骨髓细胞形态检验在难治性贫血与巨幼细胞性贫血鉴别中的临床价值

目的对比分析骨髓细胞形态检验在难治性贫血与巨幼细胞性贫血鉴别中的临床价值。方法选取2013年10月~2016年10月在我院治疗的64例贫血患者作为研究对象,其中难治性贫血组占32例,巨幼细胞性贫血组占32例。两组患者均进行骨髓细胞形态的临床检验,并将检验结果进行分析对比。结果难治性贫血组的有核红细胞PAS阳性率为71.88%,红系病态占比为65.63%,粒系病态占比为75.00%,淋巴样小巨核占比为100.00%,与巨幼细胞性贫血组的3.13%、15.63%、6.25%、0.00%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。难治性贫血组的巨幼变原始红细胞直径为(18.64±4.23)μm,巨幼变早幼红细胞直径为(17.64±2.84)μm,显著短于巨幼细胞性贫血组的(23.84±6.49)μm、(20.87±4.69)μm,差异有统计学意义(P<0.05)。巨幼细胞性贫血组的红细胞分布宽度为(16.35±3.47)%,低于难治性贫血组的(28.94±7.22)%,差异有统计学意义(P<0.05)。两组的血红蛋白、血小板以及白细胞水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论骨髓细胞形态检验在难治性贫血与巨幼细胞性贫血中的临床检验价值可观,值得进一步推广。

术后镇痛对初乳sIgA的影响

目的:探讨剖宫产及剖宫产术后硬膜外镇痛对母体初乳中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量的影响。方法:顺产(NL)、剖宫产(CS)及剖宫产术后使用镇痛(CS-A)的初产妇各10例,记录分娩后首次产生初乳的时间,测定首次初乳和随后24 h、48 h初乳中sIgA含量。结果:产生首次初乳的时间顺序为CS组>CS-A组>NL组(P<0.05);初乳中sIgA值:首次初乳NL组>CS-A组>CS组(P<0.05);初乳24 h CS组<NL组、CS-A组(P<0.05);初乳48 h三组含量无差异(P>0.05)。结论:剖宫产延迟初产妇的初乳产生、减少初乳中sIgA含量,术后使用镇痛可改善这种影响。

Gardiquimod增强人γδT细胞杀伤肿瘤细胞的研究

目的研究Toll样受体7激动剂（Gardiquimod）对人γδT细胞杀伤肿瘤作用的影响。方法以异戊烯焦磷酸法扩增人外周血γδT细胞。用不同浓度的Gardiquimod处理γδT细胞和肺癌细胞A549,MTT法检测细胞增殖情况。LDH法检测Gardiquimod处理后γδT细胞对A549的杀伤活性;流式细胞术检测处理前后γδT细胞上CD107a、穿孔素和颗粒酶的表达情况。结果 Gardiquimod在5.0~0.31μg/ml浓度可明显促进γδT细胞增殖,同时抑制A549增殖。Gardiquimod处理γδT细胞后,杀伤A549能力明显增强,且CD107a、颗粒酶及穿孔素的表达显著升高,与对照组相比,有统计学差异（P〈0.05）。结论 Gardiquimod通过增高γδT细胞上的CD107a、颗粒酶及穿孔素的表达来增强其杀伤肿瘤作用。

不同抗凝剂对外周单个核细胞增殖影响比较、γδ T细胞鉴定

目的探讨3种抗凝剂保存的外周血对培养γδT细胞的增殖和杀伤功能的影响研究。方法选择获得知情同意的6例健康志愿者,其中男性3例,女性3例;年龄25~45岁。常规无菌抽取新鲜外周血15 mL。将其外周血标本分别置于肝素钠、细胞保存液(枸橼酸钠)和乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝剂中(即肝素钠组、细胞保存液组、EDTA组),并立即处理培养细胞,用CCK-8法检测3组细胞的增殖情况。在第10天,行流式细胞术检测3组γδT细胞的穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达。结果在外周血细胞培养过程中,EDTA组细胞增殖不明显;肝素钠组和细胞保存液组细胞增殖明显,在第14天细胞增殖倍数最大分别为137.00%±1.44%和99.00%±1.45%,且肝素钠组优于细胞保存液组(t=2.72,P<0.01)。流式细胞仪检测发现肝素钠组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达都明显高于细胞保存液组(t=3.871,P=0.003;t=2.744,P=0.021;t=2.261,P=0.047)。结论肝素钠和细胞保存液均可用于γδT细胞培养的血液抗凝,但肝素钠保护γδT细胞的杀伤功能明显优于细胞保存液。

survivin启动子的克隆及其在前列腺癌细胞系中的活性鉴定

目的克隆survivin启动子片段,并检测其在人前列腺癌细胞中的转录活性,为该启动子在前列腺癌靶向基因治疗中的应用提供实验依据。方法PCR方法扩增survivin基因启动子S1pro和S2pro,克隆入pGL3-Basic,分别构建重组质粒pGL3-S1pro和pGL3-S2pro,脂质体转染前列腺癌细胞和Chang liver肝细胞,检测sur-vivin启动子在细胞中的转录活性。结果survivin基因启动子在前列腺癌细胞中均具有较强活性,其中S2pro活性明显高于S1pro,达到CMV启动子活性的三分之一。结论survivin启动子在前列腺癌细胞中具有较强启动活性,有可能成为新的前列腺癌靶向性基因治疗工具。

云芝多糖增强人NK细胞杀伤功能的体外研究

目的探讨云芝多糖(PSK)对体外培养的人自然杀伤(NK)细胞杀伤功能的影响。方法采集健康成年人外周血,分离单个核细胞(PBMC),加入含白细胞介素(IL)-2的NK细胞培养液。培养第10天时加入不同质量浓度(100、75、50、25、10、5μg/m L)的PSK诱导NK细胞48 h,收集细胞检测。用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测诱导前后NK细胞穿孔素、颗粒酶B、CD107a及NKG2D受体表达(PSK诱导为实验组,同时设不加药物及无细胞的空白对照孔为对照组)。通过CCK-8法检测对红白血病细胞株K562细胞的杀伤活性:取质量浓度25μg/m L PSK诱导48 h后NK细胞,调整细胞浓度至1×10~9/L作为效应细胞;调整红白血病肿瘤细胞株K562细胞浓度至5×10~7/L,按效靶比为5∶1、10∶1、20∶1、40∶1、80∶1的比例混合培养于96孔板内,同时设单独效应细胞孔、单独靶细胞孔(实验组)和空白孔(对照组)。结果培养10 d后NK细胞纯度达到78.70%左右。经PSK诱导48 h后,NK细胞的增殖及功能具有一定浓度依赖性,PSK质量浓度在25μg/m L对NK细胞的增殖率(51.62%±3.20%)最为明显(P<0.01),之后逐渐下降。在质量浓度0~100μg/m L可以促进NK细胞的生长和增加NK细胞表面穿孔素、颗粒酶B、CD107a和NKG2D受体表达,以及增强对红白血病细胞株K562细胞的杀伤活性;尤其是当PSK质量浓度为25μg/m L时,颗粒酶B、穿孔素、NKG2D和CD107a表达为55.42%±2.34%、70.49%±1.87%、83.45%±1.77%和85.00%±2.02%,显著高于对照组(25.83%±1.31%、40.79%±1.59%、70.66%±2.39%和72.79%±2.31%)(P<0.01)。在效靶比80∶1时,实验组杀伤活性为57.63%±3.42%,高于对照组(24.78%±2.47%)(P<0.01)。结论 PSK在一定质量浓度下能促进NK细胞的生长,且增强NK细胞的杀伤功能。

剖宫产对初乳分泌型免疫球蛋白A的影响

目的探讨剖宫产对母体初乳中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量的影响。方法选择自然分娩(NL组)、剖宫产(CS组)的初产妇各10例,记录分娩后首次产生初乳的时间,测定首次产生初乳和初乳产生后24、48h初乳中sIgA含量。结果产生首次初乳的时间CS组明显晚于NL组(P<0.05);初乳中sIgA值:首次初乳、初乳产生后24hNL组均高于CS组(P均<0.05);初乳产生后48h2组含量差异不明显(P>0.05)。结论剖宫产延迟初产妇的初乳产生,减少初乳中sIgA含量。

奥曲肽联合TACE对肝癌患者肿瘤增殖和血清VEGF变化的影响

目的 研究奥曲肽联合经导管肝动脉栓塞化疗（TACE）对肝细胞肝癌患者血清血管内皮生长因子（VEGF）水平变化及疗效的影响.方法 51例肝癌患者分为2组,联合治疗组给予奥曲肽＋TACE,单纯TACE组仅给予TACE.分别于TACE前和TACE后1、7、14、21、28天检测血清AFP和VEGF水平.结果 2组TACE后血清AFP均显著降低,其中联合治疗组TACE后21、28天血清AFP水平又显著低于单纯TACE组.2组TACE后1天血清 VEGF水平较治疗前显著升高,TACE后7天则显著下降,至TACE后14天再次升高;2组TACE后21、28天血清 VEGF水平又再度下降,其中联合治疗组血清VEGF水平显著低于单纯TACE组.联合治疗组的部分缓解（PR）和总有效率（RR）显著高于单纯TACE组.结论 奥曲肽联合TACE较单纯TACE能更显著抑制肝癌增殖,其协同抗癌的部分作用可能是通过降低VEGF水平.

紫草素对人共刺激细胞杀伤胃癌细胞的影响及其机制

目的:观察紫草素作用前后对人共刺激细胞的增殖及对胃癌细胞NCI-N87、BGC-823、HGC-27杀伤活性的影响,并探讨其作用机制.方法:分离健康者外周血单个核细胞,在体外经CD3单克隆抗体(CD3 monoclon antibody,CD3 mAb)、白介素2(interleukin-2,IL-2)、干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)、白介素1α(interleukin-1α,IL-1α)、CD28 mAb、IL-15和IL-21共同诱导为人共刺激细胞,予不同浓度紫草素诱导人共刺激细胞和3株胃癌细胞24、48、72 h后,水溶性四唑盐(cell counting kit-8,CCK8)法检测人共刺激细胞增殖率,四甲基偶氮唑蓝(colorimetric methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测胃癌细胞的抑制率,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测人共刺激细胞颗粒酶B(granzyme B,GraB)、穿孔素(perforin,PFP)、CD107a、IFN-γ的表达,Western blot检测人共刺激细胞β-catenin、P-ERK1/2、P-AKT和Bcl-2的表达,乳酸脱氢酶释放法(lactate dehydrogenase,LDH)检测紫草素对人共刺激细胞杀伤3株胃癌细胞的活性影响.结果:经紫草素诱导48 h后,人共刺激细胞0.2-50μg/L浓度组增殖明显(P<0.05),6-25μg/L浓度组GraB、PFP、CD107a、IFN-γ和β-catenin、p-ERKl/2、Bcl-2、P-AKT的表达显著高于对照组(P<0.05),且对NCI-N87、BGC-823、HGC-27的杀伤活性较对照组增强(P<0.05).结论:紫草素在一定浓度范围内能够促进人共刺激细胞增殖,并增强其对胃癌细胞NCI-N87、BGC-823、HGC-27的杀伤活性,其机制可能与活化β-catenin、P-ERKl/2、B c l-2、P-A K T和P F P、G r a B、C D107a、IFN-γ的表达有关.

金丝桃苷增强人γδT细胞增殖及杀伤功能研究

目的：研究金丝桃苷对人γδT细胞增殖及功能的影响。方法：以异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞。用不同浓度的金丝桃苷处理,CCK-8法检测细胞增殖。LDH法检测金丝桃苷对前列腺癌细胞DU-145的杀伤活性。流式细胞仪检测处理前后γδT细胞上穿孔素、颗粒酶、CD107a、IFN-γ的表达情况。结果：异戊烯焦磷法能在体外成功培养出高纯度的γδT细胞。金丝桃苷在μg/ml范围内可显著促进γδT细胞增殖。金丝桃苷作用于γδT细胞后杀伤DU-145的能力明显增强,且在3.13~12.5μg/ml浓度时γδT细胞上颗粒酶、穿孔素、IFN-γ的表达显著升高,与对照组相比有统计学差异。金丝桃苷对γδT细胞上CD107a的表达无明显影响。结论：金丝桃苷通过增强γδT细胞上颗粒酶、穿孔素、IFN-γ的表达来增强其杀伤DU-145的作用。

上皮性卵巢癌患者血和组织miR-200b表达水平及其与肿瘤侵袭程度的相关性分析

目的分析上皮性卵巢癌患者血浆和卵巢组织中微小RNA-200b(miR-200b)的表达水平及其与肿瘤侵袭程度的相关性。方法回顾性选取解放军第九七医院44例经手术病理确诊的上皮性卵巢癌患者为上皮性卵巢癌组,另同期选取32例因子宫腺肌病、子宫肌瘤和其它非卵巢病变行手术切除者为对照组。通过实时荧光定量PCR法对两组患者血浆和卵巢组织中miR-200b mRNA的表达水平进行检测;将人卵巢癌细胞系SK-OV-3细胞分为空白对照组(未转染任何质粒)、阴性对照组(转染非特异序列siRNA)及实验组(转染miR-200b抑制物)。采用transwell细胞侵袭实验以观察肿瘤细胞的侵袭能力,并采用Western blot法测定基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平,并用实时荧光定量PCR法对MMP-9 mRNA相对表达量进行检测。结果上皮性卵巢癌组血浆中miR-200b mRNA的表达水平较对照组明显升高,且卵巢组织中miR-200b mRNA的表达水平较对照组亦明显升高(P<0.01)。miR-200b抑制物经人卵巢癌细胞系SK-OV-3细胞转染后,实验组miR-200b mRNA表达水平较空白对照组、阴性对照组明显下降(P<0.01)。Transwell细胞侵袭实验结果发现,miR-200b抑制物经人卵巢癌细胞系SK-OV-3细胞转染后,实验组transwell小室下层细胞数量较空白对照组、阴性对照组明显减少(P<0.01)。相比空白对照组、阴性对照组,干扰miR-200b基因表达后实验组SK-OV-3细胞中MMP-9蛋白和mRNA的表达水平均显著下降(P<0.01)。结论MiR-200b高表达于上皮性卵巢癌患者血浆和卵巢组织中,其可能通过调节MMP-9蛋白和mRNA的表达水平以诱导上皮性卵巢癌细胞的迁移和侵袭。

介绍一种体外培养细胞免疫组化检测方法

随着生物医学及临床医学的发展,免疫组化检查越来越多的被用到体外培养细胞的研究中。本文介绍一种在平底细胞培养板上直接进行的免疫组化SP法,效果满意,现介绍如下。

高压氧综合治疗对急性脑挫裂伤患者血浆一氧化氮、内皮素-1含量的影响

目的 观察高压氧（hyperbaric oxygen,HBO）综合治疗对急性脑挫裂伤患者血浆一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）含量的影响.方法 82例急性脑挫裂伤患者,按患方意愿分组成常规治疗组（常规组,42例）和HBO综合治疗组（HBO组,40例）;另选40名健康体检者作为正常对照组（对照组）.常规组给予必要的常规药物治疗,如使用脱水剂（20％甘露醇或甘油果糖）降低颅内压、糖皮质激素、亚低温疗法、神经细胞营养剂、止痛、止血、抗感染、维持水电解质平衡、防治外伤性癫痫等;HBO组在常规治疗的基础上加用HBO治疗2个疗程.常规组和HBO组于伤后8h和1、2、3、5、7、10、14、17、21d共10个时间点抽取静脉血,分别用硝酸还原酶法、放免分析法测定血浆NO、ET-1含量;对照组于体检时抽1次血,作相应指标检测.结果 常规组,伤后各时间点血浆ET-1平均含量[最高和最低分别为（156.36±35.20）、（78.42 ±23.02） ng/L]明显高于对照组[（40.95±1 1.89） ng/L],差异均有统计学意义（P＜0.01）,其中,8h和14d时出现2个高峰,分别达到（116.43 ±36.55）、（156.36 ±35.20） ng/L;伤后各时间点NO含量[最高和最低分别为（49.22 ±2.65）、（34.54 ±3.82） μmol/L]明显低于对照组[（60.59±3.38） μmol/L],差异均有统计学意义（P＜0.01）.HBO组,治疗1d后ET-1平均含量开始下降,1～14 d时[最高和最低分别为（58.92 ±13.50）、（51.95±14.32） ng/L]与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）;17、21 d时接近对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）.但HBO组各时间点ET-1平均含量均明显低于常规组,差异均有统计学意义（P＜0.01）;各时间点NO平均含量[最高和最低分别为（61.28 ±3.46）、（42.26 ±2.46） μmol/L]均高于常规组,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.结论 急性创伤性脑挫裂伤患者血浆ET-1的升高及NO的降低贯穿于脑损伤变化的全过程;HBO治疗可显著改变急性脑挫裂伤患者血浆ET-1和NO含量,减轻脑组织损伤,促进神经功能恢复,从而提高临床疗效.

高压氧联合辛伐他汀治疗脑出血的效果观察

目的 观察高压氧（hyperbaric oxygen,HBO）联合辛伐他汀治疗对脑出血患者血清白细胞介素-1β（IL-1β）含量的影响及其疗效.方法 将92例患者按患者意愿并在不违背医学伦理学的前提下分成3组,HBO组30例,辛伐他汀组32例,HBO＋辛伐他汀组30例,3组患者在常规治疗的基础上,HBO组再用HBO治疗,辛伐他汀组再用辛伐他汀,HBO＋辛伐他汀组2种方法联合使用,分别于治疗前、治疗15、30 d检测血清IL-1β含量,同时记录各阶段神经功能缺损评分和日常活动Barthel指数（BI）评分.另选31名健康体检者作为正常对照组.结果 脑出血患者血清IL-1β较正常值明显升高（P＜0.05）,HBO组、辛伐他汀组、HBO＋辛伐他汀组治疗后血清IL-1β均下降,HBO＋辛伐他汀组下降更为明显[治疗前（73.56 ±22.40） μg/L,治疗15 d（42.36±16.28） μg/L,治疗30 d（23.25 ±6.62） μg/L];治疗30 d,组间[HBO组（28.32±6.78） μg/L,辛伐他汀组（30.46±5.27） μg/L]比较差异有统计学意义（P＜0.05）;HBO组、辛伐他汀组、HBO＋辛伐他汀组神经功能缺损评分较治疗前均下降,HBO＋辛伐他汀组下降明显,组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）;3组BI评分比较,HBO＋辛伐他汀组上升明显,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 HBO＋辛伐他汀联合治疗脑出血有协同和增强作用,能显著降低脑出血患者血清中IL-1β含量,使神经功能及日常生活活动能力恢复明显.