新生大鼠视神经少突胶质细胞原代培养及其对视神经损伤修复研究的意义(英文)

目的:探讨视神经少突胶质细胞的分离方法和体外培养条件,为研究视神经损伤修复及少突胶质细胞相关课题研究奠定基础。方法:新生Wistar大鼠20只视神经取材,以DMEM/F12为基础的化学限定性培养基进行组织块培养,并用少突胶质细胞特异性标记物半乳糖脑苷脂的抗体鉴定细胞。结果:培养第3天,视神经周围出现少突胶质细胞生长,呈圆形或梭形;10d左右基本铺满盖玻片。免疫细胞化学检测该细胞为阳性细胞,纯度较高。结论:采用视神经组织并用化学限定性培养基能成功获取体外培养的少突胶质细胞,为视神经损伤修复的研究提供了先决条件。

原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞自分泌转化生长因子β1浓度检测及对转化生长因子β1增殖的调节

背景:体外实验常采用外源性转化生长因子β1刺激来观察细胞增殖变化,易忽略细胞本身自分泌转化生长因子β1的影响。目的:检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞(L929)自分泌转化生长因子β1的浓度和细胞增殖的变化。方法:Elisa试剂盒检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞各时相点细胞内和培养上清中生长转化因子β1水平。结果与结论:纤维肉瘤细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而升高,原代成纤维细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而降低;两种细胞培养上清转化生长因子β1浓度均随时间而上升,但纤维肉瘤细胞显著高于原代成纤维细胞(P<0.01),峰值时达到原代成纤维细胞的20倍;两种细胞增殖曲线在72h内均随时间而显著增高(P<0.01),同一时间点比较,纤维肉瘤细胞明显高于原代成纤维细胞。提示自分泌转化生长因子β1具有促进细胞增殖的作用,不同的自分泌水平可能是影响原代成纤维细胞这种正常细胞和纤维肉瘤细胞肿瘤细胞对于外源转化生长因子β1反应不同的重要原因。

狗胆囊上皮细胞的分离及原代培养

胆囊的主要功能是贮存、浓缩和排泄胆汁,上述功能的发挥与胆囊上皮细胞有着十分密切的联系[1-6].胆囊好发疾病如胆囊炎、胆石症、胆囊癌等,都是以胆囊上皮细胞为病变的靶位、损伤因素攻击的中心 [7,8 ].可以认为,胆囊上皮细胞是胆囊生理功能及病理状态的中心环节[9].而要研究胆囊上皮细胞的粘液分泌能力、离子转运功能、对炎症递质的反应和病理状态改变等,首先需进行胆囊上皮细胞的分离和原代培养.由于正常人胆囊标本来源困难,狗和兔被作为胆囊上皮细胞分离培养的常用动物.我们经过反复摸索,在国内首次成功地原代分离培养了狗胆囊上皮细胞,为进一步研究胆囊的生理功能和相关疾病奠定了基础.

人ski基因真核表达载体的构建及促细胞增殖作用

背景:c-Ski既可促进组织修复,又能降低瘢痕形成,有望成为一个全新的基因治疗药物。目的:构建人ski基因的真核表达载体,并对其促成纤维细胞增殖效果进行验证。方法:RT-PCR法从人包皮培养原代成纤维细胞总RNA中扩增出人ski基因,连同真核表达启动子CMV克隆到pUC118载体上,酶切和测序验证后,应用脂质体将其转染到培养的大鼠皮肤成纤维细胞中。结果与结论:酶切和测序结果证实表达质粒构建成功,Westernblot显示Ski蛋白在转染细胞中成功表达,且可显著提高转染细胞的增殖效应,说明以pUC118为骨架的重组ski表达质粒具有促进大鼠皮肤成纤维细胞增殖的作用。