丰富环境刺激对缺氧缺血性脑损伤大鼠脑超微结构改变及神经丝蛋白表达的影响

目的:观察丰富环境刺激对缺氧缺血性脑损伤大鼠脑超微结构及神经丝蛋白(NF)的影响。方法:实验于2005-03/2006-06在新桥医院中心实验室完成。取7日龄健康SD大鼠52只随机分为3组:①丰富环境干预组:20只,采用Rice法建立缺氧缺血性脑损伤模型,予早期抚触(15min/次,2次/d)和丰富环境(2h/次,1次/d)刺激共28d。②缺氧缺血非干预组:20只,同前造模,造模后不干预。③正常对照组:12只,不造模,不干预。饲养至1月龄时各组随机选10只进行Morris水迷宫测试学习记忆功能;行为学测定后处死大鼠取脑,免疫组织化学方法观察海马神经丝蛋白的染色情况,借助自动图像分析系统对其进行定量分析;利用透射电镜观察海马神经元超微结构、神经丝蛋白及突触情况。结果:52只进入结果分析。①隐匿平台逃避潜伏期(学习能力):缺氧缺血非干预组较正常对照组明显延长[(39.98±7.86),(26.12±4.03)s,P<0.001],丰富环境干预组较缺氧缺血非干预组缩短[(29.06±5.11)s,P<0.01],与正常对照组无差异。②跨越平台次数(记忆能力):缺氧缺血非干预组明显少于正常对照组[(2.13±1.33),(4.91±2.01)次,P<0.001],丰富环境干预组多于缺氧缺血非干预组[(4.45±1.59)次,P<0.01],与正常对照组无差异。③缺氧缺血非干预组左侧与右侧脑组织NF-H积分吸光度值之比值明显小于正常对照组和丰富环境干预组(0.398±0.110,0.975±0.011,0.821±0.138,P<0.01),后2组比较无差异。④超微结构显示缺氧缺血非干预组海马神经细胞固缩改变,线粒体肿胀,神经丝数量减少,排列稀疏,突触数量减少;丰富环境干预组海马神经元和突触无明显异常。结论:早期抚触及丰富环境刺激可以促进缺血缺氧的脑损伤恢复,脑组织神经网络重建及脑的可塑性增加是其可能的机制之一。

抗细胞凋亡治疗缺氧缺血性脑损伤

缺氧缺血性脑损伤(hypoxia-ischemiabraindamage,HIBD)中神经细胞死亡并非简单的坏死,而存在着复杂的细胞凋亡机制,这种病理情况下的凋亡可引起或加重HIBD。如何早期中断凋亡,减轻脑损伤及后遗症的发生,是近年来的研究热点。

缺氧缺血对新生鼠脑Caspase-3效应蛋白酶及细胞凋亡的影响

目的:观察缺氧缺血对新生鼠脑Caspase-3活性及Caspase-3与脑细胞凋亡之间的关系。方法:实验于2002-03/12在解放军第三军医大学新桥医院呼吸研究所完成。7d龄Wistar大鼠分为假手术组、缺氧缺血脑损伤(hypoxia-ischemiabraindamage,HIBD)1,12,24,48h组。HIBD模型建立后,分别在上述各时间点用四肽荧光底物法测定脑组织Caspase-3活性;用免疫组化法检测活化Caspase-3蛋白以及用TUNEL法检测细胞凋亡。结果:HIBD后1h患侧脑组织Caspase-3活性已升高,到24h达高峰,48h明显下降;患侧脑细胞凋亡自HIBD后1h已升高,到24h达高峰,48h仍维持较高水平,两者之间呈正相关。结论:HIBD新生鼠患侧脑组织中Caspase-3激活,且与细胞凋亡明显相关。提示Caspase-3活化参与了HIBD的脑细胞凋亡。

AMPA受体拮抗剂对新生鼠缺氧缺血性脑损伤自由基的影响

目的:探讨α-氨基-3-羟基-5-甲基异恶唑-4-丙酸(alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionicacid,AMPA)受体拮抗剂GYKI-52466对缺氧缺血新生鼠脑组织自由基的影响。方法:选用7日龄Wistar大鼠30只,随机分为3组,假手术组,缺氧缺血组和治疗组。治疗组在缺氧缺血后即刻开始予GYKI-5246610mg/kg腹腔注射,每小时注射1次,共4次。缺氧缺血组予等量生理盐水腹腔注射。于处置后24h检测脑组织中超氧化物歧化酶(superoxidedismutaseSOD)、谷胱甘肽、丙二醛水平。结果:缺氧缺血组脑组织SOD,GSH水平分别为(1.47±0.15)mkat、(75.03±5.22)mg/g,明显低于假手术组(2.51±0.16)mkat、(88.66±4.50)mg/g(t=3.237～15.573,P均<0.001);MDA含量为(8.03±0.64)pmol/g,较假手术组(5.12±0.57)pmol/g显著升高(t=6.253～15.373,P<0.001)。而治疗组脑组织SOD、谷胱甘肽水平分别为(2.73±0.21)mkat、(83.47±6.38)mg/g,明显高于缺氧缺血组(P<0.001;P<0.005);丙二醛含量为(6.07±0.68)pmol/g,较缺氧缺血组显著下降(P<0.001)。结论:AMPA拮抗剂可通过拮抗氧自由基发挥对缺氧缺血性脑损伤时脑的保护作用。

丰富环境与神经可塑性

目的:神经系统的发育是遗传因素和环境因素共同作用的结果,丰富环境对脑发育和脑损伤修复具有显著的促进作用,而脑发育与脑损伤修复的基础是神经可塑性。因此,关于丰富环境与神经可塑性的研究已成为脑损伤修复研究的热点。资料来源:应用计算机检索Medline1994-01/2004-08和ELSEVER1997-07/2004-08期间丰富环境与神经可塑性相关的文章,检索词“Enrichedenvironment,Neuronalplasticity”,并限定语言种类为英文。资料选择:对资料进行初审,选出与丰富环境与神经可塑性关系密切的文摘进行全文查找,浏览全文后,筛除重复研究的文献,将最新研究纳入提取精读范围。资料提炼:共收集到19篇符合要求的文献,其中11篇是关于丰富环境、神经可塑性及二者关系的文献,5篇涉及丰富环境的作用机制,3篇为问题与展望。资料综合:丰富环境可以提供多感官刺激、运动和社交的机会,丰富环境即可刺激和引起神经可塑性的变化,神经系统的生长发育及其损伤修复都具有可塑性。丰富环境刺激可引起神经形态学结构及行为学功能的改变,其作用机制与神经生长因子、离子型谷氨酸受体及早期即刻基因等变化有关。结论:丰富环境刺激具有引起神经形态学结构和行为学功能变化的效果,使其成为一种有效而低风险的脑损伤康复手段。

N-甲基-D-天冬氨酸受体在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑海马中的远期表达

目的:观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后,海马发育过程中N-甲基-D-天冬氨酸受体的远期表达变化。方法:实验于2006-03/06在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。选用新生7日龄SD大鼠72只,按随机数字表法分为缺氧缺血性脑损伤组和假手术组,每组36只。各组又分为生后15d(n=6)、22d(n=6)、29d(n=6)、36d(n=12)及43d(n=6)5个时相点。①参照Rice法通过结扎7日龄大鼠左侧颈总动脉,吸入氧气体积分数为0.08的氮氧混合气,制成缺氧缺血性脑损伤模型,出现自发或夹尾左旋则证明模型制作成功。假手术组仅切开颈部皮肤,暴露左侧颈总动脉。②应用免疫组织化学法检测缺氧缺血后不同时点两组大鼠脑海马CA1区N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1亚单位的表达(n=6),测量平均灰度值,灰度值越低,蛋白表达越强;生后36d时相点大鼠(n=6)利用Morris水迷宫测定学习记忆能力;最后应用电镜观察生后36d大鼠海马突触结构。结果:72只大鼠,全部进入结果分析,无脱失。①生后22-43d缺氧缺血性脑损伤组大鼠(缺氧缺血后15-36d)脑海马CA1区NR1平均灰度值分别为167.69±6.48,174.57±4.81,179.30±5.92,176.50±5.93,均显著高于同日龄假手术组148.96±4.91,151.17±6.37,152.06±9.86,156.32±6.86(P均<0.01)。②Morris水迷宫实验中,缺氧缺血性脑损伤组大鼠逃避潜伏期显著长于假手术组(48.87±9.47)s,(11.97±2.20)s,(P<0.01);原平台象限游泳距离/总游泳距离的百分比显著低于假手术组(14.45±3.85)%,(62.20±8.74)%(P<0.01)。③生后36d(缺氧缺血后29d),透射电镜下缺氧缺血性脑损伤组大鼠患侧海马突触后膜致密物较假手术组明显减少。结论:新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后期存在海马N-甲基-D-天冬氨酸受体的表达下调,可能对大鼠远期空间学习记忆产生一定影响。

Caspase-3抑制剂对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用(英文)

目的:观察Caspase-3特异性肽类抑制剂AC-DEVD-CHO(acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-aldehyde)对新生鼠缺氧缺血脑损伤(hypoxia-ischemiabraindamage,HIBD)的疗效。方法:建立HIBD模型后予新生鼠不同剂量AC-DEVD-CHO脑室注射,24h后用四肽荧光底物法检测鼠脑Caspase-3活性,确定最佳剂量。通过病理学、原位细胞凋亡检测等考察AC-DEVD-CHO对HIBD的疗效。结果:HIBD新生鼠患侧脑组织Caspase-3活性随注射AC-DEVD-CHO剂量增加而递减。至300-400ng时,差别已不明显。AC-DEVD-CHO300ng治疗组HIBD新生鼠脑皮质、海马神经细胞凋亡百分率(30.2±11.2)%较生理盐水组(44.6±12.4)%明显降低。结论:Caspase-3抑制剂对新生鼠HIBD具有脑保护作用。

脑缺氧缺血损伤过程中环氧合酶2的作用及机制

环氧合酶(cyclooxygenase,COX)是催化花生四烯酸合成前列腺素以及血栓素的限速酶。COX-2为诱导型,在生理状态下以极低拷贝数表达。研究发现,局部缺氧缺血性模型中,COX-2表达增强,并可能是脑缺血后氧自由基产生的主要机制;有实验发现COX-2与兴奋中毒相关以及与NO介导的损伤相关;另有实验证明有COX-2缺陷的小鼠对抗中枢神经损伤的能力增强。说明COX-2有可能广泛参与了缺氧缺血的病理过程,并为其中重要环节。COX-2与COX-1相比,药物对两类异构体存在选择性的差异;导致大多数的非选择性COX抑制剂等在一些脑缺血研究中出现阴性结果。目前已有实验证明选择性COX-2抑制剂可以明显减轻缺血性脑损伤以及海马CA1神经元的迟发性死亡。COX-2是否为脑缺氧缺血损伤中的一个重要的中间环节或分支因素,值得进一步研究。

丰富环境对脑损伤后脑功能恢复的作用

目的:自20世纪40年代首次提出丰富环境可促进脑损伤患者功能恢复以来,对不同类型的脑损伤动物模型的大量研究均证实了这一观点。随着脑科学和分子生物学研究的进展,有关环境对脑损伤功能恢复的实验研究得到进一步的发展。资料来源:应用计算机检索Medline1990-01/2004-01和Sciencedi-rect2000-01/2004-01与丰富环境相关文章,检索词为“environmentalenrichment,braindamage,synapticplasticity,并限定文章语言种类为English。资料选择:选择丰富环境应用于脑损伤修复的实验研究方面的文献,排除科研设计明显不正确的文献及综述文献。资料提炼:共检索到35篇英文文献,排除明显重复和较陈旧文献,共纳入11篇。对检索到的丰富环境干预促进脑损伤修复研究方面文章中的相关信息进行综述。资料综合:对检索到的文章进行分析综合,提示中枢神经系统在结构和功能上具有很强的适应和重塑能力,易受环境和经验的影响,脑损伤后亦如此。脑损伤后神经元的修复是一个非常复杂的过程,丰富环境干预能引起突触结构和功能的变化,促进脑损伤后脑功能的恢复。结论:丰富环境干预可以促进脑损伤后脑功能的恢复,丰富环境刺激还具有神经保护作用,提高中枢神经系统的环境适应能力,降低再次受损的危险性。因此如果将丰富环境结合被动活动和主动学习与训练运用于临床康复中,将会显著促进脑损伤后认知能力和感觉运动功能的恢复。

缺氧缺血致脑白质少突胶质细胞损伤的机制

缺氧缺血是造成新生儿脑白质损害的常见原因,与脑瘫、智力低下等神经功能障碍密切相关。少突胶质细胞不仅是脑白质的重要成分,而且对缺氧缺血高度敏感。不同发育阶段的少突胶质细胞对缺氧缺血的易损性不同,晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞最为易损。研究少突胶质细胞缺氧缺血性损伤机制,阐明其相关问题对脑损伤的早期干预具有重要的临床意义。脑缺氧缺血实验显示,非-N-甲基-D-天门冬氨酸受体拮抗剂CNQX,谷氨酸逆向转运抑制剂DKA,caspase-3抑制剂DEVD-CHO,calpain抑制剂PD150606等可以明显减轻脑缺氧缺血后少突胶质细胞的损伤。

新生鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织结构和功能的改变及AMPA受体拮抗剂的干预效应

目的:谷氨酸浓度过度升高和谷氨酸受体过度活化引起的兴奋毒性是缺氧缺血性脑损伤hypoxic-ischemicbraindamage,HIBD发生发展的重()要环节,α-氨基-3-羟基-5-甲基异恶唑-4-丙酸(alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionicacid,AMPA型谷氨)酸受体起重要作用。研究选择性AMPA受体拮抗剂GYKI-52466对新生鼠HIBD的保护作用及机制。方法:实验于2003-04/2004-03在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。7日龄Wistar大鼠27只,随机分为4组:正常对照组;假手术组;缺氧缺血组;GYKI-52466干预组。正常对照组用于观察脑组织髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)在正常新生鼠的表达情况;干预组在缺氧缺血后即刻开始予GYKI-5246610mg/kg腹腔注射,1次/h,共4次;假手术组予等量生理盐水腹腔注射。缺血缺氧后1周取脑,免疫组化、图像分析法测双侧脑半球横截面积之比,检测脑组织MBP、NF表达及积分吸光度值。结果:缺血缺氧后患侧脑组织横截面积下降。缺血缺氧后1周,缺氧缺血()(组患侧与对侧脑半球横截面积之比L:RAREA为0.680±0.043),较假手术组(0.985±0.023)明显降低(P<0.001);GYKI-52466干预组L:RAREA值为0.804±0.031),明显高于缺氧缺血组(P<0.001)。MBP(第8天无显著表达。生后第11天嗅束、纹状体、胼胝?

泡泡浴对婴儿体智能发育的促进作用

为观察泡泡浴对正常婴儿体智能发育的作用。选择2005-01/03在解放军第三军医大学附属新桥医院每周一于儿保门诊就诊的42名婴儿,根据门诊号奇偶随机分为2组:泡泡浴组22名,男11名,女11名,包括2～4个月龄11名,5～8个月龄11名;对照组20名,男11名,女9名,2～4个月龄9名,5～8个月龄11名。观察并比较两组婴儿2个月前后体质量和Gesell发育指数增长情况。结果表明泡泡浴组运动能、应物能、应人能、语言能发育指数增长显著高于对照组(3.68±0.84,,1.75±0.54;3.27±1.08,1.75±0.72;3.18±0.85,0.90±0.55;3.14±0.89,1.75±0.72,P<0.05)。体质量增长情况泡泡浴组与对照组比较,差异无显著性[(0.63±0.25)kg,(0.50±0.25)kg,P>0.05]。提示泡泡浴对婴儿体智能发育有明显的促进作用。

不同喂养方式下双头单体女婴的营养状况观察

目的观察不同喂养方式下双头单体女婴的营养状况。方法以2011年5月10日收治的1例双头单体女婴为研究对象,在住院152 d期间,双头单体女婴因病情需要在不同阶段共采取5种不同喂养方式,分别为经口+静脉营养(口服+静脉)、全肠道内(口服)、全肠道内(持续鼻饲)和全静脉营养、经鼻+静脉营养(间断鼻饲注入+静脉),共喂养147 d。分别对不同营养支持方式下连体婴儿的体重、静息能量消耗量、热卡总量进行监测并统计,同时,观察不同营养支持方式下婴儿的不耐受率。结果在体重变化量上,全肠道内(持续鼻饲)营养方式促进婴儿体重的增长量最大(P<0.05);在静息能量消耗上,部分静脉(经口+静脉)营养方式消耗量最低(P<0.05);在热卡总量供给上,全肠道内(经口)供给热量最多(P<0.05)。在全部喂养方式中,全肠道内(口服)的喂养不耐受率(最高)为20.5%,而全肠道内(持续鼻饲)的喂养不耐受率(最低)为5.7%。结论综合体重增长量、静息能量消耗量、热卡总量、耐受率及药物安全因素等考虑,部分静脉营养(间断鼻饲注入+静脉)是较为安全、有效的连体婴儿营养支持方式。

应用多重连接依赖探针扩增和微阵列比较基因组杂交技术检测不明原因智力障碍患儿

目的应用多重连接依赖探针扩增(MLPA)技术和微阵列比较基因组杂交(aCGH)技术检测不明原因智力障碍患儿。方法针对临床上经过常规检查、遗传代谢病氨基酸和酰基肉碱谱分析、外周血染色体核型等未见明显异常的精神发育迟缓(智力评分70分)患儿,通过MLPA技术及aCGH技术对患儿进行检测。结果经过SALSA MLPA P245 Kit染色体微缺失检测试剂盒检测,提示MECP2/Xq28复制。对患儿的基因组DNA进行aCGH检测,提示CNV重复。经过两种技术,患儿诊断为智力障碍,病因为MECP2基因复制引起。结论应用MLPA技术联合aCGH技术可诊断不明原因智力障碍患儿。