脉冲电磁场促进人骨髓间充质干细胞成骨的研究

目的 :观察脉冲电磁场 (PEMFs)对人骨髓间充质干细胞 (hMSCs)成骨能力的影响。方法 :hMSCs受频率 12Hz、场强 1.1mT的PEMFs刺激 8h/d ,检测细胞增殖、细胞周期 ,观察细胞超微结构、骨钙素、Ⅰ型胶原免疫组化染色 ,碱性磷酸酶 (ALP)活性、核固红钙染色。结果 :脉冲电磁场作用后的细胞增殖能力提高 ,细胞形态发生变化 ,透射电镜观察提示细胞成熟 ,核固红钙染色、骨钙素、Ⅰ型胶原免疫组化染色均阳性 ,ALP活性增高。结论 :hMSCs经合理的PEMFs体外刺激后 ,细胞增殖加速 ,符合成骨细胞的形态特征和生物学特性。

三种颈椎前路内固定装置对术后脊柱稳定性的作用(英文)

目的探讨颈椎前路带锁钢板在颈椎前路减压术中维持脊柱的稳定性的应用价值。方法对47例颈椎前路减压植骨内固定患者犤Orion30例,Zephir11例,一体化颈椎前路钢板-融合器系统(PCB)6例犦术后进行7～26个月(平均15个月)随访。结果26例患者术前有椎间隙狭窄,18例有颈椎生理前突改变,手术后均获得满意的椎间隙高度重建,随访中未见明显椎间隙高度丢失,手术矫正的生理曲度保持良好。43例患者神经功能获得不同程度的恢复,其余4例无明显神经功能恢复者均为创伤后完全截瘫患者。结论PCB适用于急性椎间盘突出或单节段脊髓型颈椎病;Zephir与Orion钢板适用于颈椎多节段病变及致压物广泛的单节段病变,利于颈椎生理曲度和椎间隙高度的恢复。

间充质细胞与骨组织共培养条件下的成骨特性

目的:在与骨组织间接共培养的条件下,观察体外培养的兔骨髓间充质干细胞的成骨特性。方法:通过间接共培养模型的建立,将新鲜兔骨碎粒及骨块与BMSCs间接共培养,观察细胞的形态学变化、碱性磷酸酶(ALP)活性及矿化能力,免疫组化检测Ⅰ型胶原、骨钙素。结果:共培养的BMSCs同期ALP活性及细胞的矿化能力均显著高于普通培养组(P<0.01);经过共培养的BMSCs,其Ⅰ型胶原、骨钙素免疫组化阳性;对照组Ⅰ型胶原免疫组化弱阳性、骨钙素免疫组化阴性。结论:体外建立的共培养模型部分模拟了体内成骨环境,经过共培养的BMSCs呈现向成骨细胞转化的特点。

组织工程用大段负重骨缺损动物模型的建立

目的:建立组织工程用大节段负重骨缺损的大动物标准模型。方法:统计分析山羊胫骨和股骨解剖数据,试制出适用于大动物长骨缺损内固定的交锁髓内钉器械;山羊10只随机分2组制备单侧胫骨或股骨中段30mm长的骨与骨膜缺损,胫骨用钢板内固定,股骨用髓内钉内固定。术后放射学检查、大体标本和组织学方法评价骨缺损自行修复情况。结果:X射线片示骨缺损处保持良好的对线、对位,为增生性骨不连表现,组织学显示无骨组织长入。结论:山羊胫骨或股骨30mm缺损模型不能自主成骨修复,符合骨组织工程动物模型的要求,内固定以交锁髓内钉更可靠,更值得在大动物的长骨骨缺损实验研究中推广运用。

新型骨髓干细胞富集材料富集骨髓细胞的效果

背景:骨髓干细胞富集材料是目前研究热点,制备并筛选一种新型骨髓干细胞富集材料对于组织工程学发展及临床应用至关重要。目的:制备并筛选一种骨组织工程新型骨髓干细胞富集材料,应用选择性细胞滞留技术观察其富集骨髓细胞的效果。方法:用预先制备的人脱钙骨基质与不同体积分数(0.01%,0.05%,0.1%,0.5%,1%)的多聚左旋赖氨酸复合制备多聚左旋赖氨酸-脱钙骨基质材料,应用选择性细胞滞留技术富集骨髓干细胞进行实验。激光显微共聚焦拉曼光谱分析、红外光谱分析鉴定材料成分;三维视频显微镜、扫描电镜观察富集材料孔径、孔隙率、表面及横断面超微结构;对富集前后骨髓有核细胞、纤维母细胞集落形成单位和血小板进行计数分析。结果与结论:多聚左旋赖氨酸-脱钙骨基质富集材料孔隙率高,孔隙内部有大量孔隙相互连通,材料内外表面有乳白色均匀致密的多聚左旋赖氨酸涂层覆盖,并在天然孔隙内形成更小、孔径较均匀的网孔结构。体积分数0.1%多聚左旋赖氨酸制备的富集材料对人骨髓有核细胞、纤维母细胞集落形成单位和血小板的浓度富集倍数分别为(3.18±0.31)、(5.25±1.40)和(3.88±0.68)倍,相应的黏附率分别达(53±12)%,(73±13)%和(34±10)%,对纤维母细胞集落形成单位的选择率为1.41±0.34。结果证实,实验制备并筛选的经多聚左旋赖氨酸修饰的脱钙骨基质具有天然骨海绵状支架网孔结构,对骨髓细胞的选择性滞留率高,是一种较理想的骨髓干细胞富集材料。

去卵巢大鼠骨质疏松模型的特点

目的:观察去卵巢致Wistar大鼠骨质疏松模型骨密度、结构、最大载荷等变化特点,探讨骨量与骨结构的可能关系。方法:实验于2002-09/2004-01在解放军第三军医大学动物研究所及中心实验室完成。选择雌性未孕Wistar大鼠20只,随机数字表法分为去势组、假手术组,各10只。去势组行双侧卵巢切除,假手术组不切除卵巢。术后8周测定以下指标:①骨密度:在双能X射线骨密度仪的探头下,应用小动物软件进行腰椎和股骨的扫描,测定骨密度值。②椎体压缩测试:将磨制好的椎体置于实验机上,取加载速度1mm/min进行测试,其结构力学参数由载荷-变形曲线获得,材料力学参数由应力-应变曲线获得。③骨形态计量学检查指标:骨小梁面积百分数(%Tb.Ar),代表骨量;骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N),骨小梁分离度(Tb.Sp)。④血、尿生化指标的测定:血清钙、磷,尿钙、磷,尿肌酐,均采用BECKMAN自动生化分析仪。血清骨钙素、血清碱性磷酸酶、血清抗酒石酸酸性磷酸酶、尿羟脯氨酸具体参照试剂盒说明。结果:纳入动物20只,均进入结果分析。①去势组大鼠股骨骨密度明显低于假手术组[分别为(0.166±0.026),(0.195±0.027)g/cm2,P<0.05],腰椎骨密度尤其显著[分别为(0.190±0.011),(0.251±0.029)g/cm2,P<0.01]。②去势组大鼠股骨最大载荷与假手术组相比显著降低[分别为(94.43±8.96),(109.49±12.41)N,P<0.05],腰椎最大载荷降低尤其显著[分别为(98.75±8.19),(118.82±15.74)N,P<0.01]。③去势组大鼠骨小梁面积百分数(%Tb.Ar)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)与假手术组相比显著降低(去势组分别为4.78±0.76,46.29±9.96,0.64±0.08,假手术组分别为7.74±1.76,60.91±3.80,1.26±0.26,P<0.01);骨小梁分离度(Tb.Sp)显著增高(分别为2300.85±480.10,1112.27±65.81,P<0.01)。④血、尿生化指标显示:骨吸收大于骨形成。结论:Wistar大鼠去卵巢8周成功建立了绝经后骨质疏松模型,骨量与骨结构的一些参数可能存在某种关系。

脉冲电磁场对人骨髓间充质干细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察脉冲电磁场(PEMFs)对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的增殖及细胞周期的影响。方法:hMSCs受频率12Hz、场强1.1mT的PEMFs刺激8h/d,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测细胞的增殖,细胞周期和细胞凋亡情况。结果:脉冲电磁场作用后的细胞增殖能力得到提高,连续刺激5d后,S期细胞百分比(20.15±2.10)%较对照组(8.56±1.13)%增高近135.4%,凋亡比例亦由(0.060±0.005)%减少至(0.020±0.003)%。结论:PEMFs对hMSCs的生物学效应一个重要方面表现在对细胞增殖,细胞周期的影响上。

持续被动活动促进下肢骨折愈合的微循环研究

目的 :观察持续被动活动 (CPM)对下肢骨折愈合的影响。方法 :股骨干骨折内固定术后患者 2 4例 ,随机分对照组和CPM组 ,观察术后 1周、 2周、 4周机体血液流变性和患肢足甲襞微循环的变化。结果 :CPM组与对照组比较 ,血液流变学和足甲襞微循环指标差异显著。CPM可降低血液粘度 ,改善患肢足甲襞微循环。结论

半月板损伤术后第1～63天功能训练计划

半月板损伤可出现膝关节疼痛、打软腿、关节交锁等临床表现,关节间隙压痛、股四头肌萎缩、旋转挤压试验阳性等体征。经关节镜行半月板手术治疗,具有手术创伤小、关节功能恢复快、住院时间短等优点。

膝关节置换术后患者功能康复中的护理干预

目的:探讨膝关节置换术后功能康复训练的原理、方法与措施。方法:将该手术后患者的整个康复过程分为循序渐进的四个阶段,即起始康复阶段、中间康复阶段、递进康复阶段、恢复活动阶段,各阶段采取相应的康复措施,并针对不同患者采用个体化的康复指导与训练。结果:11例13膝患者关节功能恢复良好,畸形完全矫正。膝关节屈曲活动度达110°-135°不等,行走步态良好。结论:膝关节置换术后科学的康复训练本可获得手术预期疗效,膝关节置换术后的康复原则要针对不同患者采取个体化的术后康复指导与训练。

中药接骨片对骨折愈合的影响

目的 :观察中药接骨片对骨折愈合的影响。方法 :建立兔肢体骨折动物模型。实验分对照组和治疗组 ,观察各组动物骨折术后 1h、7天、14天血液流变学指标和术后 14天骨折局部血流量的变化。结果 :治疗组与对照组比较 ,血液流变学指标和骨折局部血流量差异显著。接骨片可降低全血粘度、血浆粘度和红细胞聚集指数 ,增加骨折局部血流量。结论 :接骨片有促进骨折愈合的作用。

新型组织工程化人工骨的体外初步构建(英文)

背景:L-聚乳酸可以用于制备骨组织工程支架材料,但存在某些缺陷,能否复合聚磷酸钙纤维、Ⅰ型胶原来改善材料性能,从而找到新的组织工程化骨体外构建方法?目的:应用组织工程学技术,体外初步构建有活性的新型组织工程化人工骨。设计:体外构建细胞-材料复合体,自身对照前瞻性研究。地点和对象:本研究在解放军第三军医大学西南医院骨科和兰州铁道医学院复合材料研究所完成,对象为5例重庆市健康志愿者的髂骨骨髓。干预:培养、诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞表型分化,制备性能优越的新型支架材料,再按一定的方法体外构建细胞-材料复合体。主要观察指标:细胞碱性磷酸酶染色的阳性率、扫描电镜观察组织工程化骨的微观结构。结果:由L-聚乳酸、聚磷酸钙纤维、Ⅰ型胶原制备出新型的骨组织工程复合支架材料,孔径300～450μm,孔隙率90.1%;细胞接种前碱性磷酸酶阳性率为(55±8)%,接种后细胞可在材料内良好贴附生长,碱性磷酸酶阳性率为(52±6)%,两者差异无显著性。结论:经成骨诱导的间充质干细胞,可以与由L-聚乳酸、聚磷酸钙纤维、Ⅰ型胶原制备的支架材料复合,在体外构建出组织工程化人工骨。

人工关节松动的生物学因素:细胞因子和人工关节骨溶解

影响人工关节远期寿命的最主要原因是远期松动。而大量的证据表明松动的主要元凶是磨损颗粒引起的假体周围的骨溶解。在骨溶解过程中,细胞因子对成骨细胞、破骨细胞的发生、分化、成熟、死亡起着重要的调节作用。这些细胞因子主要包括:白介素1,肿瘤坏死因子(TN)F,前列腺素等。磨损颗粒释放入关节腔后,首先被巨噬细胞吞噬巨噬细胞不仅本身分泌因子作用于成骨细胞、破骨细胞,其本身可能也参与骨溶解过程。解决骨溶解的基本策略是减少交界组织处磨损颗粒的数目和增加骨-植入物界面的完整性。通过药物可以阻止某些细胞因子如TNF的分泌,进而达到预防无菌性松动的目的。

组织工程化半月板的研究与进展

人膝关节半月板损伤是骨科的常见病,传统的治疗只关注对损伤半月板的切除、修整和成形等,虽然能解除患者的病痛,但由于丧失了半月板的功能,关节退行性变加速。随着组织工程学的兴起,对半月板研究的深入,给半月板损伤的治疗前景带来的光明的未来,目前对半月板的研究主要集中在对半月板纤维软骨细胞的获取,体外增殖,增殖的细胞与支架的结合以及培养细胞在各种细胞因子刺激下的增殖情况。对有关半月板种子细胞、支架材料和细胞因子三个方面的问题进行综述,以求达到对半月板组织工程学研究有一个大概的轮廓,以便对半月板的研究有明确的目的性。尤其是目前一些新的进展方面的知识,更应该引起重视。通过不断的努力,以期在不久的将来为半月板损伤的治疗开辟一条全新的途径。

人工全髋关节置换术患者145例近期疗效随访分析

初步了解、评价不同髋关节疾病行人工髋关节置换术(THR)的近期疗效,对THR术前适应证的选择提供指导。方法:通过对145例首次THR患者随访取得59例(60髋)完整随访资料,随访34～69个月,平均47个月。其中诊断为新鲜股骨颈骨折16例(27.12%);股骨头无菌性坏死15例(25.42%);股骨颈陈旧性骨折8例(13.56%);骨性关节炎7例(11.86%);双侧髋关节病变9例(15.25%);股骨颈肿瘤3例(5.08%),类风湿性髋关节炎1例(1.69%)。依据诊断将患者分为4组进行回顾性分析。结果:新鲜股骨颈骨折组由术前21.6分恢复到术后82.5分(平均63.5岁);股骨头无菌性坏死组由45.7分恢复到86.3分(56.9岁);股骨颈陈旧性骨折组由37.7分恢复到91.6分(58.9岁);骨性关节炎组由35.0分恢复到81.6分(59.5岁)。术后1例(1.7%)出现重度疼痛、活动严重受限;2例(3.4%)中度疼痛,活动受限;2例(3.4%)术后6周内曾经发生脱位,手法复位后未再并发。1例(1.7%)术后3年股骨骨折,骨折前功能评定优良;其他病例均无严重并发症发生。结论:人工全髋关节置换术对治疗多种髋关节疾病均具有良好疗效,在新鲜股骨颈骨折患者组置换术后Harris评分较高,但与其他组无明显统计学差异。掌握手术适应证、选择合适的固定方法及术后功能锻炼是髋关节置换疗效的主要影响因素。

端粒酶表达延长人骨髓间充质干细胞生命周期的实验

目的:构建并鉴定人端粒酶反转录酶(humantelomerasereversetranscrip-tase,hTERT)和增强型绿色荧光蛋白EGFP)双基因共表达重组真核表(达质粒并转染人骨髓间充质干细胞(humanbonemarrowderivedmes-enchymalstemcells,hBMMSCs)。比较转染细胞与非转染细胞体外培养的生命周期。方法:实验于2002-10/2003-06在第三军医大学医院烧伤研究所完成。扩增pGRN145质粒,EcoRⅠ酶切回收hTERT片断;利用基因重组技术将hTERT连接到IRES2-EGFP载体中,XhoⅠ酶切和测序分别对重组质粒进行鉴定。用NucleofectorTM技术将构建的重组质粒转染hBMM-SCs。相同条件下体外培养转染细胞与非转染细胞,分别观察其细胞形态和生命周期。结果:成功构建了hTERT和EGFP双基因共表达重组真核表达质粒并成功转染了hBMMSCs。体外培养结果显示:非转染细胞到27PD(Populationdoubling)时出现细胞衰老、死亡、增殖停止;转染细胞到70PD时细胞形态无明显改变,细胞继续生长。结论:hTERT异位表达可以显著延长hBMMSCs体外培养生命周期,这为基因修饰hBMMSCs的单克隆筛选奠定了基础。

胶原在骨组织工程应用中的体外制备及生物相容性评价

目的:归纳、总结近年来胶原在骨组织工程各环节中应用所取得的成果,分析胶原分子结构与功能的关系,阐述胶原作为一种天然的生物材料所具备的巨大优势和存在的不足,并进一步探讨胶原在骨组织工程中应用的新途径。资料来源:应用计算机检索Medline数据库、中文科技期刊数据库(维普资讯网)、CNKI数字图书馆1995-01/2004-12相关胶原的文献。检索词“组织工程,I型胶原”,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,纳入标准:①与骨组织工程相关文献。②不排除是否为随机、盲法等论证推荐的文章。排除标准:重复研究、综述文献。资料提炼:共收集到43篇与骨组织工程相关的文章。排除其中研究内容相似的文章,以近5年内发表在较权威杂志者优先。对符合标准的25篇文献进行分析。资料综合:通过对入选的文献进行分析、整理,将胶原在骨组织工程中的应用按组织工程三要素相对应的内容进行分类和综合:支架、微载体和接种媒介。另外,I型胶原是一种极其重要的细胞信息载体,具有类似生物因子的作用。虽未对其进行归类,但对其作用机制进行了总结。结论:胶原及其产品以其优良的生物相容性、适宜的可降解性、弱的抗原性在骨组织工程中得到广泛应用,但仍存在一些固有缺陷。对胶原进行改性和复合,将有助于克服天然胶原的不足,生产出更多的、符合骨组织工程需要的新产品。

肢体缓慢牵伸延长过程中膝关节功能的变化规律(英文)

背景:有报道肢体延长后关节活动功能障碍是最常见的并发症之一,但也有学者认为在合理的技术操作及有效的功能防护下肢体延长术后关节功能障碍完全可以避免。目的:探讨兔肢体延长过程中膝关节功能变化规律,为临床工作提供实验依据。设计:随机对照实验研究。单位:一所军医大学医院的骨科。对象:实验于2001-02/2002-06在第三军医大学实验动物中心完成。30只健康成年新西兰兔,第三军医大学实验动物中心提供。随机分为延长组及延迟观察组(停止延长3个月观察)。方法:各组按延长幅度不同又分别分为延长10%,20%及40%3个亚组。采用胫骨上干骺端1mm/d速度缓慢牵伸延长术。X射线确定延长幅度及膝关节影像学变化;测定延长终止及取材时膝关节屈伸范围。主要观察指标:延长前、延长终止时及延长终止3个月时兔膝关节活动度和X射线检查结果。结果:①各组不同时相点膝关节软骨未见明显影像学异常。②延长组中延长20%时出现显著性膝关节屈伸功能障碍(P<0.05),延长40%时仅为正常膝关节活动度的44.7%左右P<0.01);延迟观察组关节功(能均有显著性改善,其中延长20%组已恢复至延长前水平,而延长40%组也较延长终止时明显改善,但仍低于延长前正常水平,为正常水平的88.5%左右(P<0.05)。结论:肢体延长过程中可能出现暂时性关节功能障?

骨组织工程研究中种子细胞、支架材料及其相互关系

近年来随着细胞生物学、分子生物学、免疫学、物理学、生物材料学和临床医学等相关学科的飞速发展,骨组织工程的研究也得到长足的发展,但目前骨组织工程中不同的种子细胞有不同的生物学特性,在骨组织工程的研究中选择不同的种子细胞,在体外构建的组织工程化活性骨的质量也不同,不同的支架材料有不同的理化特性,无论天然材料或是人工材料,各有优缺点,尚缺乏理想的支架材料,在体外构建组织工程化活性骨的过程中,种子细胞与支架材料的有效结合才能提高组织工程化活性骨的质量,目前各种构建方法及应用的支架材料在体外构建的组织工程化活性骨的质量尚不能满足要求,为在骨组织工程研究中合理选择种子细胞、支架材料以及促进种子细胞与支架黏附的方法,就其中种子细胞、支架材料及其相互关系的进展进行综述。

活性骨组织体外调节和促进成骨细胞黏附特性的作用

目的:研究兔活性骨组织在共培养条件下对同种骨髓基质细胞来源成骨细胞黏附特性的影响。方法:分别应用生理盐水和三蒸水浸泡新鲜兔骨碎粒5h后与同种骨髓基质细胞来源成骨细胞共培养作为实验组;未进行共培养的成骨细胞作为对照组。应用体视学计数法观察接种后0.5,1,2,4,8h各时间点成骨细胞贴壁情况,计量贴壁细胞数,计算出细胞贴壁率。结果:实验组的成骨细胞贴壁率均显著高于对照组(P<0.01),与三蒸水浸泡的兔活性骨组织共培养的同种成骨细胞的贴壁率最高。结论:活性骨组织在体外具有调节和促进同种成骨细胞黏附特性的作用,用三蒸水浸泡的活性骨组织的作用最强。