大鼠胰腺缺血再灌注损伤微循环改变的实验

目的:探讨胰腺缺血再灌注后微循环的改变与胰腺损伤的关系。方法:实验于2002-12/2004-01在徐州医学院神经生物学研究中心实验室、解放军第九十七医院实验科、徐州市心血管研究所实验室完成。24只大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注1h组,缺血再灌注6h组,每组8只。测定血淀粉酶,脂肪酶了解胰腺外分泌功能;光镜、电镜观察胰腺组织结构改变;微循环显微镜检测胰腺微循环的血管直径、血流速度、血流状态;测定胰腺组织干/湿比,了解组织含水量的变化。结果:24只大鼠全部进入结果分析。①胰腺缺血再灌注后血清淀粉酶、脂肪酶含量:缺血再灌注1h组淀粉酶和脂肪酶含量高于假手术组[(26.67±9.99)μkat/L,(5.24±1.82)μkat/L,(14.53±3.98)μkat/L,(2.83±1.64)μkat/L,(t=2.60,3.49,P<0.05)],缺血再灌注6h时明显高于假手术组[(41.59±10.95)μkat/L,(10.66±2.61)μkat/L,(t=7.35,7.54,P<0.01)]。淀粉酶、脂肪酶随着再灌注时间延长而增加。②胰腺缺血再灌注后形态学改变:缺血再灌注1h组光镜下呈现急性水肿性胰腺炎表现,缺血再灌注6h组损伤加重,出现出血、坏死。③胰腺缺血再灌注后微循环的改变:缺血再灌注1h组和缺血再灌注6h组的微动脉口径小于假手术组[(18±6)μm,(20±9)μm,(22±8)μm,(t=2.42～3.85,P<0.05)]。缺血再灌注1h组和缺血再灌注6h组的微静脉口径均较假手术组扩张[(30±8)μm,(35±15)μm,(25±10)μm,(t=2.42～3.85,P<0.05)],缺血再灌注6h组较缺血再灌注1h组微静脉口径明显扩张(t=3.69,P<0.05)。缺血再灌注1h组与缺血再灌注6h组的血流速度均较假手术组减缓[(0.44±0.12)mm/s,(0.21±0.04)mm/s,(0.56±0.03)mm/s,(t=2.42～4.19,P<0.05～0.01)],并且缺血再灌注6h组较缺血再灌注1h组血流速度显著减缓(t=5.19,P<0.01)。④胰腺再灌注后胰腺组织干湿比的改变:缺血再灌注1h组胰腺干湿比明显少于假手术组[(26.5±2.3)%,(30.1±2.1)%,(t=3.23,P<0.05)],缺血再灌注6h组胰腺干湿显著减少[(20.4±2.2)%,(t=8.23,P<0.01)]。结论:胰腺缺血再灌注1h时即发生微循环障碍及组织损伤,再灌注6h微循环障碍进一步恶化,胰腺缺血再灌注后,胰腺组织损伤与微循环紊乱的发展呈现一致性。

β-七叶皂甙钠对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的保护作用

目的:鉴于脏器功能障碍直接影响疾病的预后的生活质量,其损伤后的再修复尤为重要。因此,探讨β-七叶皂甙钠(sodiumaescinate,SA)对胰腺缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion,IR)的保护作用及可能机制。方法:实验于2002-12/2004-01在徐州医学院神经生物学研究中心实验室和解放军第九十七医院实验科完成。40只大鼠随机分为5组:假手术组,IR1h组,IR6h组,SA+IR1h组,SA+IR6h组。测定血淀粉酶,脂肪酶含量;光镜观察胰腺组织结构改变;检测胰腺组织丙二醛含量和超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活性;测定胰腺组织干湿比。结果:①SA+IR1h组淀粉酶、脂肪酶含量较IR1h组显著降低(P<0.05),SA+IR6h组较IR6h组降低更明显(P<0.01)。②与IR1h组、IR6h组相比,同期SA+IR1h组、SA+IR6h组组织病理学评分降低。③IR组与同期SA+IR组相比,SOD活性差异无显著性意义(P>0.05)。SA+IR1h组较IR1h组丙二醛含量显著降低(P<0.05),SA+IR6h组较IR6h组丙二醛含量降低更明显(P<0.01)。④SA+IR1h组与IR1h组间胰腺干湿比减少差异无显著性意义。SA+IR6h组较IR6h组胰腺干湿比减少显著改善(P<0.05)。结论:SA对胰腺IR损伤有保护作用,其保护作用可能与其抑制IR后胰腺氧自由基的形成和减轻组织水肿有关。

大鼠肾缺血再灌注过程中脂质过氧化损伤的实验研究

目的 探讨急性肾缺血再灌注损伤的机制。方法 采用大鼠双侧肾蒂夹闭的肾缺血再灌注损伤模型 ,测定肾组织丙二醛 (MDA)水平和超氧化物歧化酶 (SOD)的活性 ,光镜下观察肾组织病理变化。结果 肾缺血再灌注后肾组织中MDA含量呈进行性增高 ,而单纯肾缺血MDA无明显变化 ;单纯肾缺血和缺血后再灌注肾组织中SOD活性呈进行性降低 ;缺血和再灌注组均有不同程度肾损害。

银杏叶提取物对肾缺血再灌注损伤肾小管细胞凋亡调控基因表达的影响

目的观察银杏提取物(EGb)对大鼠肾缺血再灌注后肾小管细胞凋亡调控基因bcl-2和bax表达的影响,探讨EGb肾保护作用的分子生物学机制。方法用动脉夹夹闭大鼠双侧肾蒂45 min再灌注24 h方法制成急性肾缺血再灌注损伤模型。采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的DNA原位末端标记技术检测细胞凋亡的情况。免疫组化检测Bcl-2、Bax表达。结果缺血再灌注组较假手术组肾小管凋亡细胞数明显增多,Bcl-2、Bax表达均增强,Bax/Bcl-2比值增高;银杏叶提取物处理组较缺血再灌注组凋亡细胞数明显减少,Bcl-2表达进一步增强,而Bax表达减弱,Bax/Bcl-2降低。结论银杏叶提取物可能通过影响Bcl-2、Bax表达,抑制细胞凋亡,从而发挥对缺血再灌注损伤肾脏的保护作用。

磷脂酶A_2及溴苯酰基溴化物在大鼠急性坏死性胰腺炎中的作用

为探讨磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）及其抑制剂溴苯酰基溴化物（ＢＰＢ）在急性坏死性胰腺炎（ＡＮＰ）中的作用机理，采用切开十二指肠行胆胰管插管注入牛磺胆酸钠的方法诱导大鼠ＡＮＰ，检测胰腺微循环血流量变化、血ＰＬＡ２、血小板激活因子（ＰＡＦ）和血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）水平。进行基于光镜观察的组织学评分和腺泡细胞的超微病理检查。结果显示：急性胰腺炎（ＡＰ）组在诱导后胰腺血流立即剧烈下降，此后的３小时内轻度回升，３小时后持续下降至实验结束。随着病理改变持续加重，ＡＰ组血ＰＬＡ２，ＰＡＦ和ＴＸＢ２水平持续升高。超微结构所见以粗面内质网扩张、酶原颗粒增加为特征。ＢＰＢ治疗组的胰腺血流下降轻于ＡＰ组，与ＡＰ组相比较，其组织学评分表示的病理损害显著减轻，腺泡细胞粗面内质网扩张较轻，酶原颗粒较少。ＢＰＢ组的血ＰＬＡ２，ＰＡＦ和ＴＸＢ２水平显著低于ＡＰ组。结果表明：ＰＬＡ２在ＡＮＰ的发病中起重要作用。应用ＰＬＡ２抑制剂可能是治疗ＡＮＰ的一个有效的新方法。

大鼠移植胰腺再灌注后细胞凋亡及Bax和Bcl-2的表达

目的:观察胰腺移植再灌注后胰腺细胞凋亡发生的过程,并通过检测bax和bcl-2基因的表达,认识胰腺细胞凋亡的相关调控基因。方法:实验于2002-09/2004-06在解放军第九十七医院中心实验室完成。①60只SD大鼠随机分成7组,假手术组5只,冷缺血2h组5只,冷缺血2h再灌注1,3,6,9,12h组(再灌注组每组受体5只,供体5只)。②取移植胰腺标本切片,苏木精-伊红染色后光镜及电镜观察各组的胰腺组织的病理变化。③通过流式细胞仪检测各组胰腺细胞的凋亡百分比。④采用免疫组织化学方法检测各组胰腺组织中Bax,Bcl-2蛋白的表达。采用Sinicrope等综合计分法并加以改进进行半定量分析。每例至少选择5个高倍视野记数1000个细胞中的阳性细胞个数进行阳性细胞数计分,阳性细胞数<5%为阴性,6%～25%为1分,26%～50%为2分,51%～74%为3分,>75%为4分。着色强度计分则是以多数阳性细胞呈现的染色特征计分:淡黄色为1分,黄色为2分,棕黄色为3分。阳性细胞数计分+着色强度计分即为综合得分,二三分为弱阳性(+),四五分为中等阳性(),六七分为强阳性()。结果:60只大鼠全部进入结果分析。①胰腺移植后早期即可观察到细胞凋亡的典型改变。②胰腺冷缺血再灌注后发生凋亡的高峰期为再灌注后3h,再灌注6h组较再灌注3h细胞凋亡有所减少犤凋亡率分别为(12.61±2.94)%,(6.35±2.19)%,P<0.01犦,再灌注9h组及再灌注12h组细胞凋亡进一步减少犤凋亡率分别为(3.67±1.44)%,(3.33±1.03)%,P<0.05犦。③假手术组与冷缺血2h组均未见Bax蛋白表达,再灌注1h组Bax(),而未见Bcl-2蛋白表达;至再灌注3h组Bax表达增强为Bax(),以后各组表达有所下降。Bcl-2蛋白在假手术组、冷缺血2h组及再灌注1h组均未见表达,再灌注3h组及以后各组表达为(+)。结论:细胞凋亡是胰腺移植后的早期事件,移植胰腺冷缺血再灌注后的凋亡高峰发生在再灌注后3h;移植胰腺的细胞凋亡是受基因调控的,Bax基因可能促进了胰腺细胞的凋亡,而bcl-2基因可能抑制细胞凋亡。

非胰腺手术后胰腺假性囊肿的治疗

目的探讨非胰腺手术后胰腺假性囊肿的治疗方法。方法对近11年来治疗的28例非胰腺手术后胰腺假性囊肿进行回顾性临床分析。结果保守治疗4例。B超引导下经皮多次穿刺10例(其中穿刺后置管外引流3例)。手术行外引流6例,内引流8例。1例外引流无效后,改行内引流。28例均痊愈出院。结论手术后胰腺假性囊肿应采用个体化的治疗原则,早期应采取保守治疗、穿刺抽液或外引流,内引流可作为治疗的最后选择。