树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对原发性小肠恶性黑色素瘤生长及肝转移的抑制作用

目的 探讨树突状细胞（DC）与同源细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）共培养后对小肠恶性黑色素瘤生长和肝转移的抑制作用.方法 提取健康献血者、小肠恶性黑色素瘤患者外周血单核细胞,常规诱导出DC细胞与CIK细胞后,按照1∶5比例共培养14 d获得DC-CIK细胞.取原发性小肠恶性黑色素瘤手术切除的肝转移灶新鲜瘤组织块植入裸鼠小肠黏膜层,建立小肠恶性黑色素瘤肝转移模型.将56只裸鼠原位移植人小肠恶性黑色素瘤72 h后,分成7组,每组8只：（1）对照组;（2）丝裂霉素组;（3）健康人CIK细胞组;（4）健康人DC-CIK细胞组;（5）小肠恶性黑色素瘤自体CIK细胞组;（6）小肠恶性黑色素瘤自体DC-CIK细胞组;（7）小肠恶性黑色素瘤自体DC-CIK细胞＋丝裂霉素组.对照组裸鼠注射生理盐水,其余各组裸鼠尾静脉注射相应的效应细胞,每只0.3 ml,细胞数为6×107个,丝裂霉素注射剂量为400 μg,每天1次,连续28 d.停药后72 h处死动物,切取肿瘤称质量,并检查肿瘤生长及肝转移情况.多组比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法,率的比较采用x2检验.结果 成功建立小肠恶性黑色素瘤肝转移模型（HSIM-0603）.对照组、丝裂霉素组、健康人CIK细胞组和DC-CIK细胞组、小肠恶性黑色素瘤患者自体CIK细胞组和DC-CIK细胞组及DC-CIK细胞＋丝裂霉素组的肿瘤质量分别为（1.18±0.17）、（0.71±0.06）、（0.68±0.15）、（0.43±0.08）、（0.67±0.07）、（0.37±0.08）、（0.20±0.05）g;抑瘤率分别为0、39.82%、42.37%、63.56%、43.22%、68.64%、83.05%;肝转移分别为8、8、5、4、4、3、2只,各组比较,差异有统计学意义（F=152.300,x2=200.538,94.325,P＜0.05）.结论 小肠恶性黑色素瘤肝转移模型可用于小肠恶性黑色素瘤的发病机制、侵袭、转移及治疗的研究,DC-CIK细胞治疗能抑制小肠恶性黑色素瘤的生长和肝转移.

人原发性小肠恶性黑色素瘤裸鼠肺转移模型的建立

目的建立原发性小肠恶性黑色素瘤肺转移动物模型。方法采用人原发性小肠恶性黑色素瘤肺转移瘤的新鲜瘤组织块植入裸鼠小肠黏膜层内，当裸鼠体内形成肺转移瘤后重复筛选4次，再将肺转移瘤植入另一只裸鼠小肠黏膜行鼠间连续传代。观察原位移植成瘤率和转移率，进行形态学、染色体核型和流式细胞仪分析。结果建成的人原发性小肠恶性黑色素瘤裸鼠肺转移模型命名为HSIM-0601，瘤细胞胞质内可见大量黑色素颗粒及黑色素复合体，S-100、HMB-45呈阳性表达。染色体数57～59条；流式细胞DNA指数值1．49，均为异倍体。HSIM-0601已传至26代，共移植裸鼠173只，成瘤率和液氮冻存复苏成活率均为100％。肺转移率为100％（173／173），淋巴结转移率为61．3％（106／173）。结论首次成功地建立了人原发性小肠恶性黑色素瘤裸鼠原位移植肺转移模型HSIM-0601。完整地模拟了人小肠恶性黑色素瘤患者的自然临床病理过程，为研究原发性小肠恶性黑色素瘤肺转移机制和抗转移治疗提供了理想的动物模型。