苦参碱抑制HepG2细胞增殖及其剂量与抑制方式关系的研究

目的研究0.05g·L^(-1)～3.5g·1^(-1)浓度苦参碱对人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制及其剂量与抑制方式的关系,为进一步研究苦参碱抑制HepG2细胞增殖的机制打下基础;为临床应用苦参碱治疗肿瘤奠定基础。方法苦参碱处理细胞后,MTT法、细胞计数法、H^3-TdR掺入法测定HetG2细胞存活率、细胞生长曲线、DNA合成率的变化;台盼蓝拒染法和细胞外液LDH活性测定观察细胞膜的完整性。结果苦参碱浓度小于0.2g·L^1时不能抑制HepG2的增殖,细胞存活率大于80％;0.7g·L^(-1)～0.8g·L^1时,HepG2对药物中度敏感,细胞存活率为30％～50％:大于1.0g·L^1时为抗HepG2的敏感药物浓度,细胞存活率小于30％;苦参碱大于3.0g·L^(-1)时,细胞膜完整性破坏,以坏死细胞为主。而苦参碱对大鼠肝细胞影响很小,达1.5g·L^(-1)时,细胞存活率仍为72.4％。结论一定浓度苦参碱可抑制HepG2细胞增殖并且抑制作用呈时间和剂量依赖性。0.8g·L^(-1)可作为诱导HepG2细胞分化的作用浓度;1.5g·L^(-1)～2.5g·L^(-1)可作为诱导HepG2凋亡的作用浓度;苦参碱大于3.0g·L^(-1)时主要引起HepG2坏死。

晚期氧化蛋白产物的制备及纯化

背景:晚期氧化蛋白产物是血液透析患者免疫功能紊乱、加速性动脉粥样硬化、透析相关性淀粉样变等长期并发症的重要致病环节。但是对于晚期氧化蛋白产物的基础性研究相对较少。主要原因之一就是不能获得高纯度且具有生物学活性的晚期氧化蛋白产物。目的:制备及纯化晚期氧化蛋白产物,并对其进行鉴定,以寻求一种制备高纯度且具生物活性的晚期氧化蛋白产物的方法。设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-09/10在解放军第三军医大学检验系临床生化教研室完成。材料:人血白蛋白为成都容生有限公司产品,Hitrap26/60sephacryl S-300为GE Healthcare产品。方法:首先纯化人血白蛋白,将纯化的人血白蛋白与次氯酸体外孵育法制备晚期氧化蛋白产物-人血白蛋白,经Hitrap26/60 sephacryl S-300分离纯化。并经变性及非变性电泳、分子筛蛋白标准鉴定其相对分子质量,经单核细胞肿瘤坏死因子α分泌实验鉴定其结构特征和生物学活性。主要观察指标:①人血白蛋白的纯化及电泳结果。②晚期氧化蛋白产物纯化及电泳结果。③晚期氧化蛋白产物-人血白蛋白促单核细胞肿瘤坏死因子α分泌的量效关系。结果:经变性及非变性电泳、分子筛蛋白标准鉴定其相对分子质量为670000,能够显著刺激单核细胞肿瘤坏死因子α的分泌,时间效应显示AOPPs-HSA(1g/L)刺激6h,单核细胞肿瘤坏死因子α的分泌量就已显著性升高,12h升至最高水平。结论:采用上述方法能够制备及纯化晚期氧化蛋白产物,且纯化后的晚期氧化蛋白产物具有生物学活性,为晚期氧化蛋白产物的进一步研究奠定了基础。