结直肠癌化疗联合自体多种免疫细胞治疗疗效观察

目的比较结直肠癌患者自体多种免疫细胞联合化疗与单纯化疗后细胞免疫功能变化和生存期差异。方法83例结直肠癌患者分为化疗组43例，化疗联合自身多种免疫细胞治疗组（联合组）40例；用血细胞分离机采集患者自身外周血单个核细胞（PBMC），将PBMC按常规方法分别诱导培养CD3AK细胞、CIK细胞、树突状细胞（DC）、7gT细胞和NK细胞；用流式细胞仪检测治疗前后患者外周血的CD3（＋）、CD4（＋）、CD8（＋）、CD19（＋）、CD16（＋）CD56（＋）、CD4／CD8和3,gT细胞比值及PBMC中穿孑L素、颗粒酶B和CD107a阳性表达率。2组患者化疗方案都采用草酸铂＋亚叶酸钙＋5-氟脲嘧啶静脉输注；联合组在化疗基础上接受免疫细胞治疗。结果联合组治疗后的免疫细胞亚群比值和绝对值显著高于化疗组。联合组与化疗组Karnofsky评分差异有统计学意义。联合组患者治疗后PBMC的穿孔素、颗粒酶B及CDl07a均高于治疗前，并且治疗后这3种指标数值均皿著高于化疗组。联合组患者1午、2年和5年生存率分别为70．o％、20．0％和10．0％，高于化疗组（分别为23．2％、7．0％和4．6％）；其中Ⅱ期、Ⅲ期患者的1年、2年和5年生存率及Ⅳ期患者的1午生存率2组间比较差异有统计学意义，而Ⅳ期患者的2年、5年生存率2组间比较差异无统计学意义。结论化疗联合自身综合性免疫细胞治疗进展期结直肠癌能提高患者的免疫功能，延长生存期。

PACAP对创伤性脑损伤大鼠CD4＋／CD8＋T细胞水平的影响

目的观察垂体腺苷酸环化酶激活肽（pituitaryadenylatecyclaseactivitingpolypeptide，PACAP）对大鼠刨伤性脑损伤（traumaticbraininjury，TBI）的影响及对血液和脾脏CD4＋、CD8＋T细胞数量的影响。方法所有实验均在在江苏省麻醉学重点实验室内完成。将雄性sD大鼠随机（随机数字法）分为假手术组（n=6）、生理盐水＋TBI组（rt=6）、PACAP＋TBI组（n=6），采用大鼠创伤性脑损伤模型，于创伤前20min侧脑室微量注射PACAP1μg／5μl，创伤后24h取材，采用HE染色方法观察脑组织损伤程度，采用流式细胞术检测各组大鼠血液及脾脏中CD4＋、CD8＋T细胞的数量。实验结果采用完全随机设计方差分析法。结果与假手术组比较，TBI大鼠创伤周围皮层神经元水肿、坏死，海马神经元排列紊乱，血液和脾脏CD4＋T细胞的数量减少（P=0．000，P=0．005），CD8＋T细胞的数量增加（P=0．01）；侧脑室内微量注射PACAP后，能明显减轻TBI大鼠皮层和海马的神经元损伤，增加血液和脾脏CD4＋T细胞的数量（P=0．019，P=0．839），降低CD8＋T细胞的数量。结论侧脑室微量注射PACAP能减轻大鼠创伤性脑损伤，可能与其对T细胞影响有关。

金丝桃苷增强共刺激细胞杀伤胃癌细胞MKN-45的研究

目的探讨金丝桃苷对共刺激细胞杀伤胃癌细胞MKN-45的影响及可能机制。方法健康者外周血单个核细胞（PBMC）在体外诱导为共刺激细胞，常规传代培养胃癌细胞MKN45。给予不同浓度金丝桃苷诱导24h、48h、72h，CCK8法和MTF法分别检测人共刺激细胞和胃癌细胞MKN-45增殖情况；诱导72h，乳酸脱氢酶（LDH）释放法测定共刺激细胞杀伤胃癌细胞株MKN-45的活性；流式细胞术（FCM）检测共刺激细胞穿孔素、颗粒酶B（GraB）、CDl07a、IFN－γ的表达变化；Westernblot检测共刺激细胞信号调节蛋白（Bcl-2、p-AKT、p-ERK1／2、β-catenin）的表达变化。结果培养10天共刺激细胞表达率达到38．85％；低浓度金丝桃苷促进共刺激细胞生长并呈时间依赖性，其中金丝桃苷浓度为0．8μg/mL诱导72h增殖率达到（43．73±2．99）％，与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）；浓度〉25μg／mL对MKN-45有剂量依赖性抑制作用，抑制率高达57．3％，与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0．05）；金丝桃苷诱导72h，浓度在0．8μg／mL时对MKN-45的杀伤活性增强作用最大，杀伤活性为（48．13±2．02）％，共刺激细胞穿孔素、曲aB、CDl07a和IFN-γ的表达明显增加，表达率分别为（85．74±2．89）％、（87．56±3．23）％、（89．66±2．42）％和（82．29±3．95）％，信号调节蛋白Bcl-2、p-AKT、p-ERKl／2、β-catenin的表达也不同程度的增加，灰度值计算表达率分别为（71．86±1．16）％、（14．62±0．84）％、（17．44±1．51）％、（15．12±1．55）％，与对照组比较均具有统计学意义（P〈0．05）。结论金丝桃苷在一定浓度范围内能促进共刺激细胞增殖、抑制胃癌细胞MKN-45的生长，并增强共刺激细胞对胃癌细胞MKN45的杀伤活性，其机制可能与活化Bcl-2、p-AKT、p-ERKl／2、β-eatenin，上调共刺激细胞穿孔素、Grab、CDl07a、IFN-γ的表达有关。