肿瘤坏死因子-α对人牙周膜干细胞的增殖及成骨分化的影响

目的:观察不同浓度肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)的增殖及成骨分化的影响。方法:有限稀释法分离培养hPDLSCs,流式细胞仪检测细胞表面标志物表达后,分别用0.1、1、10、50 ng/mL的TNF-α作用于hPDLSCs,CCK-8法检测细胞的增殖活性。取第3代hPDLSCs,并分别在0、0.1、10 ng/mL TNF-α的作用下进行成骨诱导7、21 d,用Real-time PCR检测hPDLSCs中Runx2、Osterix、OPN及BSP的表达量,对成骨诱导21 d后的各组细胞进行茜素红染色,观察钙化结节形成情况。结果:培养的hPDLSCs高表达CD105(96.6%)、CD90(97.1%),低表达CD34(1.89%)、CD45(1.65%)。0.1、1、10 ng/mL TNF-α作用于hPDLSCs 1、2、3 d,细胞增殖活性与对照组相比均无显著差异(P<0.05),而50 ng/mL TNF-α作用于hPDLSCs 1~3 d时的细胞增殖活性均降低(P<0.05)。成骨诱导7 d后,0.1 ng/mL TNF-α组hPDLSCs中Runx2及Osterix的表达水平均高于对照组(P<0.05),而10 ng/mL TNF-α组的Runx2、Osterix表达量均低于对照组(P<0.05)。成骨诱导21 d后,0.1 ng/mL TNF-α组中的Runx2、Osterix、OPN、BSP表达量均高于对照组(P<0.05),而10 ng/mL TNF-α组中各成骨基因的表达量均较对照组降低(P<0.05);0.1 ng/mL TNF-α组的钙结节形成量多于对照组,而10 ng/mL TNF-α组的钙结节形成量少于对照组。结论:高浓度TNF-α可抑制hPDLSCs增殖,低剂量TNF-α可促进hPDLSCs向成骨细胞分化。