结核病的细胞免疫治疗进展

结核病是一直受到广泛关注的世界性健康问题，耐药结核病的不断增长是有效控制结核病的主要威胁，结核病的防控形势非常严峻。因此，以细胞治疗为代表的生物治疗得到广泛应用，细胞免疫治疗将有机会成为复治、难治结核病个体化综合治疗的重要组成部分及研究热点。作者就结核病的细胞免疫治疗研究进展结合参考文献进行重点阐述。

CD244与活动性肺结核患者CD56^(bright)NK细胞表型及功能的关系研究

目的:探索CD244与活动性肺结核患者CD56^(bright)NK细胞表型及功能的关系。方法:用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMCs),用流式细胞术检测活动性肺结核患者与正常对照者CD56^(bright)NK细胞表面CD244、CD94、NKG2D表达差异,进一步检测活动性肺结核患者CD56^(bright)NK细胞CD244与Tim3、CD27、CD62L、CCR7、CD107a、IFN-γ表达的关系。结果:不经过结核菌抗原刺激的外周血中的CD56^(bright)NK细胞表面CD244表达在活动性肺结核患者和正常对照中并没有显著性差异;经过结核菌抗原刺激的活动性肺结核患者CD56^(bright)NK细胞表面CD244表达显著高于正常对照者;CD56^(bright)NK细胞表面CD94和NKG2D表达,在活动性肺结核患者与健康对照者之间无显著性差异;活动性肺结核患者CD244+CD56^(bright)NK细胞表面Tim3^+细胞显著性升高,而细胞表面CD62L显著性降低,细胞内IFN-γ显著性降低;然而CD244^+CD56^(bright)NK细胞和CD244^-CD56^(bright)NK细胞之间CD107a表达无显著性差异。结论:在活动性肺结核患者PBMCs中CD56^(bright)NK细胞表面高表达CD244,可能与抑制受体Tim3协同抑制IFN-γ的表达,但是与NK细胞的脱颗粒作用无关。

两种γ干扰素释放试验及PPD试验结果在结核感染诊断中的比较

目的研究2种γ干扰素（IFN7）释放试验（interferon-γ releaseassays，IGRA）和PPD试验在结核感染诊断中的相关性及应用价值。方法对2010年178名驻京部队河南籍入伍新兵进行PPD试验，用结核分枝杆菌特异性重组培养滤液蛋白10（culturefiltrateprotein10，CFP10）-早期分泌性靶抗原6（earlysecretoryantigenictarget6，ESAT6）融合蛋白（重组CFPl0-ESAT6融合蛋白）-酶联免疫斑点试验（enzymelinked-immunospotassay，EUSPOT）检测新兵外周血释放IFN-γ的效应T淋巴细胞，并用结核分枝杆菌CFP10-ESAT6重组蛋白-化学发光酶免疫法（chemiluminescenceenzymeimmunoassay，CLEIA）检测其全血中IFN-γ水平。结果178名入伍新兵中，PPD试验、ELISPOT和CLEIA的阳性率分别为39．89％（71／178）、31．46％（56／178）和21．35％（38／178）。前者阳性率显著高于后二者（χ^2=14．3663，P〈0．01），ELISPOT法阳性率也显著高于CLEIA法（χ^2=4．6834，P〈0．05）。在107名PPD试验阴性者中，ELISPOT、CLEIA法检测阳性者分别为33例（30．84％）、14例（13．08％），前者阳性率显著高于后者（χ^2=9．8425，P〈0．01）。在71例PPD阳性者中，ELISPOT、CLEIA法检测阳性者分别为23例（32．39％）、24例（33．80％），两者差异无统计学意义（χ^2=0．0318，P〉0．05）。ELISPOT法和PPD试验的一致率为54．49％（97／178，U=0．218，P〉0．05）；CLEIA法和PPD试验的一致率为65．73％（117／178，U=3．227，P〈0．01），ELISPOT和CLEIA法的一致率为66．29％（118／178，U=1．885，P〉0．05）；PPD试验、ELISPOT和CLEIA检测方法的一致率为42．70％（76／178）。ELISPOT法检测的斑点数与PPD试验反应的硬结平均直径之间缺乏相关性（r=0．13851，P〉0．05）；CLEIA法检测的IFN-γ水平与PPD试验反应的硬结平均直径之间有低的相关性（r=0．25244，P〈0．01）；ELISPOT检测的斑点数与CLEIA检测的IFN-γ水平之间也有低的相关性（r=0．2755，P〈0．01）。在卡介苗接种者中，PPD试验检测的阳性率为50．00％（48／96），ELISPOT为22．92％（22／96），CLEIA为23．96％（23／96）；在无卡介苗接种者中，PPD试验检测的阳性率为28．05％（23／82），ELISPOT为47．56％（39／82），CLEIA为17．07％（14／82）。结论两种IGRA方法与PPD试验之间的一致性差、相关性低，用IGRA方法能够有效地筛查结核感染，而ELISPOT检测的阳性率高于CLEIA。

活动性肺结核患者CD4-＋T细胞中T-bet表达与IFN-γ和TNF-α表达负相关

目的检测在活动性肺结核患者CD4^+T细胞中转录因子T细胞表达的T盒(T-bet)与γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素2(IL-2)表达的关系。方法用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)筛选结核分枝杆菌(MTB)潜伏感染者,用流式细胞术检测CD4^+T细胞中T-bet与IFN-γ、TNF-α、IL-2表达的关系。结果潜伏感染者PBMC用MTBH 37Rv裂解液刺激后IFN-γ表达显著性升高;在活动性肺结核患者用MTB H37Rv裂解液刺激,在CD4^+IFN-γ+细胞中的T-bet显著性高于潜伏感染者;在MTB抗原特异性的CD4^+T细胞中T-bet-细胞IFN-γ和TNF-α的表达显著性高于T-bet+细胞;而在MTB抗原特异性的CD4^+T细胞中T-bet-细胞与T-bet+细胞的IL-2的表达无显著差异。结论在活动性肺结核患者外周血抗原特异性CD4^+T细胞中T-bet与IFN-γ、TNF-α表达负相关。

卡介苗接种对酶联免疫斑点试验检测结核分枝杆菌感染的影响

目的研究卡介苗（BCG）接种对采用重组培养滤液蛋白10（CFPl0）-早期分泌靶抗原6（ESAT6）融合蛋白（重组CFP10-ESAT6融合蛋白）进行酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测结核分枝杆菌感染的影响，评价ELISPOT诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值。方法以结核菌素纯蛋白衍生物（PPD）皮肤试验为对照，应用重组CFPl0-ESAT6融合蛋白进行ELISPOT检测105名2013年驻京部队入伍新兵外周血中分泌结核分枝杆菌CFP10-ESAT6抗原特异性γ干扰素（IFN-7）的效应T淋巴细胞斑点数。对PPD和ELISPOT均为阴性的入伍新兵接种卡介苗，3个月后再做PPD试验和ELISPOT。应用SPSS18．0统计软件进行统计学分析处理，率的比较采用卡方检验，均数比较采用t检验，P〈0．05为差异有统计学意义。结果105名入伍新兵中，PPD试验和ELISPOT阳性率分别为59．0％（62／105）和14．3％（15／105）。43名PPD试验阴性和62例PPD试验阳性者中，分别有6例（14．0％）和9例（14．5％）ELISPOT阳性，两种方法的检测结果差异具有统计学意义（χ^2=35．86，P=0．00），两种方法的一致率为43．8％（46／105）。35名PPD试验和ELISPOT检测均为阴性的入伍新兵卡介苗接种3个月后，PPD试验阳转率为37．1％（13／35），而ELISPOT检测均为阴性，接种前斑点数[（2．6±3．1）个]与接种后斑点数[（2．6±5．0）个]比较，差异无统计学意义（t=0．52，P=0．61）。结论ELISPOT检测结核分枝杆菌感染不受卡介苗接种的影响，能更真实地反映驻京部队入伍新兵的结核潜伏感染情况。

中医药治疗小儿肺结核

通过查阅大量文献,研究中医药治疗小儿肺结核最新进展。对近10年内的国内外的中医药在治疗小儿肺结核相关文献进行阅读和整理,比较不同中医药在治疗小儿肺结核的差异,找到适合小儿肺结核治疗的方剂。目前各地医家,以小儿肺结核中医理论为基础,结合自身长期临床经验,创立各具特色方剂,使中医药治疗小儿肺结核病取得一定进展,但仍存在很多不足。中医药可以抑菌、杀菌及增强免疫功能,促进病灶组织的修复,改善相关临床症状,提高临床疗效,与西药连用可降低或消除抗痨药物的毒副作用。

活动性肺结核患者PBMCs中INHBA基因的表达

目的研究活动性肺结核患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中抑制素βA亚基(inhibin, beta A, INHBA)基因的表达特点。方法使用密度梯度离心法分离PBMCs,然后用TRIzol提取细胞RNA,逆转成cDNA后,进行荧光定量PCR分析INHBA的表达。结果结核分枝杆菌H37Rv菌体裂解液和结核分枝杆菌特异性抗原ESAT-6和CFP-10的多肽,显著性提高PBMCs中INHBA基因的表达,配对t检验p值分别为0.019和0.0013;在无抗原刺激的情况下,活动性肺结核与正常对照之间无显著差别(P=0.52);当使用结核分枝杆菌H37Rv菌体裂解液和结核分枝杆菌特异性抗原ESAT-6和CFP-10的多肽刺激PBMCs,INHBA在活动性肺结核患者组的表达显著性的高于正常对照组,t检验P值分别为0.016和0.010。结论 INHBA在结核抗原刺激后在PBMCs表达显著性升高,且在活动性肺结核患者组显著高于正常对照组,可能作为活动性肺结核的诊断标志物。

活动性结核患者单核来源巨噬细胞中C-X-C型趋化因子受体4的表达研究

目 的 研 究 活 动 性 结 核 患 者 单 核 来 源 巨 噬 细 胞 （ monocyte-derived macrophage ,MDM ） C-X-C 型趋化因子受体 4 （ C-X-Cchemokinereceptor4 , CXCR4 ）的表达水平。方法 收集活动性肺结核患者和健康者抗凝血,分离纯化单核细胞并体外培养使其分化为初始型 （ M0 ）巨噬细胞,然后分别用细菌脂多糖 （lipopolysaccharides , LPS ）/干扰素 -γ （ interferonγ , IFN-γ ）和 IL-4 刺激,使其向促炎症型 （ M1 ）型巨噬细胞和抗炎症型 （ M2 ）巨噬细胞极化,收集细胞并提取总 RNA ,荧光定量聚合酶链反应 （ PCR ）检测 CXCR4mRNA 的表达。 T 检验分析两组数据的差异。结果 活动性结核患者和健康者 M1 型 MDM 中 CXCR4 的表达量分别为 0.026±0.009 和 0.034±0.014 ,与健康者相比,活动性结核患者 M1 型 MDM 中 CXCR4 的表达显著降低 （ t =2.064 , P ＜0.05 ）。活动性结核患者和健康者 M2 型 MDM 中 CXCR4 的相对表达量分别为 0.048±0.013 和 0.064±0.019 ,与健康者相比,活动性结核患者 M2 型 MDM 中 CXCR4 的表达显著降低 （ t =2.823 , P ＜0.01 ）。结论 活动性结核患者极化的 MDM 细胞中 CXCR4 的表达降低,提示巨噬细胞 CXCR4 参与结核病的免疫反应。

活动性肺结核患者单核来源巨噬细胞极化能力的研究

目的：研究活动性肺结核患者单核来源巨噬细胞（monocyte-derived macrophages, MDM）向 M1型和 M2型巨噬细胞极化的能力。方法采集活动性肺结核患者和健康人外周血,分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）,采用磁珠分选技术纯化 CD14＋单核细胞,体外分化为 M0型巨噬细胞,然后分别用细菌脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）/干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）和 IL-4刺激巨噬细胞向 M1和 M2型巨噬细胞极化,最后流式细胞术检测 M1型 MDM 表面 CD80、CD86和 HLA-DR 的表达,M2型 MDM 表面 CD163和 CD206的表达。结果与健康人相比,活动性肺结核患者 M1型 MDM 表面 CD80和 CD86的表达显著降低（t =2.359,P 〈0.05；t =2.816,P 〈0.01）,而 M2型 MDM 表面 CD163和 CD206的表达显著升高（t =2.368,P 〈0.05；t =2.994,P 〈0.01）。结论活动性肺结核患者 MDM 向 M1型巨噬细胞极化能力减弱,而向M2型巨噬细胞极化能力增强。

结核分枝杆菌耐药检测及其临床意义

耐药结核病(TB)尤其是耐多药结核病(MDR-TB)、广泛耐药结核病(XDR-TB)的快速诊断和有效治疗是TB防控中亟需解决的难题。结核分枝杆菌(Mtb)耐药的主要机制是由于药物作用靶标或药物代谢酶编码基因突变所致。临床上常用的Mtb药物敏感性试验方法主要包括表型药敏方法和分子药敏方法,本文还简要地概述了通过药敏试验所揭示的一些值得临床医师关注的临床意义。