人骨保护素重组腺病毒抑制去势骨质疏松大鼠骨吸收作用的研究

目的:观察携带人骨保护素基因的重组腺病毒(recombinantadenovirusvectorcarryinghumanosteoprotegeringene,Ad-hOPG)在大鼠体内表达及对去势骨质疏松大鼠的治疗作用。方法:首先将不同滴度的Ad-hOPG(1×1011～1×1013pfu/L)注入SD大鼠体内,观察其表达特点。然后选用10月龄雌性SD大鼠15只,随机分为假手术对照组、卵巢切除+生理盐水注射组、卵巢切除+Ad-hOPG治疗组,每组5只,分别在去势8周后开始给药,给药后在不同时像点测定人骨保护素(humanosteoprotegerin,hOPG)血清浓度;在给药后第48d时用双能X射线骨密度仪(dualenergyXrayabsorptiometry,DEXA)测定各组大鼠骨密度值,并取大鼠胫骨干骺端做组织切片。结果:1×107～1×109pfu的Ad-hOPG表达时限较短,1×1010pfu则表达了长达46d,选择1×1010pfu做进一步实验;假手术对照组、卵巢切除+生理盐水注射组没能检测到hOPG的血清浓度,而卵巢切除+Ad-hOPG治疗组hOPG的血清浓度第2天就达到25mg/L,6d达到高峰,46d时仍有0.0042mg/L;卵巢切除+Ad-hOPG治疗组的骨密度值明显高于卵巢切除+生理盐水注射组(P<0.01),甚至比假手术对照组还高;卵巢切除+Ad-hOPG治疗组大鼠骨形态学也较假手术对照组明显改善。结论:Ad-hOPG在大鼠体内成功的较长时间表达。

人护骨素转基因抑制破骨细胞功能的研究(英文)

背景:转基因治疗骨科系统疾病一直是骨科治疗的难点,构建携带有效基因的病毒是目前治疗因破骨细胞功能异常亢进的骨骼系统疾病的研究方向。目的:构建携带人护骨素(humanosteoprotegerin,hOPG)基因的重组腺病毒及其在大鼠体内共同表达。设计:单一样本研究。单位:解放军第三军医大学大坪医院全军战创中心骨创科。材料:实验在解放军第三军医大学烧伤研究所移植免疫实验室完成。材料:质粒PUC19-hOPG;穿梭质粒pAdTrack-CMV及腺病毒基因组;pAdeasy-1,293细胞株;限制性内切酶EcoRI,EcoRⅤ,BamHI,KpNI,PmeI,PacI,PCR引物。方法:将hOPG基因片段插入到含有GFP基因的穿梭质粒pAd-Track-CMV上,与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增后得到携带hOPG和GFP基因的重组腺病毒(Adeasy-Adtrack-CMV-hOPG,Ad-hOPG)。经大鼠尾静脉注射109pfu的Ad-hOPG,在不同时相处死大鼠取其心、肝、肾、脾等组织观察重组腺病毒在体内表达特点。主要结局观察:①重组质粒转染293细胞后,观察是否有绿色荧光蛋白的表达。②所获得的重组腺病毒基因组是否含有hOPG基因。③重组腺病毒Ad-hOPG所携带的基因是否能在大鼠体内表达蛋白,及表达时象特点。结果:成功地构建了高滴度的携带hOPG基因的重组腺病毒,并能在体内大量表?