诊断率

耐多药结核病（MDR-TB）是目前临床结核病治疗的难题之一,快速检出耐多药的结核分枝杆菌（MTB）,指导临床选择有效抗结核药物,制定合理的化疗方案,是控制MDR-TB的关键.目前抗结核药物的药物敏感性试验（简称“药敏试验”）方法主要有下列三类：一是建立在细菌生长基础上的药敏试验方法;二是建立在基因多态性分析基础上的分子药敏试验方法;三是建立在耐药MTB特异组分基础上的色谱、质谱方法.作者概要地介绍了MTB的药敏试验方法,以及联合应用现有药敏检测技术以提高临床对MDR-TB的诊断率.

对异烟肼与丙硫异烟胺耐药的结核分枝杆菌临床分离株检测及相关基因突变的研究

【摘要】目的研究MTB对异烟肼（INH）和丙硫异烟胺（Pto）的耐药情况，及从临床标本中的MTB临床分离株直接检测katG和inhA基因型的价值。方法回顾性调查解放军第三。九医院全军结核病研究所2014年8月至2015年8月住院确诊，并经抗结核药物治疗有效的结核病患者，共104例。患者临床标本经培养鉴定为MTB，然后通过绝对浓度法同时进行INH和Pto药物敏感性试验（简称“药敏试验”），并用基因芯片检测MTBkatG和inhA基因型。结果104例患者的MTB临床分离株经绝对浓度法药敏试验检测显示：20例（19．2％）对INH耐药，其中3例高度耐药、17例低度耐药；5例（4．8％）对Pro耐药，其中1例高度耐药、4例低度耐药；INH与Pto的交叉耐药率20．0％（4／20）。以传统药敏试验为对照，20例对INH耐药患者中，基因芯片检测10例（50．0％）发生katG基因315位点突变，3例（15．0%）发生inhA基因一15位点突变，1例（5．0％）发生双基因突变；84例INH敏感患者中，7例（8．3%）发生katG基因315位点突变，5例（6．0％）发生inhA基因-15位点突变。基因芯片检测katG基因315位点突变预示MTB对INH耐药的敏感度为55．0％（11／20），特异度为91．7％（77／84）；inhA基因-15位点突变预示MTB对INH和Pto耐药的敏感度分别为20．0%（4／20）和60．0％（3／5），特异度分别为94．0Y00（79／84）和93．9％（93／99）。结论大多数结核病患者的MTB临床分离株对INH和Pto耐药水平低，对Pto的耐药率低，katG315和inhA-15基因突变与MTB对INH耐药密切相关，intui-15基因突变与MTB对Pro耐药密切相关，应用基因芯片可快速检测临床标本中MTB的INH和Pto耐药基因型。

结核分枝杆菌早期分泌抗原对人单核细胞活化T细胞核因子5表达的影响

目的 研究MTB早期分泌靶抗原6/培养滤液蛋白10（ESAT-6/CFP-10）抗原对人单核细胞的活化T细胞核因子5（NFAT5）表达的影响.方法 收集解放军第三○九医院收治的活动性肺结核患者15例,男9例,女6例,年龄33 ～42岁,平均37岁.健康人来自解放军第三○九医院健康体检中心,共15名,男9名,女6名,年龄37 ～ 42岁,平均40岁.抽取患者和健康体检者的外周血,分离单核细胞,分别用H37Rv全菌裂解液和ESAT-6/CFP-10抗原多肽刺激,提取细胞总RNA,荧光定量PCR方法检测NFAT5 mRNA的表达,采用配对t检验分析刺激前后单核细胞NFAT5mRNA的表达差异.结果 活动性结核患者刺激前单核细胞NFAT5 mRNA的相对表达量为（0.23±0.15）,EAST-6/CFP-10抗原多肽刺激后为（0.18±0.12）,表达显著下调（t=2.591,P＜0.05）,而全菌裂解液刺激后表达量（0.28±0.25）没有显著变化（t=1.142,P＞0.05）.健康人刺激前单核细胞NFAT5 mRNA的相对表达量为（0.21 ±0.09）,EAST-6/CFP-10抗原多肽刺激后为（0.17±0.09）,表达显著下调（t=2.828,P＜0.05）,而全菌裂解液刺激后表达量（0.20±0.12）没有显著变化（t=0.452,P＞0.05）.结论 MTB分泌的ESAT-6/CFP-10抗原多肽能够抑制人单核细胞中NFAT5的表达.