冷冻保存人鼻中隔软骨

目的:探讨不同冷藏温度下保存成人鼻中隔软骨块活性的可行性。方法:实验于2005-03/09在解放军第四军医大学基础部病理与病理生理博士后流动站完成。取临床常规手术切除的成人鼻中隔软骨15块,切成大小约15mm×10mm,随机分成3组,每组5块。分别置入4℃,-20℃和-80℃冷冻保存,在保存24h,7d,14d,20d和30d时取材,进行软骨活性比较。①软骨样品于质量浓度为40g/L甲醛固定后制备石蜡切片,组织切片经苏木精-伊红染色和阿尔辛蓝染色后于光学显微镜下观察软骨细胞及软骨基质。②锥虫蓝排斥试验检测软骨细胞活性,根据下式求细胞活力:活细胞率(%)=活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%。结果:①软骨石蜡切片经苏木精-伊红染色和阿尔辛蓝染色后于光学显微镜下观察可见:冷冻保存24h时,各组软骨中大部分为活的软骨细胞充填软骨陷窝,软骨基质无明显变化,鼻中隔软骨活性程度较好。-80℃冷冻保存7d,-20℃保存14d及各组保存30d后,软骨细胞基本变性坏死,胞核消失,基质成份断裂、强度降低。4℃保存20d软骨中部有较多变性细胞,但软骨基质中酸性黏多糖及胶原成分无明显断裂现象。②-80℃冷冻保存软骨在保存24h时,软骨细胞活性为80%;保存7d时软骨基本失去活性,软骨细胞及基质变性坏死。-20℃保存软骨在保存24h时,软骨细胞活性为85%;14d后软骨基本失去活性。4℃保存软骨在保存24h至20d时仍保持较好活性,软骨细胞活性保持在60%以上,软骨细胞及基质成分无明显变化;保存30d时软骨活性降为20%左右。结论:4℃和-20℃在2周内保存是较好的鼻中隔软骨保存方法,而4℃保存法更具优越性,有望为临床提供一种较好的活性软骨保存方法。

缺血缺氧新生鼠海马p-CREB的变化及神经节苷脂对其的影响(英文)

目的:研究缺血缺氧新生大鼠海马结构(主要为CA1)磷酸化c-AMP反应元件结合蛋白质(phosphorylatedcylicAMPresponseelementbindingprotein,p-CREB)变化以及GM1对其的影响。方法:7d龄SD仔鼠共108只,随机分为3组:假手术对照组(36只),缺血缺氧组(HI组,36只)及缺血缺氧+神经节苷脂组(GM1组,36只),于模型建立后1,4,12,24,48和72h处死,免疫组化观察海马CA1区p-CREB的变化。结果:对照组各时间点之间p-CREB的表达差异无显著性意义(F=0.48,P>0.05);HI组、GM1组CA1区p-CREB的表达一过性升高后迅速下降,HI组、GM1组与对照组相比有明显的差异(P<0.05);HI组与GM1相比无明显差异(P>0.05)。结论:缺血缺氧后缺血敏感CA1区p-CREB的表达呈现一过性的升高后迅速下降,GM1不能抑制p-CREB的表达,对神经元的存活没有损害作用,具有较大的临床应用潜能。

兔心脏缺血再灌注损伤后重组水蛭素的保护作用及其机制(英文)

背景:重组水蛭素能否通过抑制白细胞浸润来拮抗心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,IR)损伤,从而起到对心肌的保护作用?目的:观察重组水蛭素对缺血心肌内白细胞浸润的影响,进一步探讨重组水蛭素对心肌保护的作用机制。设计:随机对照的实验研究。地点、材料和干预:本实验在第四军医大学唐都医院心血管病实验室完成。选取24只日本大耳白兔随机分为2组,每组12只。IR组:心脏左冠状动脉前降支IR动物模型,缺血45min、再灌注120min,再灌注前后静脉应用生理盐水;重组水蛭素组:缺血45min、再灌注120min,再灌注前15min静注重组水蛭素(1mg/kg),再灌注时继以持续静滴重组水蛭素犤1mg/(kg·h)犦120min。主要观察指标:心肌梗死范围及缺血心肌内白细胞浸润的变化。结果重组水蛭素组的心肌梗死范围为(11.7±2.4)%,与缺血再灌注组的(21.2±5.3)%比较,梗死范围明显缩小(t=7.436,P<0.01)。缺血再灌注组的髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性为(56.01±3.83)nkat/g,重组水蛭素组(35.51±1.67)nkat/g。重组水蛭素组缺血心肌内白细胞聚集较缺血再灌注组显著减少(t=3.935,P<0.05)。结论:重组水蛭素能够抑制再灌注期缺血心肌内白细胞浸润,拮抗心肌IR损伤。