HCV NS4A与钙离子信号调节亲环素配体相互作用位点的确定

目的明确丙型肝炎病毒非结构蛋白4A(HCVNS4A)与钙离子信号调节亲环素配体(CAML)相互结合的具体位点。方法构建CAML不同剪接体及缺失突变体的酵母表达载体,转化入酵母Y187菌株,分别与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株进行配合,在含X-α-gal的酵母四缺培养基上培养观察。结果转化了CAML不同剪接体及CAML缺失突变体pGADT7/CAML-1-211,pGADT7/CAML-1-57的酵母Y187菌株与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株配合后在四缺培养基上均有菌落生长,并且菌落呈现蓝色。转化了CAML缺失突变体pGADT7/CAML-58-211,pGADT7/CAML-234-296的酵母Y187菌株与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株配合后在四缺培养基上未见菌落生长。结论HCVNS4A与CAML的相互结合位点位于CAML的N-末端1～57位氨基酸残基,CAML不同剪接体与HCVNS4A均可以相互结合。