miR-4295靶向结合PTEN促进EMT和鼻咽癌细胞的侵袭

目的 探讨miR-4295在鼻咽癌细胞侵袭、转移过程中的作用及相关的分子机制.方法 首先通过PCR检测鼻咽癌细胞系中miR-4295的表达,通过用重组逆转录病毒介导建立稳定高表达miR-4295的鼻咽癌细胞株5-8F/miR-4295.分别应用Transwell侵袭实验、划痕损伤修复实验及三维培养实验检测过表达miR-4295后细胞株5-8F的迁移、侵袭能力;WB和QPCR方法检测E-Cadherin、Fibronectin、Vimentin在5-8F/miR-4295及5-8F/vector细胞中蛋白及miRNA的表达水平;荧光素酶活性检测miR-4295与PTEN靶向结合情况.结果 miR-4295在鼻咽癌细胞系中高表达,通过Transwell侵袭实验、划痕损伤修复实验、三维培养实验均显示过表达miR-4295后5-8F细胞的体外迁移及侵袭能力明显增强;WB及QPCR结果显示：过表达miR-4295后,5-8F细胞上皮细胞分子标志物E-Cadherin表达下调,间质细胞分子标志物Fibronectin、Vimentin表达上调;过表达miR-4295后PTEN蛋白表达抑制荧光素酶活性降低.结论 miR-4295靶向调节PTEN蛋白促进上皮细胞间质化的过程增强鼻咽癌细胞的转移及侵袭.

MiR-143通过负调控GLI3基因来抑制鼻咽癌细胞的迁移

目的探讨miR-143在鼻咽癌细胞迁移中的生物学功能及可能的分子机制。方法应用生物信息软件预测miR-143靶基因,分别将预测靶基因GLI3的3'UTR及其突变体构建到荧光素酶载体psiCHECK-2骨架中。通过荧光素酶报告基因检测分析miR-143对靶基因GLI3的调控作用,并检测转染miR-143 mimics、inhibitor和siGLI3后鼻咽癌5-8F细胞miR-143和GLI3的表达水平及迁移能力的变化。结果生物信息学预测Hh信号通路转录基因GLI3可能是miR-143的靶基因;双荧光素酶报告基因分析表明miR-143能够作用于GLI3的3'UTR;Western Blot和qRT-PCR结果进一步证明5-8F细胞中miR-143与GLI3的表达呈负相关,并影响5-8F细胞的迁移能力。结论 MiR-143可通过负调控靶基因GLI3抑制鼻咽癌细胞的迁移,为进一步研究miR-143及Hh信号通路在鼻咽癌中的作用机制提供参考价值。

miR-143在鼻咽癌细胞系中的表达及其对高转移细胞株5-8F的影响

目的检测鼻咽癌细胞系中miR-143表达情况,建立稳定高表达miR-143的鼻咽癌细胞系,为研究其在鼻咽癌的发生和发展中的作用机制提供可靠的细胞模型。方法采用QPCR方法检测鼻咽癌细胞系CEN1、CNE2、HONE1、5-8F、6-10B及人永生化鼻咽上皮细胞NP69中miR-143的表达水平。构建重组逆转录病毒质粒pMSCV-puro-miR-143,包装逆转录病毒pMSCV-miR-143和pMSCV-Vector并感染鼻咽癌细胞,建立稳定高表达miR-143的鼻咽癌细胞系,并应用细胞黏附实验检测过表达mir-143后,鼻咽癌细胞对胞外基质的黏附性。结果鼻咽癌细胞系中miR-143的表达水平均低于对照组NP69细胞,其中高转移潜能细胞株5-8F的表达量最低,仅为对照组的3.03%,成瘤但不转移细胞株6-10B表达量最高,为对照组的63.59%。实时荧光定量PCR显示筛选后第7代细胞miR-143的表达水平比对照组高出达1080倍(P<0.05)。细胞黏附实验结果显示,过表达mir-143可降低5-8F细胞对胞外基质的黏附性。结论 miR-143在鼻咽癌细胞系中表达失常,其作用可能与鼻咽癌细胞的侵袭和转移相关;成功建立了稳定高表达miR-143的鼻咽癌细胞系,并初步确定miR-143能抑制5-8F细胞的黏附能力,为探索miR-143在鼻咽癌的发生和发展中的作用机制奠定了实验基础。

加味四君固本汤与Iressa联合用药对裸鼠移植瘤的影响

目的:研究加味四君固本汤对皮下成瘤裸鼠的影响。方法:使用人非小细胞肺癌A549细胞在裸鼠皮下接种成瘤,随机分成对照组,易瑞沙(Iressa)治疗组(100 mg·kg-1·d-1),中药治疗组(加味四君固本汤0.10 g·kg-1·d-1),加味四君固本汤和Iressa联合治疗组,观察肿瘤生长情况及裸鼠生存质量,并采用免疫印记实验(Western blot)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组肿瘤中上皮生长因子受体(EGFR)蛋白质与mRNA的表达情况。结果:西药组、中药组和联合用药组的肿瘤抑制率分别为55.75%、35.22%和82.3%,与对照组比较差异显著(P<0.01),联合用药组与单独用药组差异具有统计学意义(P<0.01)。观察治疗期间裸鼠的运动量、饮食、体重等指标,显示联合用药组裸鼠的生存质量优于西药组。Western Blot与RT-PCR结果显示联合用药组的肿瘤组织中增殖相关的指标明显低于其他3组。结论:加味四君固本汤与Iressa联合用药能更好地抑制肿瘤生长,对肿瘤的治疗效果明显优于Iressa组。加味四君固本汤能提高裸鼠治疗过程中的生存质量。