抑瘤肽注射液的研制及其抑瘤作用研究

目的研制抑瘤肽注射液。方法采用生化方法从乳猪肝中提取可溶性胶原,经胃蛋白酶水解后制成抑瘤肽注射液,同时拟订质量标准并进行检验;观察抑瘤肽注射液对荷瘤昆明小鼠HepA肝瘤和S180纤维肉瘤及小鼠体内肝癌H22移植瘤的影响。结果抑瘤肽注射液生产工艺路线合理,质量达到拟订标准。抑瘤肽注射液能明显抑制HepA肝瘤生长,25,50,100,200mg/(kg·d)的抑制率分别为43.26%,55.06%,74.71%,40.47%;对于荷瘤小鼠S180纤维肉瘤,25,50,100mg/(kg·d)的抑制率分别为53.87%,76.53%,58.20%,而阿霉素阳性对照组[2mg/(kg·d)]的抑制率为62.41%;对小鼠体内肝癌H22移植瘤生长的抑制呈剂量相关性,50,100,200mg/(kg·d)的抑制率分别为48.1%,60.0%,74.8%,而卡铂阳性对照组[20mg/(kg·d)]的抑制率为63.7%。结论制备出的抑瘤肽注射液合格,且适合于大规模生产,能明显地抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长。

胎牛骨髓多肽对小鼠骨髓细胞CFUF-GM增殖的实验研究

通过特定工艺将胎牛骨髓进行分离提取,发现其中含有对小鼠造血系统具有调节作用的中分子多肽。用体外半固体琼脂培养及MTT法分别观察其对小鼠骨髓细胞CFU-GM 增殖和骨髓细胞DNA合成的影响,结果表明,胎牛骨髓小分子多肽（BGF）对骨髓单核粒系统细胞的增殖具有刺激作用。

肾提取液对大鼠庆大霉素肾毒性的防治作用研究

研究乳猪肾提取液对大鼠庆大霉素肾毒性的防治作用。新鲜乳猪肾经匀浆、超滤等处理得肾提取液。肌注庆大霉素100mg／（kg·d）×7d制成大鼠急性肾衰模型。制模同时及造模后分别ip肾提取液15mg／（kg·d），观察大鼠血清尿素氮（Bloodureanitrogen，BUN）、肌酐（Cr）及肾组织变化情况。实验结束时，预防组BUN为9．30±2．60mmol/L，Cr为125．00±26．60μmol／L；模型组BUN为12.80±2.45mmol／L，Cr为167．00±39．60μmol／L，P＜0．01。结果表明，肾提取液可明显减轻庆大霉素对大鼠的肾损害。

应用细菌内毒素法检查促肝细胞生长素热原的探讨

参照抑制增强试验,用鲎试剂法检查注射用促肝细胞生长素的细菌内毒素,并与兔法检查热原平行对比,共检查样品256批,两法合格率的符合率为92.2％。

乳猪肝胶原蛋白水解物注射液的研制及对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

目的与方法摸索乳猪肝胶原蛋白水解物注射液(HCH)的制备方法,同时对其进行质量检验和初步稳定性试验;并观察其对荷瘤昆明小鼠HepA肝瘤和S180纤维肉瘤及小鼠体内肝癌H22移植瘤的影响。结果HCH生产工艺路线合理,质量达到拟定标准要求。HCH能明显抑制HepA肝瘤生长,25、50、100、200 mg.kg-1.d-1的抑制率分别为43.26%、55.06%、74.71%、40.47%;对荷瘤小鼠S180纤维肉瘤25、50、100 mg.kg-1.d-1的抑制率分别为53.87%、76.53%、58.20%,而阿霉素(2 mg.kg-1.d-1)阳性对照组的抑制率为62.41%;对小鼠体内肝癌H22移植瘤生长的抑制呈剂量相关性,50、100、200mg.kg-1.d-1的抑制率分别为48.1%、60.0%、74.8%,而卡铂(20 mg.kg-1.d-1)阳性对照组的抑制率为63.7%。结论此法可制备合格的HCH,且适合于大规模生产;HCH能明显地抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长。

葡聚糖硫酸钠诱导动物溃疡性结肠炎及其机制

溃疡性结肠炎(UC)系由机体局部免疫器官对肠道多种抗原的高敏状态而引起的非特异性炎症,属自发性炎症性肠病(IBD)。鉴于其致病机制尚待探讨且国内报道少见,本文采用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导动物UC,分析比较实验动物病理、生化及组化指标,探讨了模型建立的方法及发病机制。 1 材料与方法 1.1 材料 (1)动物:雌性BALB/c小鼠,体重20 g。Harty's豚鼠,雌雄各半,体重280～310 g。均购自中山医科大学动物实验中心,具Ⅰ级动物合格证。恒温常规饮食。

促肝细胞生长素溶液不同制备方法的比较

目的比较从乳猪肝中提取促肝细胞生长素溶液的不同方法。方法对乳猪肝匀浆液分别用反复冻融、酸水解和酶水解3种方法提取,计算单位收率及单位生产成本。结果3种方法制备的促肝细胞生长素溶液均符合国家药品标准,但收率和活性不同。用酸水解法,多肽含量及收率比反复冻融法提高2倍,酶解法多肽含量及收率比反复冻融法提高2.4倍,酸解法和酶解法的活性值比反复冻融法都有所降低。酸水解法的单位成本只有反复冻融法的1/2,酶解法的单位成本与反复冻融法的基本相同。结论3种方法制备的促肝细胞生长素溶液在收率和成本方面有较大的不同,酸水解方法更适合于大规模生产。

重组人肝再生增强因子对大鼠肝部分切除后肝再生的影响

目的观察原核表达的重组人肝再生增强因子(rhALR)对大鼠肝再生的影响。方法按Higgins方法进行大鼠34%肝切除。术后4～6h各实验组大鼠经腹腔注射rhALR剂量分别为50μg、100μg、200μg、400μg、800μg,对照组给生理盐水。术后30h杀鼠取肝,增殖核抗原(PCNA)免疫组化染色和HE染色,进行肝细胞核PCNA阳性细胞计数和有丝分裂计数。结果rhALR能促进肝部分切除后大鼠肝细胞的有丝分裂和细胞核PCNA的表达,并呈现一定的剂量依赖关系。结论rhALR能促进在鼠肝再生和肝细胞增殖。

IFN-γ与IL-12诱导CIK细胞生物学活性的比较研究

探讨IFN-γ与IL-12分别对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)的体外扩增速度、细胞免疫表型和杀伤活性的影响。分别以传统的IFN-γ、CD3 mAb、IL-2和IL-1α以及IL-12、CD3 mAb、IL-2和IL-1α为诱导剂制备CIK细胞,直接活细胞计数法比较两者的扩增速度,流式细胞仪检测比较两组细胞的免疫表型,LDH法比较两者对K562细胞株的杀伤活性。结果:两种CIK细胞的增殖速度无显著性差异,但IL-12启动的CIK细胞体外扩增时存活时间比常规CIK细胞长,并且其CD3+CD8+及CD3+CD56+细胞显著高于常规CIK细胞(P<0.05),CD3+CD4+和CD4/CD8显著低于常规CIK(P<0.05),并且其体外对K562的非特异杀伤活性在效靶比为40∶1时显著高于常规CIK。IL-12诱导扩增的CIK中效应细胞比例显著增加,同时抑制性T细胞比例降低,且体外该CIK细胞的杀伤能力较常规CIK好。故IL-12取代IFN-γ对CIK进行预刺激可增强CIK细胞的生物学活性。

ELISPOT及FACS在慢性乙型肝炎病毒感染者细胞免疫功能检测中的应用

为探讨HBV感染者特异性细胞免疫功能的差异,选取以流感多肽刺激健康人外周血单个核细胞(PBMC),采用ELISPOT法检测其PBMC中IFN-γ分泌细胞的数量。在以流感多肽为刺激物建立的流感质控细胞库的调控下,以HBV核心抗原为刺激物,检测表面抗体阳性的HBV感染者(A组)、e抗原阳性的慢性HBV携带者(B组)、e抗原阴性的慢性HBV携带者(C组)三类研究对象的IFN-γ分泌细胞数量。同时,采用FACS方法对A、B、C组分别进行T淋巴细胞亚群及调节性T细胞(Treg)检测。发现A与B、C组相比,斑点形成细胞数(SFC)/106PBMC明显减少(P=0.000及P=0.022),C组斑点形成细胞数显著多于B组(P=0.000)。FACS检测结果A组CD4+T细胞数量及CD4/CD8比值A组显著高于B、C组,而Treg数量B组显著高于A、C组。表明通过ELISPOT及FACS对乙肝病毒感染者外周血T细胞进行数量上和功能上的研究,能够深入了解体机体的免疫状态,从而为临床治疗及判定疾病的发展、转归提供理论依据。