亚马逊利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因的克隆化与序列分析

目的 克隆亚马逊利什曼原虫 (L.ama)无鞭毛体蛋白 (am astin)的编码基因 ,并对其同源基因序列进行分析。方法 根据我们首次克隆的硕大利什曼原虫 (L.m ajor)无鞭毛体蛋白的编码基因 ,设计并合成核苷酸序列特异性引物 ,以亚马逊利什曼原虫基因组 DNA为模板 ,以多聚酶链反应 (PCR)技术扩增无鞭毛体蛋白的编码基因 DNA片段 ,并进行核苷酸序列测定以及核苷酸序列的同源性分析。结果 克隆了亚马逊利什曼原虫无鞭毛体蛋白的编码基因 ,含有单一开放读框 ,长度为 5 5 2 bp,编码的无鞭毛体蛋白由 183个氨基酸残基 (aa)组成。亚马逊利什曼原虫与硕大利什曼原虫无鞭毛体蛋白编码基因之间高度同源 ,在核苷酸与氨基酸残基序列水平上的同源性分别为 96 %和 94%。

杜氏利什曼原虫激活蛋白激酶C受体的基因克隆化与序列分析

目的 克隆杜氏利什曼原虫 (LeishmaniadonovaniLd) 1S株激活蛋白激酶C受体 (RACK ,receptorofactivatedpro teinCkinase)的编码基因 ,为应用这种编码T细胞抗原的基因进行基因疫苗的研究奠定基础。方法 体外培养杜氏利什曼原虫 1S株无鞭毛体 ,常规方法提取制备基因组DNA。以硕大利什曼原虫 (Leishmaniaamjor)的RACK基因的核苷酸序列为参照 ,设计并合成利什曼原虫RACK基因序列特异性的引物。以杜氏利什曼原虫的基因组DNA为模板 ,利用多聚酶链反应(PCR)技术 ,扩增获得了杜氏利什曼原虫RACK的全长编码基因。结果 基因序列测定结果表明 ,杜氏利什曼原虫 1S株RACK基因序列长度为 981bp ,开放读码框架由 831bp组成 ,编码产物为 2 76个氨基酸残基。获得的杜氏利什曼原虫 1S株的RACK基因与来源于硕大利什曼原虫的RACK基因序列同源性达 98% (2 6 4 / 2 6 7)。结论 本研究克隆了杜氏利什曼原虫的RACK基因 。