微小RNA-3677靶向调控SOX6表达及对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-3677(miR-3677)对SRY盒转录因子6(SOX6)表达的靶向调控作用及其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用癌症多组学和临床数据库LinkedOmics分析TCGA数据库中has-miR-3677表达与肝癌临床病理特征和预后的关系。脂质体法向肝癌细胞SMMC7721转染miR-3677抑制剂(Inhibitor组)和阴性对照(NC组),并以未转染的细胞为空白对照,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测miR-3677水平,MTT法和AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术分别检测增殖和凋亡情况,双荧光素酶报告基因实验验证miR-3677对SOX6的靶向调控作用,QPCR和Western blotting检测SOX6、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)水平。结果miR-3677表达与临床分期和T分期有关,其中miR-3677表达随分期的升高而呈上升趋势(P<0.05);预后方面,miR-3677低表达者的总生存期较高表达者延长(P<0.05)。Inhibitor组的miR-3677水平为0.374±0.038,低于空白对照组的1.039±0.042和NC组的1.107±0.316(P<0.05);与空白对照组和NC组相比,Inhibitor组转染24~48 h后的细胞增殖活力降低(P<0.05);Inhibitor组的凋亡率为(11.241±1.235)%,高于空白对照组的(3.578±0.598)%和NC组的(4.216±0.823)%,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-3677模拟物可降低SOX6野生型3’端非翻译区的荧光素酶活性,而对突变型的荧光素酶活性无影响。与空白对照组和NC组比较,Inhibitor组SOX6、caspase-3的mRNA和蛋白水平均升高,而Bcl-2的mRNA和蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);空白对照组和NC组上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论下调miR-3677可抑制SMMC7721细胞的增殖能力并诱导凋亡,可能通过靶向SOX6来发挥促癌作用,有望成为肝癌防治的潜在靶点。