乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP13的克隆

目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)X 蛋白反式激活新型靶基因。方法以 HBV X 蛋白表达质粒 pcDNA3 1(-)-X转染 HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取总 RNA 进行逆转录,对产物行基因表达谱芯片分析,确定新基因编码序列后,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增新基因序列。结果获得新基因的全长序列,并测序证实,命名为 X 蛋白反式激活蛋白13(XTP13)。结论成功克隆 XTP13,为进一步阐明 HBxAg 在 HBV 感染中的分子生物学机制奠定基础。

丙型肝炎病毒非结构蛋白4A与钙离子信号调节亲环素配体的相互作用

目的应用酵母双杂交技术及免疫共沉淀技术证实HCV非结构蛋白4A(HCV NS4A)与钙离子信号调节亲环素配体(CAML)的相互作用。方法对CAML编码基因进行克隆,并构建其酵母表达载体.在酵母细胞中与HCV NS4A进行回交验证后,构建HCV NS4A及CAML真核表达载体,转染293细胞,行免疫共沉淀实验及Western印迹检测。结果成功克隆CAML基因,并构建CAML的酵母表达载体,在酵母细胞中回交验证HCV NS4A与CAML的相互作用,构建HCV NS4A及CAML的真核细胞表达载体,并利用免疫共沉淀技术验证了两者的相互作用。结论CAML与HCV NS4A的相互作用可能对HCV感染细胞的钙离子浓度、细胞凋亡等生物过程产生影响,从而在HCV感染慢性化过程中发挥作用。