构建组织工程皮肤种子细胞的人血管内皮细胞的培养

目的探讨如何以简便快捷的方法获得大量生长状态良好的人血管内皮细胞,以作为构建含血管组织工程皮肤的种子细胞。方法以新生儿脐带静脉作为细胞来源,用消化法获得血管内皮细胞,用本实验室设计的方法对细胞进行纯化培养,倒置显微镜观察细胞形态,结合免疫组化检测(第Ⅷ因子)和透射电镜(Weibel-Palade小体)鉴定细胞来源。结果用本实验室的纯化方法获得的血管内皮细胞未见成纤维细胞污染,细胞增殖旺盛,处于良好的生长状态。结论结果表明本实验方法可以获得大量处于良好生长状态的高纯度血管内皮细胞,可以用于含血管组织工程皮肤的构建。

角蛋白CK10和CK19在组织工程皮肤和正常在体皮肤表达差异的意义

目的观察角蛋白CK10和CK19在组织工程皮肤和正常在体皮肤的表达,并探讨其差异表达的意义。方法用组织工程方法构建人全层皮肤,以正常在体皮肤为对照,免疫组化检测CK10和CK19在表皮层的表达。结果在组织工程皮肤中CK10表达阳性,CK19无明显阳性表达;正常在体皮肤CK10和CK19表达皆为阳性,其中CK19主要表达在基底膜附近。结论组织工程皮肤中表皮层细胞已经基本丧失了组织干细胞的特性,分化成熟。

简便快捷获取角朊细胞和真皮成纤维细胞:组织工程皮肤种子细胞培养的3种方法比较(英文)

目的:探讨如何以简便快捷的方法获得大量最佳生长状态的角朊细胞和真皮成纤维细胞以作为皮肤组织工程的种子细胞。方法:用2.5g/L胰酶、35g/L热溶素和9.0×103U/LDispase分别在A,B,C不同条件下处理皮肤标本,观察表皮与真皮的分离情况,并分别培养角朊细胞和真皮成纤维细胞,观察比较细胞的贴壁率和克隆形成率,通过MTT和BrdU检测观察细胞的生长状态,并分别用不同方法获得的细胞构建组织工程皮肤。结果:A,B,C3种方法角朊细胞的贴壁率(%)分别为:8.7±0.2,12.1±0.2,15.9±0.4;成纤维细胞的贴壁率(%)分别为:20.2±2.4,30.5±1.8,38.3±1.9。组间比较差异有统计学意义(t=3.3506,t0.05/2,18=2.101,P<0.05)。角朊细胞克隆形成率(%)分别为:0.110±0.025,0.260±0.026,0.370±0.021。组间比较差异有统计学意义(t=2.2875,t0.05/2,18=2.101,P<0.05)。在各种条件下,Dispase处理组获得的细胞数量、细胞贴壁率和克隆形成率均优于其他消化液处理组,细胞纯度高,生长状态良好;用其他方法获得的细胞生长状态相似,都可成功构建组织工程皮肤。结论:使用9.0×103U/LDispase可以简便快捷的获得大量生长状态良好的角朊细胞和真皮成纤维细胞以作为皮肤组织工程的种子细胞,合适的消化方法。

人牙周膜成纤维细胞生物学行为的研究(英文)

目的:观察精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸-丝氨酸(RGDS)对人牙周膜成纤维细胞(PDL)生物学行为的影响,探讨RGDS的作用机制及其应用于牙周治疗的可行性。方法:采用细胞培养、固相结合分析等方法,观察RGDS对PDL细胞的黏附、伸展以及增殖、ALP的影响。结果:RGDS可促进PDL的黏附、伸展,在浓度为25～100mg/L时作用显著(P<0.01),在浓度为50～100mg/L时可明显促进PDL细胞增殖(P<0.05),浓度为25～100mg/L时显著提高PDL细胞的ALP活性(P<0.05)。结论:RGDS对PDL细胞的黏附、伸展、增殖及ALP活性均有促进作用,且其促黏附、伸展的作用更为显著。

组织工程皮肤修复皮肤缺损成功率与手术方法的相关性(英文)

背景:皮肤缺损的常规修复方法多采用自体皮肤移植,需要健康供皮区且会遗留不同程度的瘢痕畸形。组织工程皮肤的成功构建并应用于临床,标志着皮肤缺损治疗的重大突破。目的:通过组织工程皮肤修复皮肤缺损,分析手术方法与愈合率的关系,为组织工程皮肤的临床应用提供实验依据。设计:随机对照观察。单位:解放军第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科,组织病理学教研室,组织工程实验中心。材料:实验于2003-10/2004-03在解放军第四军医大学口腔医学院口腔组织工程实验中心完成。选用2.5～3月龄健康清洁级约克猪6只,随机分为3组:组织工程全层组、组织工程真皮+自体表皮组、自体移植组,2只/。每只猪制作8个直径50mm的圆形皮肤缺损创面,16个创组面/组,共48个创面。方法:①制备组织工程全层皮肤和组织工程真皮。②组织工程全层组:沿画线自脂肪层切除全厚皮肤,彻底止血,以湿生理盐水纱布覆盖创面备用,此时取出组织工程全层皮肤并于组织工程皮肤上均匀打引流孔以利引流,用生理盐水冲去组织工程皮肤表面的培养液,使表皮层向上平铺于创面上,注意与创面间不能产生气泡。其上分别覆盖单层油纱布,生理盐水纱布、无菌干纱布、弹性海绵垫,每层厚度约为3～5mm,常规打包包扎,最后再以弹性绷带加压包扎。③组织工程真皮+自体表皮组:以同样方法切除全厚皮肤,将取下的皮肤用取皮鼓反取厚约0.1～0.2mm的刃厚表皮泡于生理盐水中备用。以同样方法取出处理组织工程真皮后覆盖于创面上,即刻覆盖自体刃厚表皮。其余处理同组织工程全层组。④自体移植组:切除全厚皮肤并去除脂肪组织后,回植于自体创面,覆盖各层敷料,加压包扎。⑤每次换药打开创面时,移植皮肤无感染、坏死、脱落且直径不小于3mm即为成活,否则即为失败。于术后4周统计各组创面成活率。主要观察指标:术后4周各组移植皮肤成活情况。结果:术后4周时,组织工程全层组移植皮肤成活率75%,组织工程真皮+自体表皮组移植皮肤成活率87%,自体移植组移植皮肤成活率94%,3组比较基本相似(χ2=2.34,P>0.05)。结论:组织工程皮肤移植修复皮肤缺损的效果与自体表皮移植接近,证明组织工程皮肤修复皮肤缺损是可行的。