高灵敏Dot Blot检测转基因小鼠肝细胞内HBV DNA的初步研究

目的考察dot blot检测HBV转基因小鼠肝细胞内HBV DNA含量的可行性。方法用地高辛标记HBV探针,利用pTHBV1047质粒检测杂交系统灵敏度,同时进行标准曲线研究,采用dot blot检测转基因小鼠肝细胞内HBV DNA含量。结果杂交系统的检测灵敏度为0.1pg;pTHBV1047质粒在100~6.25pg之间呈线性关系,R2为0.976~0.999;同一只HBV小鼠肝3次检测误差范围在±140%,5只鼠HBV DNA含量分别为6.48、3.59、7.83、7.96、5.28pg/μg基因组DNA。结论优化后的dot blot系统灵敏度高、特异性强、重复性好,可应用于转基因小鼠肝细胞内HBV DNA检测。