转录因子MSX-1对人牙乳头间充质细胞增殖在牙胚发育中的意义

目的观察体外培养的人牙乳头间充质细胞经转化生长因子β1(TGF-β1)作用下,肌节同源盒基因1(MSX-1)的表达变化,探讨MSX-1基因在牙胚发育中的意义。方法第5代体外培养的人牙乳头间充质细胞经50μg/L的TGF-β1刺激后,MTT方法及流式细胞仪分析观察对照组、TGF-β1处理组细胞的增殖变化,原位杂交检测两组细胞中MSX基因扩增水平的变化。结果实验组细胞培养3d细胞增殖为0.44±0.03,培养5d为0.53±0.05,培养7d为0.83±0.07,与对照组比较差异具有显著性意义(P<0.01,t=6.603,6.562,6.052)。对照组G1期细胞为94.7%,S期细胞为4.0%,G2M期细胞为1.3%,实验组细胞中的G1期降低(83.8%),S期升高(7.8%),G2M期细胞升高(9.3%)(t=5.327,P<0.01),反映细胞增殖活力的增殖指数PrⅠ值(S+G2M)对照组为5.3,实验组为17.1两者相比有显著差异(t=7.327,P<0.01)。结论MSX基因有可能在TGF-β1的调控下表达,对人牙乳头间充质细胞的增殖分化可能具有重要的调节作用。

成牙本质细胞中成纤维细胞生长因子18的表达

目的:观察成牙本质细胞中是否表达成纤维细胞生长因子18。方法:实验于2005-02/04在解放军第四军医大学口腔医院口腔内科实验室完成。①小鼠成牙本质样细胞系MDPC-23培养:细胞培养在含体积分数为0.1的胎牛血清α-MEM、青霉素l00IU/mL、链霉素l00mg/L和谷氨酰胺50mg/L的完全培养液中,同时附加50mg/L抗坏血酸。②免疫组织化学染色:一抗用1∶100稀释的成纤维细胞生长因子18多克隆抗体,4℃湿盒过夜,最后滴加二氨基联苯胺液显色。以磷酸盐缓冲液代替一抗设为阴性对照。成纤维细胞生长因子18阳性表达细胞胞浆呈棕黄色。③免疫荧光染色:一抗用1∶50稀释的羊抗小鼠成纤维细胞生长因子18多克隆抗体,4℃湿盒过夜后滴加按1∶500稀释的FITC标记的兔抗羊二抗。阴性对照用磷酸盐缓冲液代替一抗进行染色。成纤维细胞生长因子18阳性表达细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光。结果:免疫荧光和免疫组织化学法均表明成纤维细胞生长因子18在MDPC-23细胞浆呈阳性表达。结论:从蛋白水平证实了成牙本质样细胞MDPC-23表达成纤维细胞生长因子18,提示成纤维细胞生长因子18可能是影响成牙本质细胞分化的胞内信号转导分子。