竞争化学发光酶免疫分析检测血清透明质酸方法的建立

目的建立人血清透明质酸(HA)化学发光酶免疫定量检测分析方法。方法以偶联了牛血清白蛋白的透明质酸包被,以辣根过氧化物酶标记透明质酸结合蛋白(HABP),以过氧化氢(H2O2)-鲁米诺(luminol)化学发光体系作为检测体系,采用竞争法的反应模式,优化筛选温育条件、抗体包被条件、酶标记物稀释度和发光反应时间等条件。同时进行回收实验、热稳定性等实验,并随机选取60例肝纤维化患者血清与进口试剂进行比对实验。结果所建立方法的检出限为6.12μg/L,批内和批间变异均小于10%。检测HA的临床高、中、低值血清回收率为分别为93.5%、95.6%和101.2%;在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7 d的稳定性考察,线性相关系数均>0.98,标准偏差<9%。比对实验分析证明2种方法差异无统计学意义(P=0.62>0.05)。结论成功建立定量HA微孔板化学发光酶免疫分析方法,该方法具有较高的准确性、灵敏度及良好的重复性,并与进口试剂检测结果一致。

人类非嗜肝病毒性肝炎研究进展

人类非嗜肝病毒性肝炎是由非嗜肝病毒感染引起的肝损伤,随着临床检测手段的提高日益得到重视。非嗜肝病毒性肝炎的病原种类多样,临床表现程度不同,部分患者可导致死亡。本文按照非嗜肝病毒性肝炎的病原对其临床特点进行综述。

1株快速增殖的HAV分离株基因型分析

目的确定1株快速增殖HAV临床分离株HAV302的基因型及其特点。方法提取培养病毒RNA模板,通过反转录-聚合酶链反应技术扩增该病毒编码区基因并行序列测定,随后利用序列分析软件对其进行序列分析和基因型比对。结果 HAV302株VP1/2A区基因序列与Gen Bank中收录的HAVⅠ型中的ⅠB亚型MBB株核苷酸同源性最高(99.4%)。进化树分析显示,HAV302株与MBB株亲缘最近。与MBB株相比,非结构蛋白编码区中的2B和2C区在整个病毒的编码区中变异最大。结论 HAV302株属于HAVⅠ型中的ⅠB亚型,其2B和2C区的变异可能是导致病毒快速增殖的原因之一。

病毒性肝炎遗传修饰动物模型研究进展

病毒性肝炎在全球的广泛分布和传播是一个严重的公共卫生问题,探索治疗病毒性肝炎的方法及预防用疫苗的研发都离不开合适的动物模型。本文对相关受体的发现和遗传修饰动物模型的发展、用途及优缺点进行综述,并对未来动物模型的研究发展方向进行了展望。

新型呼肠病毒M片段对核转录因子κB的活性抑制的研究

目的探讨新型呼肠病毒M片段能否抑制核转录因子-κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)的活性。方法构建3个不同中基因节段的重组真核表达质粒,并瞬时转染真核细胞,利用荧光素酶双报告系统检测其对NF-κB激活有抑制效应的基因。结果酶切鉴定3个基因重组质粒均构建成功。其中M3基因表达的蛋白对肿瘤坏死因子α介导的NF-κB激活有较明显的抑制,抑制率达55%。而M1和M2基因表达的蛋白较之于空载体均无明显的抑制效果。结论 M3基因能显著抑制肿瘤坏死因子α介导的NF-κB激活,为研究病毒的致病及免疫调控机制提供了重要理论依据。

载脂蛋白A-Ⅰ模拟肽对代谢综合征大鼠心功能的可能影响及作用机制

目的探讨载脂蛋白A-Ⅰ模拟肽(L4F)对于代谢综合征(MS)大鼠通过血红素氧合酶1(HO-1)发挥作用的可能机制。方法选取大鼠60只分为对照组(20只)与MS组(40只),分别给予普通饲料与高果糖饲料喂养6周,每组各取10只行心脏超声及血流动力学检测后处死,对照组剩余10只给予碳酸铵缓冲溶液(ABCT);MS组剩余30只大鼠随机分为ABCT组、L4F组及抑制剂组,每组10只,分别给予ABCT、L4F、L4F+抑制剂,继续喂养6周,检测心肌脂联素、HO-1、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)表达。结果 MS组血糖、收缩压、舒张压及左心室舒张末期内径显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。与抑制剂组比较,L4F组血压、血糖、左心室舒张末压明显降低;脂联素、p-AMPK、p-Akt、p-eNOS表达显著升高(P<0.05)。L4F组HO-1表达与抑制剂组相近(P>0.05)。结论L4F可能是通过作用于能量代谢通路HO-1、脂联素、p-AMPK、p-Akt、p-eNOS上调HO-1的表达,降低MS大鼠血压和血糖,改善心室顺应性。

亲和吸附纯化甲胎蛋白异质体方法的建立

目的利用小扁豆凝集素（LCA）建立基于微量离心柱的甲胎蛋白异质体L3（AFP—L3）的纯化方法。方法采用硫酸铵分级沉淀的方法由小扁豆中提取凝集素，偶联到活化的琼脂糖凝胶4B（sephrose4B）上，灌注离心柱，制备AFP—L3亲和吸附离心管。血清加入离心管后经吸附和洗脱，便可获得纯化的AFP—L3。随机选取10例AFP阳性患者血清，应用亲和吸附纯化法纯化AFP．L3后应用电化学发光法检测，并与传统的亲和免疫电泳方法相比较。结果10例患者血清经纯化后，AFP-L3检测结果有8例〉5ng／ml，亲和免疫电泳有6例呈现阳性反应。结论成功建立基于微量离心柱的亲和吸附纯化AFP—L3的方法，该方法具有较高的灵敏度，重复性好并且操作简便更利于临床实验室应用。