甘草酸和泼尼松对慢性马兜铃酸肾病大鼠肾脏组织病理及超微病理改变的影响

目的通过建立大鼠慢性马兜铃酸肾病(AAN)动物模型,观察甘草酸、泼尼松对慢性AAN肾损害的干预作用。方法雄性Wistar大鼠98只,SPF级,随机分为4组:正常对照组20只,模型组、甘草酸组、泼尼松组每组26只;实验组按马兜铃酸(AA)20 mg／(kg·d)关木通浸膏灌胃,正常对照组灌胃等体积饮用水;2 h后按分组灌胃给药:甘草酸25 mg／(kg·d),泼尼松3．15 mg／(kg·d);正常对照组、模型组灌胃饮用水。各组每周测量体重,于第4、8、12周测定相关肾功能指标;取肾组织进行形态学检查。结果随着喂饲时间延长,正常对照组大鼠体重稳定性增长,而马兜铃酸给药各组体重增长缓慢。马兜铃酸用药后各组血肌酐／体重水平明显增高,甘草酸组、泼尼松组血肌酐／体重水平显著降低。肾脏组织形态学改变:甘草酸、泼尼松治疗组形态结构损害程度较模型组(纤维化程度约30％)轻微,纤维化程度约15%-20%。电镜结果:马兜铃酸可引起肾小管上皮细胞损伤、变性、坏死,线粒体等细胞器损伤明显,有细胞核变异。甘草酸、泼尼松组以小管损伤为主,线粒体等细胞器正常,细胞核变异少见,间质胶原纤维较少。结论甘草酸、泼尼松对大鼠慢性马兜铃酸肾损害有一定的保护作用,能降低血肌酐,改善肾功能,在一定程度上减轻马兜铃酸造成的肾组织形态学改变,并减少肾间质纤维化程度。

肌肉特异性糖皮质激素受体基因敲除对慢性肾脏病骨骼肌消耗的影响

目的:内源性糖皮质激素水平异常升高可引起和加重慢性肾脏病(CKD)引起的骨骼肌消耗。本研究观察肌肉特异性糖皮质激素受体基因敲除(MGRKO)对CKD状态下小鼠骨骼肌消耗的影响。方法:采用5/6肾切除制作CKD小鼠模型,以假手术组(CTL组)为对照组。组织病理学检测胫骨前肌横截面积并计算肌纤维面积分布图;荧光定量PCR检测肌肉萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin-1)和肌环指蛋白1(MuRF-1)mRNA水平;Western Blot检测其蛋白表达及Akt/FoxO1信号通路;ELISA方法检测血清皮质酮水平。结果:造模1月后,lox/lox-CKD和MGRKO-CKD小鼠的血尿素氮和皮质酮水平均明显升高;lox/lox-CKD的体重明显下降胫骨前肌湿重明显降低。而MGRKO-CTL和MGRKO-CKD两组间体重无明显差异,胫骨前肌湿重仅轻微降低。组织学观察到lox/lox-CKD胫骨前肌肌纤维明显萎缩,横截面积减少,肌纤维面积分布图明显左移。而MGRKO-CKD组的体重下降不明显,胫骨前肌仍较饱满,肌肉湿重略降低,横截面积略降低,与MGRKO-CTL组比较,肌纤维面积分布图仅轻度左移。荧光定量PCR和Western Blot结果显示lox/lox-CKD组的腓肠肌Atrogin-1和MuRF-1的mRNA和蛋白表达水平显著升高,同时其Akt磷酸化水平(pAkt/Akt)较lox/lox-CTL组显著降低3.1倍,FoxO1磷酸化水平(pFoxO1/FoxO1)较lox/lox-CTL组降低2.3倍;而MGRKO-CKD组的Atrogin-1表达仅轻微上调,MuRF-1则无明显变化;MGRKO-CKD组Atrogin-1蛋白表达水平仅比MGRKO-CTL组升高,同时pAkt/Akt、pFoxO1/FoxO1水平较对照组仅轻微降低。结论:内源性糖皮质激素水平升高在CKD肌肉消耗中发挥重要作用;MGRKO可减轻/阻止CKD状态下的体重下降和肌肉萎缩,下调肌萎缩关键基因Atrogin-1和MuRF-1表达水平;该效应与阻断糖皮质激素影响Akt/FoxO1信号途径有关,抑制糖皮质激素信号通路可能改善CKD肌肉消耗。

马兜铃酸对肾小管上皮细胞释放ET、Ang-Ⅱ的影响及甘草酸干预作用的实验研究

为探讨马兜铃酸 (AA)对体外培养的肾小管上皮细胞释放内皮素 (ET)、血管紧张素(Ang II)的影响 ,以及甘草酸的干预作用 ,以不同浓度AA作为刺激物 ,观察AA对体外培养的肾小管上皮细胞系 (LLC PK1)分泌和释放Ang II、ET的影响 ;另各培养体系中分别加入AA (4 0 μg/ml)和不同浓度甘草酸 ,观察甘草酸对AA作用下LLC PK1释放AngII、ET的干预作用。各组培养 2 4h后 ,提取培养上清 ,用放射免疫法测定ET、Ang II的浓度。结果显示 :①AA(4 0、80、16 0 μg/ml)可明显刺激细胞释放ET、Ang II(P <0 0 1)。②甘草酸在 5 0 μg/ml、10 0 μg/ml、2 0 0 μg/ml浓度时可使AA刺激细胞分泌和释放ET、Ang II水平下降 (P <0 0 5或P <0 0 1)。提示 :AA可刺激肾小管上皮细胞分泌和释放ET、Ang II ,此作用可能与AA的细胞毒性损害有关 ;甘草酸可使AA刺激细胞分泌和释放ET、Ang II水平下降 ;甘草酸的保护作用可能与抑制AA作用下细胞分泌和释放ET、Ang II有关。

血液透析患者蛋白质-能量消耗与内源性糖皮质激素水平和胰岛素抵抗的临床研究

目的探讨并发蛋白质能量消耗(protein-energy wasting.PEW)的维持性血液透析患者临床营养指标与内源性糖皮质激素水平及胰岛素抵抗的关系。方法采用改良主观营养评价法(MQSGA),对解放军第四五五医院2010年3月至2011年2月在血液净化中心行维持性血液透析的患者进行营养评分,选择MQSGA>10分者共70例,以30例健康成人为对照组。观察体质量指数等人体测量学指标、生化指标及血常规等;EIA法检测血清皮质酮浓度(透析前、空腹静脉血);ELISA法检测透析前空腹胰岛素浓度,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),并分析营养指标与血清皮质醇及HOMA-IR的相关性。结果 70例血液透析患者MQSGA平均评分为12.97±2.36;患者的体质量及体质量指数(BMI)、肱三头肌皮褶厚度、中臂围、中臂肌围等均低于健康对照组,血清白蛋白和总蛋白水平略低于对照组;皮质酮浓度显著高于对照组[(2.35±3.68)ng/L比(10.82±14.52)ng/L,P<0.01];空腹胰岛素水平明显升高[(6.4±1.3)mmol/l比(25.2±9.9)mmol/l,P<0.001],胰岛素抵抗指数HOMA-IR也明显升高[(91.39±0.49)比(5.3±2.70),P<0.001]。Spearman相关性分析显示血清皮质酮水平与MQSGA显著正相关,相关系数(r=0.684,P<0.001),与透析龄、血清未饱和铁、总铁结合力及转铁蛋白饱和度呈一定程度正相关,与中臂围、中臂肌围显著负相关;空腹胰岛素水平和HOMA-IR指数与MQSGA正相关,与体质量指数、中臂围、中臂肌围负相关。结论并发PEW的血液透析患者,虽然其血浆白蛋白在正常水平,但患者仍然存在较低体质量指数、肌肉含量较低等;内源性糖皮质激素水平升高和胰岛素抵抗可能与血液透析患者蛋白质能量消耗有关。

丹参有效组分对马兜铃诱导的肾小管上皮细胞转化生长因子-β_1、基质金属蛋白酶抑制剂-1、纤溶酶原激活物抑制剂-1及内皮素-1表达的影响

目的观察丹参有效组分(丹参酮ⅡA、丹酚酸B、丹参单体IH764-3)对马兜铃酸(AA)诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)细胞因子表达的影响。方法以AA20mg/L诱导HK-2细胞(AA诱导组),同时在培养液中分别加入丹参酮ⅡA(2.5、5.0、10.0、20.0mg/L)、丹酚酸B(5、10、20、40mg/L),丹参单体IH764-3(5、10、20、40mg/L),培养24、48、72h后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各细胞培养液中转化生长因子(TGF)-β1、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)-1、内皮素(ET)-1水平。结果AA刺激HK-2细胞后,可诱导其细胞因子表达增加。培养72h后,TGF-β1、PAI-1水平降低,但仍显著高于对照组(P<0.05)。ET-1的表达随AA诱导时间的延长而显著增加(P<0.05)。丹参各有效组分干预后细胞因子的表达降低,与AA诱导组比较,丹酚酸B对TGF-β1、TIMP-1、ET-1的过多表达具有较好的抑制作用(P<0.05),并显示出一定的剂量依赖性。结论丹参有效组分可降低AA诱导的HK-2细胞的TGF-β1、TIMP-1、PAI-1、ET-1过高表达,以丹酚酸B的作用较好。

老年血液透析患者甲状旁腺功能异常及其影响因素的研究

目的分析老年血液透析患者钙磷代谢紊乱和甲状旁腺功能异常的情况及其影响因素。方法 :选择2010年1月至2010年12月在上海市解放军第455医院、上海市第七人民医院和上海市静安区中心医院行维持性血液透析病情稳定的慢性肾衰竭患者286例,根据年龄分为老年组(≥65岁)和非老年组(<65岁)。所有患者于透析前空腹抽血送检血红蛋白(Hb)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、钙、磷、全段甲状旁腺激素(iPTH)、超敏C反应蛋白(HsCRP)、白蛋白(Alb)等,同时测定透析后血清尿素氮浓度,记录超滤量、透析后体质量和透析时间,根据公式计算血清白蛋白校正钙(Ac-Ca)和尿素清除指数(Kt/V)。结果老年血液透析患者占同期血液透析人口的51.4%。老年组慢性肾衰竭的主要病因是原发性高血压,占35.4%,其次为慢性肾小球肾炎和糖尿病,分别占21.1%和19.7%。非老年组慢性肾衰竭的主要病因是慢性肾小球肾炎,占43.2%,其次为糖尿病和原发性高血压,分别占23.7%和12.2%。与非老年组比较,老年组的透析龄更短,干体质量更轻,使用维生素D和/或钙剂的患者数更少,收缩压更高,舒张压更低,血清BUN、Scr、P、iPTH、Alb、标准蛋白氮呈现率(nPNA)浓度更低,Hs-CRP更高,低iPTH血症(<150pg/L)的发生率更高(分别达55.8%和36.7%),均有统计学意义,P<0.05,而2组的Hb、AC-Ca和Kt/V比较无明显差异,P>0.05。logistic多元回归分析表明,患者的年龄、血磷、白蛋白和nPNA是老年维持性血液透析患者继发性甲状旁腺功能减退的独立危险因素。结论老年维持性血液透析患者多数存在甲状旁腺功能低下的现象,其发生可能与年龄、营养不良等因素有关,有待进一步研究。

低氧诱导因子1α基因转染的人脂肪源性干细胞对肾小管上皮细胞损伤的影响

目的:将低氧诱导因子1α(HIF-1α)基因质粒高效感染人脂肪源性干细胞(hADSCs),并与顺铂诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)共孵育,观察hADSCs对HK-2细胞损伤的影响。方法:以慢病毒为载体,将HIF-1α转染hADSCs,与顺铂诱导的HK-2细胞共孵育。电镜观察HK-2细胞形态、结构的变化;原位末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡指数;Westernblot检测HK-2细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病2基因(Bcl-2)的变化及hADSCs细胞促红细胞生成素(EPO)、血红素氧化酶1(HO-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,ELISA检测培养液中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子1(KIM-1)的浓度,EPO、HO-1、VEGF和HIF-1α的浓度变化。结果:(1)与顺铂诱导组相比,共孵育后的HK-2细胞结构损伤减轻、凋亡细胞减少,caspase-3的表达低于顺铂诱导组、Bcl-2的表达水平升高;其中HIF-1α转染的hADSCs与HK-2细胞共孵育后,HK-2细胞损伤明显减轻,凋亡蛋白的变化更为明显。(2)顺铂诱导组培养液中NGAL、KIM-1浓度升高,以KIM-1变化明显(P<0.05);细胞共孵育后培养液中KIM-1浓度降低,转染组较明显。(3)转染后的hADSCs细胞内EPO、HO-1、VEGF的蛋白表达升高;培养液中HO-1、VEGF含量增高(P<0.05),HIF-1α、EPO的含量变化不明显。结论:hADSCs与HK-2细胞共孵育后,可以减轻顺铂诱导的HK-2细胞结构损伤、抑制细胞凋亡,HIF-1α转染hADSCs后其作用更为明显,可能与细胞保护因子的高表达有关。

左卡尼汀对血液透析患者肾性贫血和左心功能的影响

目的观察左卡尼汀联合人重组促红细胞生成素（〉HuEPO）对维持性血液透析（MHD）患者肾性贫血、左心功能的影响。方法将78例MHD患者随机分为对照组和治疗组，每组39例。治疗组于每次血液透析结束时静脉注射左卡尼汀1.0g；对照组每次血液透析结束时静脉注射生理盐水5ml。疗程均为6个月。2组同时于血液透析后皮下注射r-HuEPO（每周75-150U／kg）。观察2组治疗前后的临床症状、体征相关的实验室检查以及超声心动图的变化。结果治疗组治疗后3个月患者血红蛋白（Hb）、红细胞压积（Hct）、血清白蛋白（Alb）、前白蛋白（PA）水平显著高于治疗前及同期对照组（P〈0.01），〉HuEPO用量减少，且患者精神状态、体力、食欲、恶心、呕吐、透析耐受性、透析中肌痉挛、心律失常或低血压等症状明显改善，治疗后6个月患者左心功能较治疗前及同期对照组明显改善（P〈0.01）。结论左卡尼汀联合r-HuEPO可以明显改善尿毒症血液透析患者肾陛贫血和左心功能。

携带增强绿色荧光蛋白的慢病毒载体感染人脂肪源性干细胞的有效性

背景:细胞移植前,将目的基因转染干细胞可增强细胞治疗效果。但要实现目的基因的高效转移并适度表达,载体系统的选择是关键。目的:将携带绿色荧光蛋白的慢病毒载体感染人脂肪源性干细胞,检测病毒感染效率及感染后的细胞活力。方法:利用脂质体转染法获取慢病毒原液。设定不同感染复数(1,5,10,15,20),将带有增强绿色荧光蛋白的慢病毒载体感染人脂肪源性干细胞。荧光显微镜下观察病毒转染后人脂肪源性干细胞内增强绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪测定病毒感染效率。茜素红染色及油红 O 染色鉴定病毒转染后人脂肪源性干细胞的多向分化潜能。MTT 法检测转染后人脂肪源性干细胞的增殖情况。结果与结论:随病毒感染时间及感染复数值的增加,人脂肪源性干细胞内绿色荧光表达明显增强,感染后第 3 天,感染复数为 20 时人脂肪源性干细胞内可见明显绿色荧光表达,病毒感染效率为 60%;第 5～7 天,病毒感染效率可达 90%～95%。转染后人脂肪源性干细胞经成骨及成脂诱导液培养后,茜素红染色及油红 O 染色阳性,表明病毒感染未影响人脂肪源性干细胞的多向分化能力。病毒感染后,人脂肪源性干细胞的增殖能力未受明显影响。说明携带增强绿色荧光蛋白的慢病毒载体可以有效感染人脂肪源性干细胞。

腹膜透析管浅涤纶套外露的形成原因分析与护理

目的分析腹膜透析患者腹膜透析管浅涤纶套外露的原因及护理体会。方法收集解放军第四五五医院肾脏科2005年1月至2010年1月间腹膜透析患者380例,回顾性分析其中发生腹膜透析管浅涤纶套外露的10例患者的形成原因。380例腹膜透析患者均采用常规的腹膜透析手术方法,术后常规护理。采用百特鹅颈腹膜透析管,百特双联腹膜透析液。将其中发生了浅涤纶套外露的10例患者按手术因素,护理因素,自身因素与其他因素进行分析阐述。结果因手术因素造成涤纶套外露的1例,护理因素造成涤纶套外露的1例,自身因素造成涤纶套外露的8例。结论腹膜透析患者浅涤纶套外露临床发生较少,但对患者的生活质量、生存率及腹膜透析治疗持续时间等影响较大,应引起临床重视。我们通过加强换药,个别指导,加强营养,皮下隧道延长等措施后,未发生腹膜炎、腹膜透析拔管等严重并发症及后果。

马兜铃酸剂量与大鼠肾损害相关性研究

目的探讨不同剂量马兜铃酸对大鼠肾脏功能和组织形态学的影响。方法制备关木通浸膏剂，并测定其中马兜铃酸（AA）的含量。取36只雄性Wistar大鼠随机分为4组，实验组分为低剂量组（AA5mg·kg^-1·d^-1）、中剂量组（AA 10mg·kg^-1·d^-1）、高剂量组（AA20mg·kg^-1·d^-1），用不同剂量的关木通浸膏灌胃；对照组用同体积饮用水灌胃。各组每周测量体重，于第8周留取24h尿液；腹主动脉采血，测定相关肾功能指标；取肾组织进行形态学检查。结果用药后各组尿量均明显增多，体重明显降低，且以中、高剂量组体重下降最明显；低剂量组尿蛋白、尿N-乙酰-D氨基葡萄糖酶（NAG）排泄量，以及肌酐、尿素氮与正常对照组比较，差异无统计学意义，而中、高剂量组尿蛋白、尿酶排泄量明显升高。肾脏组织形态学观察，低剂量组肾脏损害轻微，中、高剂量组表现为不同程度的肾小管损伤、坏死和小管灶性萎缩以及早期间质纤维化，其中以高剂量组病变较严重。电镜观察高剂量组肾小管上皮细胞超微结构发生显著变化，主要是细胞核变异。结论马兜铃酸肾毒性是相对的，与用药剂量有关。

CD4^+CD25^+调节性T细胞与免疫耐受的研究进展

CD4+CD25+调节性T细胞的主要功能是抑制自身反应性T细胞,其在维持机体T细胞内环境稳定,调节和保持对自身抗原耐受之间的平衡以及移植免疫耐受方面具有重要作用。本文主要就CD4+CD25+调节性T细胞的功能、作用机制以及免疫抑制药物对调节性T细胞的影响等研究进展进行综述。

肌肉萎缩蛋白Fbox-1基因沉默对糖皮质激素作用下肌管萎缩的影响

目的:研究糖皮质激素地塞米松(dexamethasone,DEX)对体外培养肌管的形态、蛋白质合成/分解代谢及肌肉萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin-1)的表达,Atrogin-1基因沉默是否可减轻肌管萎缩。方法:体外培养小鼠肌纤维细胞株C2C12细胞并分化为肌管后,用DEX处理48h,同位素3H-酪氨酸掺入法检测蛋白合成,3H-酪氨酸释放率检测蛋白分解代谢;荧光显微镜观察肌管形态并拍照;Northern blot检测Atrogin-1mRNA水平;应用小分子干扰RNA片段(siRNA)技术使Atrogin-1基因沉默后,观察DEX作用下肌管形态的改变。结果:DEX5μmol/L作用后,肌管酪氨酸(tyrosine)掺入率下降17.4%,同时tyrosine释放率升高24.7%,使肌管形态变细、萎缩;剂量依赖性地升高Atroign-1蛋白表达水平,使Atroign-1mRNA表达升高3倍;Atrogin-1基因沉默可改善DEX引起的肌管萎缩。结论:DEX促进肌管蛋白质分解代谢,并抑制蛋白合成代谢,导致肌肉萎缩;Atrogin-1基因沉默可改善DEX引起的肌肉萎缩,Atrogin-1基因可能是逆转肌肉消耗性营养不良的有效靶点。

肾移植患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化及临床意义

目的观察肾移植患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平的变化，探讨其在诊断移植肾急性排斥反应中的作用。方法采用流式细胞仪检测26例肾移植患者及30例正常对照组外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平。结果①慢性肾衰竭患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。②非排斥组移植后1、2、4、8周CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平明显高于移植前（P〈0．01）。③急性排斥组排斥反应主要发生在术后第7～21d，其CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平明显低于同期的非排斥组（P〈0．01）。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平的测定可以作为肾移植患者移植后急性排斥反应诊断和预测预后的重要指标。

CD4＋CD25＋调节性T细胞与免疫耐受的研究进展

CD4＋CD25＋调节性T细胞的主要功能是抑制自身反应性T细胞，对于维持机体T细胞内环境的稳定，调节和保持对自身抗原耐受之间的平衡以及移植免疫耐受具有重要作用。本文主要就CD4＋CD25＋调节性T细胞的功能和作用机制以及免疫抑制药物对其的影响等研究进展进行综述。

203例急性肾损伤流行病学分析

急性肾损伤（AKI）是临床常见而严重疾病，使用新的诊断标准，即48h内血肌酐上升达到或超过0．3mg／dL，住院患者AKI发生率可达8％，ICU患者发生率超过50％，其中4％～5％患者需要透析治疗，透析患者病死率仍高达50％～60％旧J。脓毒症（sepsis）性AKI过去未引起足够重视，实际上脓毒症是AKI一个非常重要的致病因素，大约一半ICU病房AKI病因是脓毒症。

营养不良血透患者骨骼肌消耗的临床研究

目的研究并发蛋白质能量消耗性（protein—energy wasting，PEW）营养不良的维持性血液透析患者骨骼肌消耗的临床表现及MRI改变。方法70例在我院血液净化中心行维持性血液透析、改良主观营养评价（MQSGA）评分〉10分的患者，观察体重指数等人体测量学指标、生化指标及血常规等，核磁共振（MRJ）测定右下肢骨骼肌肌肉面积和脂肪面积，分析营养指标与肌肉含量的相关性。以30例健康成人为对照组。结果70例血透患者MQSGA评分为12．97±2．36，患者的体重及BMI、肱三头肌皮褶厚度、中臂围、中臂肌围等均低于对照组，血清白蛋白和总蛋白水平略低于对照组；MRI结果显示血透患者与对照组股骨长度基本一致，但营养不良透析患者的右下肢横截面积（cross—sectional area，CSA）明显减少（P〈0．01）；患者肌肉／总面积比值均低于对照组（P〈0．01）；但脂肪面积／肌肉面积比值高于对照组（P〈0．05～0．01）。相关分析结果提示这与患者的胰岛素抵抗有关。结论并发PEW的血透患者，存在体重指数下降和肌肉量丢失，下肢骨骼肌肌肉含量降低，而相对脂肪含量较高，胰岛素抵抗可能与血透患者PEW的肌肉消耗有关。

低渗非离子造影剂对肾小管上皮细胞凋亡的作用及其机制

目的探讨低渗非离子型造影剂碘必乐诱导体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）凋亡的作用及机制。方法体外培养的HK-2细胞，分为阴性对照组、不同剂量（1．16、4．63、18．5、74、296gl/L）的碘必乐作用组（作用时间为6h）。通过流式细胞仪、Hoechst33258染色观察细胞凋亡的比例和形态学变化；Western印迹方法检测凋亡蛋白天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）的表达水平，并选取作用最强的剂量（296gl／L）刺激2、4、6、12h，观察caspase-3表达变化。选取不同剂量碘必乐作用1h，与阴性对照组比较，观察细胞外信号调节激酶（ERK）和p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路磷酸化水平的变化，并观察不同剂量p38MAPK抑制剂SB203580对碘必乐诱导的caspase-3和Bcl-2表达的影响。结果流式细胞仪检测结果示74、296gI／L碘必乐作用下细胞凋亡率较阴性对照显著升高（均P〈0．05）。Hoechst33258染色结果示296gI／L碘必乐可致明显的细胞凋亡形态学改变，凋亡细胞核呈致密浓染或核碎裂。Western印迹检测方法表明，碘必乐以剂量和时间依赖方式诱导细胞内caspase-3表达，以296gl/L作用12h表达最强；各剂量碘必乐作用下细胞内ERK1／2磷酸化水平与阴性对照组的差异均无统计学意义（均P〉0．05），而-定剂量的碘必乐处理组细胞内p38MAPK磷酸化水平较阴性对照组显著升高（均P〈0．05）。应用p38MAPK特异性抑制剂（30μmol／L）预处理2h可以阻断细胞内p38MAPK信号通路的磷酸化，抑制碘必乐诱导的细胞内caspase-3表达并部分上调Bcl-2表达，与碘必乐阳性对照组的差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论低渗非离子型造影剂碘必乐以剂量和时问依赖方式诱导体外培养的HK-2细胞凋亡，其机制可能与上调caspase-3和下调抗凋亡蛋白Bcl-2有关，而p38MAPK信号通路的激活可能参与了该过程的调控。

红细胞生成素对马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞凋亡的保护机制研究

目的探讨红细胞生成素（EPO）抑制马兜铃酸（AA）所诱导的肾小管上皮细胞（LLC—PK1）凋亡的作用机制。方法以不同浓度AA（5、10、20mg／L）刺激LLC—PK1细胞株，同时培养体系中加入不同浓度的EPO（5、10、20U／m1），另设对照组。各组细胞培养24h后，TUNEL法原位检测细胞凋亡情况；流式细胞仪检测凋亡细胞的比例；Western印迹检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶（caspase）3、bcl—xL的蛋白表达。结果（1）与对照组（6．09±1．84）％相比，AA5mg／L组TUNEL阳性细胞比例增加【（9．79±2．58）％】；AA10、20mg／L阳性细胞比例显著增加[（37．67±8．23）％、（62．95±8．29）％】，与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。AA10mg／L组细胞经EPO10、20U／ml干预后，阳性细胞比例显著下降f（22．41±3．47）％、（14．63±2．66）％，P〈0．051；AA20mg／L组细胞经不同浓度EPO干预后，阳性细胞比例无显著变化。（2）与对照组相比，AA5mg／L组细胞caspase-3的活性表达有少量增加；AA10mg／L组细胞caspase-3显著增加；而AA20mg／L组caspase-3表达降低。与AA10mg／L组相比，EPO10U／ml和EPO20U/ml干预后，细胞caspase-3的表达显著降低。（3）与对照组相比，AA5mg／L组细胞bcl—xL的表达明显增加；AA10mg／L组细胞bcl-xL表达减少；AA20mg／L组细胞bcl—xL表达显著减少。与AA10mg／L组相比，EPO5U/ml干预后，细胞bcl-xL有所增加；EPO10U／ml和EPO20U／ml干预后，细胞bcl—xL的表达显著增加。结论EPO可能通过促进抗凋亡蛋白bcl-xL的表达、抑制凋亡蛋白酶caspase-3的过高表达，从而抑制了AA诱导的肾小管上皮细胞的凋亡。

慢病毒载体介导的低氧诱导因子-1α在脂肪源性干细胞中的表达

目的构建携带有增强绿色荧光蛋白（EGFP）和低氧诱导因子-1α（HIF-1α）的重组慢病毒载体，并感染人脂肪源性干细胞（hADSCs）。方法重组慢病毒载体Lenti—hHIF-1α-EGFP转染293T细胞，进行病毒包装并测定病毒滴度。按照MOI=20将Lenti—hHIF-1α-EGFP转染hADSCs，流式细胞仪分选EGFP标记的细胞。对转染后的hADSCs进行多向分化能力鉴定，并检测hADSCs内hHIF-1α的表达。结果病毒滴度为5×10^7pfu／ml。Lenti—hHIF-1α—EGFP转染hADSCs后第3天，荧光镜下观察转染效率70％，经流式细胞仪分选后，98％以上的细胞均有EGFP的表达。转染后的hADSCs茜素红染色及油红O染色阳性，表明hADSCs仍具有多向分化的潜能。hADSCs可以高表达HIF-1α。结论成功构建带有报告基因EGFP和目的基因hHIF-1α的慢病毒表达系统，并以慢病毒为载体将hHIF-1α整合到hADSCs中实现其高效表达。