肝移植后乙型肝炎病毒再感染相关因素的研究进展

目前,全球约有3亿5千万人感染乙型肝炎病毒(hepatitisB virus,HBV),近50％的感染者出现临床症状,约有5％发展为肝炎肝硬化,而每年因HBV感染而死亡的人数近一百万.对HBV相关的终末期肝病,根治一直是世界性难题,近年来,原位肝移植(OLT)的成功开展无疑为此类患者带来了曙光.但如果不给予一定的预防措施,其OLT后HBV再感染率可高达58-83％,最高可达90％.文献资料显示,OLT后HBV再感染发生可能与术前HBV复制状态、抗HBV药物应用前后病毒变异、免疫抑制剂及糖皮质激素的应用、肝外组织HBV存在情况等因素有关.本文就近年来相关的研究进展作一综述.

丙型肝炎病毒感染动物模型研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)感染是全球关注的公共卫生问题,对HCV分子生物学特性的深入探讨有赖于实验模型的建立.建立理想的HCV动物模型,不仅有利于丙型肝炎疫苗的研制,同时对深入研究丙型肝炎慢性化机制,包括病毒变异与宿主免疫应答以及与疾病的关系等,均具有重要意义. 文章主要介绍了黑猩猩、猴、树鼩转基因鼠以及人鼠嵌合肝模型感染HCV,同时探讨了该模型体系存在问题及应用前景。

慢性HBV感染者血清病毒动力学的检测及分析

目的:观察未抗病毒治疗的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者体内病毒载量的变化及其动力学特征。方法:采用荧光定量PCR方法对未进行抗病毒治疗的3例不同临床表型的慢性HBV感染者血清HBV载量进行连续监测,同时测定每一时相点的血清ALT和总胆红素. 结果:不管是间隔1 d、1wk还是1mon,3例慢性HBV 感染者体内HBV DNA水平均存在自发波动,且与血清ALT和总胆红素变化相关性不确定. 结论:3例慢性感染者体内HBV载量的自然波动表现出一定的模式特征.我们提出—种宿主对病毒负反馈控制的PID 模式,以期对持续性病毒感染的体内生态演化作出评价和预测.

丙型肝炎病毒非结构区NS5A研究进展

0引言 目前全球各国丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染率为0.5%～4%,平均为3%左右[1-12],其中20%左右是急性肝炎,70%～80%转变成慢性肝炎,而慢性丙型肝炎一般经过20 a～30 a发展为肝硬变或肝细胞癌(HCC),HCV相关性终末期肝病已成为欧美一些国家进行肝移植的主要适应证[12-28],危害极大.HCV是正单股RNA病毒,包括5′非编码区(5′non-coderegion,5′-NCR),一个长约9400bp的单一开放阅读框(openreading frame,ORF)和3′非编码区(3′non-encode region,3′-NCR),5′-NCR其间有内源性核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)其中OFR包括结构区(structural region)和非结构区(nonstructural region),在结构区中有C,E1,E2,P7区,在非结构区中有NS2,NS3,NS4A,NS5A和NS5B区等[24,29-33].近年来,有关HCV NS5A区的结构与功能倍受关注,现就HCV NS5A作一综述.

乙型肝炎的宿主遗传易感性的研究进展及前景

乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界范围的严重公共卫生问题之一,宿主对HBV感染的遗传易感性在HBV感染发病和疾病进展方面都发挥重要作用.研究乙型肝炎的宿主遗传易感性具有十分重要的意义.本文综述了近年来在乙型肝炎的宿主遗传易感性方面的研究进展,重点介绍了人类白细胞抗原(HLA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白介素10(IL-10)、干扰素γ诱导的蛋白10(IP-10)、雌激素受体α(ESR1)、甘露糖结合蛋白(MBP)、维生素D受体(VDR)等基因的多态性与HBV感染的关系.同时就乙型肝炎的宿主遗传易感性方面的研究前景作一展望.

小鼠胚胎干细胞体外分步诱导为肝细胞的实验研究

目的:探索小鼠胚胎干细胞(ES)体外分步诱导为肝细胞的培养方法.方法:在小鼠胚胎成纤维细胞MEF饲养层上培养ES细胞,培养液中含白血病抑制因子(LIF),然后分阶段加入含acid-FGF、肝细胞生长因子(HGF)、致瘤素(OSM)、胰岛素、微量硒酸等诱导因子.采用免疫组化方法检测白蛋白(Albumin)、细胞角蛋白CK18,用硝基四氮唑蓝/5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸(NBT/BCIP)显色检测碱性磷酸酶(ALP).结果:ES细胞克隆ALP染色阳性,未分化.培养4d后,形成拟胚体.在分步加入诱导因子24d后,ES细胞分化出的细胞形态比较单一,类似上皮样细胞.诱导分化的细胞可见白蛋白、CK18阳性细胞.

乙型肝炎病毒准种异质性对干扰素应答性的影响

目的:了解乙型肝炎病毒(HBV)准种遗传异质性对干扰素(IFN-α)应答性的影响.方法:用构象敏感凝胶电泳(CSGE)对20例(完全应答者和无应答者各10例)已接受IFN-α治疗的慢性乙型肝炎患者治疗前血清中HBV准种的异质性进行检测,分析准种的异质性与IFN-α应答性的关系.结果:HBVDNA含量在IFN-α应答患者和非IFN-α应答患者之间无差异(7.27×1010±8.79×1010vs5.16×1010±5.13×1010,P>0.05),但是,在无应答患者HBV准种的复杂性和遗传差异性明显高于应答患者(8.30±1.89vs18.5±2.68,P<0.001和0.926±0.008vs0.869±0.016,P<0.001).结论:HBV准种的异质性对IFN-α的应答性有影响.

人工肝生物反应器研究进展

肝功能衰竭有很高的死亡率,肝脏移植是治疗终末期肝病的较好方法,由于供体器官缺乏,费用高昂,需长期使用免疫抑制剂等原因,仍有较多患者不能进行肝脏移植,探索肝功能衰竭非肝脏移植治疗显得非常必要.生物人工肝是近年来肝功能衰竭治疗的热门课题,而生物人工肝装置及对肝功能衰竭治疗效果最有影响的关键部分是生物反应器,因此,生物反应器已成为人工肝研究的重要课题.

SV40T外显子的拼接及逆转录病毒载体pLLTSN的构建

目的:为构建肝细胞永生化载体,对猿猴病毒40大T抗原基因(SV40T)外显子进行拼接并以其为外源片段构建逆转录病毒永生化载体pLLTSN. 方法:以质粒pUC19-SV40T为模板,高保真PCR扩增SV40T的2个外显子,重叠延伸拼接法将两个外显子拼接到一起,然后用双粘端连接法将其克隆到空载体pLXSN 的EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点之间,通过菌落PCR和酶切法筛选,鉴定阳性克隆并经DNA测序验证. 结果:拼接成2.1 kb的SV40T,用菌落PCR和酶切法随机筛选的10个菌落中4个为阳性,均含有2.1 kb SV40T插入片段.经质粒DNA测序分析的阳性克隆,确证无内含子. 结论:获得重组的2.1 kb无内含子的SV40T,成功构建了逆转录病毒载体pLLTSN.

进一步深化慢性乙型肝炎诊断治疗的实用性研究

自1965年Blumberg发现HBsAg以来,乙型病毒性肝炎(HBV)在分子病毒学、组织病理学、免疫学、流行病学及临床诊断治疗学等方面已取得了长足的发展,一些问题得到阐明达成了共识,但仍存在许多问题,我国是乙型肝炎的高流行区,全世界的慢性乙型肝炎患者我国占50％以上,而我国的乙型肝炎防治工作存在一些国外不曾有过的问题,这些问题需要我们自己来研究解决,可以说,在乙型肝炎临床与科研过程中充满了艰辛,我国的临床医师及基础科研工作者尽管在治疗中做了大量工作,遗憾的是至今尚未有重大性突破,这使我们喜忧参半、任重而道远。在临床研究中我国与欧美存在较大的差距,除外经济、政治和学风中的一些问题外,主要存在以下一些问题:(1)临床治疗试验不规范,难以严格的按照随机、双盲、对照和多中心原则实施临床科研方案;(2)临床科研与基础实验研究结合不够,重基础研究,轻临床科研;(3)存在多经验,少证据的现象;(4)肝活体组织检查较少,尤其是治疗前、后自身对照的肝活体组织标本甚少;(5)缺乏长期随访资料,医学资料保管不善,丢失现象较为普遍;(6)国内诊断试剂质量不稳定,缺乏统一标准,大多不能通过国际质检要求,实验数据难以得到国际权威性杂志的认可;(7)临床研究及经典流行病学调研难以获得基金资助等。慢性乙型肝炎已成为相关临床医生面临的重要问题,为了更好地解决这些临床问题,我们组织国内部分专家结合个人的临床经验及科研体会,对“慢性乙型病毒性肝炎的诊断与治疗”进行讨论,目的是引导临床医生科学、准确地处理这些问题,同时进一步深入开展慢性乙型肝炎的临床实用性研究,为提高我国慢性乙型肝炎诊治水平做出应有的贡献,造福于人类,这也是本期“焦点论坛”主办者的心愿。

肝干细胞的研究进展

肝干细胞的存在与否曾是一个争议性问题,目前则趋于肯定,并取得重要研究进展。肝干细胞有肝源性和非肝源性两类,前者包括胆管源性卵圆细胞和分化肝细胞,后者包括胚胎干细胞(ES细胞)、骨髓/血液干细胞及胰腺上皮细胞等。肝干细胞受多种细胞因子调节;卵圆细胞可通过流式细胞仪分离,经特殊培养液/培养条件及遗传学改造等进行长期培养;肝干细胞与肝坏死后的再生及增生有关,也和肝细胞癌变有关。已在动物中成功进行了肝源性和非肝源性肝干细胞移植。肝干细胞是研究肝细胞发育、生长、增生、再生、纤维化及癌变等生理和病理生理过程中不可缺少的关键角色,并可能通过肝细胞移植、体外生物人工肝及肝导向基因治疗,在多种肝病及肝脏相关疾病中发挥重要作用。

基因功能研究新途径-RNA干扰

近年来的研究表明,一些小的双链RNA可以高效特异地阻断体内特定基因表达,促使mRNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干扰(RNA interference, RNAi).他是体内抵御外在感染的—种重要保护机制,也可以作为一种简单有效的代替基因敲除的遗传工具.现就RNAi 的研究进展做一综述.

进一步加强慢性丙型肝炎的临床实用性研究

自从发现丙型肝炎病毒(HCV)为非甲非乙型肝炎的病因之一以来，已过15个春秋，丙型病毒性肝炎对人民生命健康的危害仍在继续，然而其本质也在逐渐被人们所认识．当今HCV的基础和临床各方面研究已经有了很大进展．但是在诊断、治疗、疫苗研制等方面还不尽如人意，彻底控制丙型肝炎的危害还有很远的路程要走．可以说，在丙型肝炎临床与科研过程中充满了艰辛，任重而道远．因此临床医生对丙型肝炎密切相关的诊疗预防等进展需求显得十分迫切．为了提高临床医生认识，改善国内对丙型肝炎的诊断治疗相对落后的现状，了解目前国内外最主要的研究动态．借今年美国肝病研究协会制定《丙型肝炎的诊断、治疗处理策略一临床实践指南(AASLD Practice Guideline)》及中华医学会肝病学分会、中华医学会传染病与寄生虫病学分会制定《丙型肝炎防治指南》的机会，我们组织一批国内研究丙型肝炎的资深专家和教授撰写了“焦点论坛-慢性丙型肝炎的诊断与治疗”，这次“焦点论坛”主要面向临床医生，故在组稿写作过程中注意“紧扣文题，开门见山，突出重点，临床实用性为主，兼顾相关研究进展”，以进一步推动丙型肝炎的临床实用性研究．希望能在控制丙型肝炎的工作中履行义务，贡献一份薄力．

乙型肝炎病毒遗传异质性对干扰素应答性的影响

迄今IFN-α仍是治疗乙型肝炎的主要抗病毒药物,但其总体疗效并不理想。究其原因,HBV基因组的多样性可能是重要原因之一。HBV种群具有高度的异质性,存在着多种不同的血清型、基因型及变异株,即使在单个感染个体内,也可能包含异质性的HBV病毒群体(准种)。研究发现不同的HBV株对IFN-α治疗的敏感性不同,个体内准种的异质性程度也对扰素治疗的应答性有影响。因此,正确深入地认知和分析HBV遗传异质性,对阐明影响IFN-α治疗的病毒学因素有着重要的意义。

生物人工肝细胞材料研究进展

肝细胞是生物人工肝(bioartificial liver, BAL)中的核心生物成分,其研究颇受国内外学者的重视。猪肝细胞具有类似人肝细胞的高代谢功能,在BAL中可作为人肝细胞的替代品。重组具有氨清除等功效的人肝细胞系在BAL中取得了较好成效,具有一定的应用前景。为了探索一种永生化的、无致瘤性的、有分化功能的人肝细胞系,作为BAL生物成分的理想细胞来源,国外学者研究设计了一种可回复性永生化程序,为解决细胞材料问题提供了新的思路和手段。肝非实质细胞及某些种类细胞,对维持肝细胞的三维结构的生存环境,改善肝细胞的代谢活性和存活起重要作用,与肝细胞混合培养后明显促进肝细胞的增生和分化,其在BAL系统中的潜在价值已逐渐引起注意。然而,肝细胞的增生、长期培养、功能维持及人源肝细胞的严重短缺等都是亟待解决的问题。

生物人工肝研究的若干新进展

生物人工肝的研究在近年取得了较大进展。聚氨酯泡沫(PUF)等新型材料用于肝细胞培养、肝细胞与骨髓细胞共同培养以及肝细胞生长因子的应用对肝细胞的生长与代谢是有益的;培养液中添加激素与氨基酸有助于恢复受血浆损伤肝细胞的功能;甘氨酸及ZVAD-fmk等细胞保护剂有益于维持生物人工肝的代谢功能;甲磺酸萘莫司他(NM)可预防FHF血浆对肝细胞的损伤作用,保持猪肝细胞在FHF患者血浆中的活性,使猪肝细胞生物人工肝性能进一步增强;纤维膜孔隙、膜组成成分及暴露时间是影响猪内生逆转录病毒(PERV)跨膜传播的主要因素;生物人工肝的疗效得到进一步验证;一些学者对物理型人工肝或/和中间型人工肝与生物人工肝组成的混合型生物人工肝进行了新的尝试。

可回复性永生化逆转录病毒载体pLNCTIGIox的构建与表达

目的:为建立可回复性永生化肝细胞株,构建带有筛选基因NeoR、报道基因EGFP及重组位点loxP的可回复性永生化逆转录病毒载体.方法:将2.1kbSV40T亚克隆到pIRES2-EGFP的相应位点,再酶切下3.4kbSV40T-IRES-EGFP片段插入逆转录病毒载体pLNCX2的两个相同酶切位点之间,构成新载体pLNCTIG.最后,将线性化pLNCTIG和loxP双链片段混合连接.取连接产物转化高效感受态DH5α细胞.菌落PCR和酶切法鉴定阳性克隆.转染包装细胞PT67并在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达.扩大培养稳定转染的细胞,免疫组化染色检测SV40T基因的表达.结果:随机挑取19个克隆,3个电泳分离出约1.1kb阳性条带.取上述阳性克隆进行酶切鉴定,结果仅出现一条约9.5kb的条带,证明该克隆为阳性重组体.转染PT67细胞24h后,荧光显微镜下可见散在多处绿色荧光.免疫组化染色显示细胞胞核呈阳性染色.结论:成功构建并表达可回复性永生化逆转录病毒载体pLNCTIGlox.

慢性丙型肝炎与自身免疫性肝炎关联性研究

慢性丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（HCV)感染所致的一种慢性肝脏炎症性疾病，易发展成肝硬化，并与原发性肝细胞癌的关系密切．据估计，全球约有1．7亿慢性HCV感染者．在日本和欧美等国家，慢性HCV感染是慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌的主要病因．自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)是一种原因不明的肝脏持续性炎症性疾病，

异种肝细胞移植研究现状

uPA/RAG-2小鼠的发现为异种肝细胞移植研究提供了—个有效的动物模型.在uPA/RAG-2转基因小鼠脾内注入大鼠、土拨鼠、人肝细胞后,均能部分或完全取代小鼠肝细胞. 文章主要介绍了大鼠、土拨鼠、人肝细胞在uPA/RAG-2转基因小鼠内的增生、对肝功能影响等情况,同时探讨了该模型体系存在问题及应用前景.

乙型肝炎病毒感染孪生子宿主遗传因素与临床表型关系的初步研究

目的 以 2 0对HBV感染孪生子和感染高危孪生子为研究对象 ,初步研究宿主遗传因素与乙型肝炎临床表型的关系。方法 采用人基因组短串联重复序列 (shorttandemrepeates ,STR)多态性扫描技术进行孪生子卵型鉴定 ,同时进行HAV、HBV、HCV、HDV、HEV等肝炎标志物检测 ,HBVDNA荧光定量检测及肝功能 (ALT ,AST ,TBil)检测。对临床指标数据进行Fisher′s精确检验 ,在单卵孪生子 (monozygotictwins ,MZ)组、双卵孪生子 (dizygotictwins ,DZ)组、对照 (control)组之间进行比较。结果 单卵孪生子组、双卵孪生子组与对照组两两之间 ,其感染率、HBsAg阳性率、HBeAg阳性率、无症状携带者 (AsC)比率及清除病毒比率差异无显著意义 (P >0 0 5 )。在同病率、疾病表型一致率、血清学模式相同者比率的比较中发现单卵孪生子组与双卵孪生子组之间及单卵孪生子组与对照组之间差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ,而双卵孪生子组与对照组之间差异无显著意义 (P >0 0 5 )。另外研究亦发现疾病表型一致率可能与患者年龄及是否进行抗病毒治疗等相关。对于HBV感染高危孪生子 ,出生后立即进行HBIg注射或疫苗接种 ,可阻断HBV感染。 结论 单卵孪生子组其同病率、疾病表型一致率、血清学模式相同者比率显著高于双卵孪生子组以及对照组 。