免疫缺陷小鼠肿瘤模型的建立及其肿瘤相关免疫机制的探讨

目的:观察不同免疫缺陷小鼠中的人肝癌细胞生长情况以及T,B淋巴细胞的免疫作用,探讨免疫缺陷小鼠肿瘤模型制作的意义。 方法:将体外培养的人肝癌细胞接种到四种免疫缺陷小鼠,分别为:B细胞缺陷的CBA/N,T细胞缺陷的Balb/c-nu,T,B细胞缺陷的SCID及免疫重建的SCID小鼠,观察其生长特点;作鼠脾细胞毒试验,测定外周血CD4^+,CD8^+数分数和荷瘤鼠血清Ig含量的变化;作肝癌细胞凝集试验。 结果:CBA/N和用BALB/c鼠外周血淋巴细胞重建的SCID(B-PBL-SCID)鼠不成瘤,nude、SCID和用CBA/N鼠外周血淋巴细重建的SCID(C-PBL-SCID)小鼠全部成瘤;SCID鼠的瘤体比裸鼠瘤体长的更快,肝内接种转移率更高、转移范围更大。接种瘤细胞的BALB/c和CBA/N鼠脾细胞对癌细胞杀伤力较强,免疫重建的SCID鼠脾细胞毒杀伤较小。接种瘤细胞的鼠CD4^+数分数都下降,CD8^+变化不大,CD4^+/CD8^+比值下降。具有B细胞的实验鼠均测得Ig在mg·L^(-1)水平,并能使癌细胞产生凝集反应。 结论:SCID鼠是建立肿瘤模型和免疫重建研究的理想小鼠;小鼠成瘤率与T细胞相关,T细胞在异种瘤移植排斥中起主要作用;B淋巴细胞及其产生的抗体在抗肿瘤中起着不可忽视的作用。

可溶性TGF-β_1Ⅱ型受体逆转录病毒表达载体的构建

目的:构建表达人TGF—β1Ⅱ型受体细胞外结合区和人IgG1 Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础. 方法:以RT—PCR方法扩增目的基因TβRⅡ-IgG1 Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEM—T—Easy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测序;利用重组DNA 技术,将TβRⅡ-IgG1 Fc基因亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,测定病毒滴度. 结果:经测序、限制性酶切分析及PCR方法鉴定,载体插入基因序列、大小、位置均正确,并用PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的感染性重组病毒产生细胞系. 结论:成功构建了重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN, 可望为肝纤维化的基因治疗提供有效途径.

保肢手术的前瞻性基因疗法研究:BLCAP基因在人骨肉瘤细胞发展过程中的调节作用(英文)

目的:探索BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP-9607的影响,为保肢手术方法作前瞻研究基础。方法:通过细胞培养,测量细胞生长曲线、计算细胞集落形成率、检测细胞周期,观察BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607的影响。结果:BLCAP基因反义寡核苷酸浓度为10μmol/L时,对此细胞的生长速度和集落形成能力有明显促进效应;流式细胞仪检测发现其引起细胞周期变化,对细胞增殖活性有增强作用。结论:首次发现BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP-9607有明显的影响,提示BLCAP基因可能作为一种抑癌基因在人骨肉瘤发展过程中起作用。

凋亡抑制基因Survivin的表达在肿瘤预后评估中的作用

目的:克隆、表达SVV基因,并探讨其在肿瘤预后中的作用。方法:从人白血病细胞系HL60提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出SVV基因片段。将SVV基因片段插入载体pGEM-TEasy中,经全自动序列分析仪测序正确后用NdeⅠ/XhoⅠ双酶切,亚克隆到原核表达载体pRSET-C中,构建重组表达载体pRSET-c-SVV,并转化大肠杆菌BL21菌株。取工程菌,经IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE鉴定并初步纯化。结果:经RT-PCR,测序和酶切鉴定,成功地克隆了人SVV基因;经IPTG诱导的重组质粒pRSET-C-SVV表达出相对分子质量约为16500u的蛋白,与预期的结果相符。结论:成功克隆了人肿瘤细胞的抗凋亡基因SVV,并在大肠杆菌BL21中表达出SVV蛋白。该基因的高效表达为进一步探讨以SVV为基础的肿瘤的防治及预后判断提供工具。