盐水灌胃大鼠胃黏膜组织细胞的超微结构观察

目的:观察盐水灌胃导致大鼠萎缩性胃炎后胃黏膜组织病理变化及细胞超微结构变化,探讨长期咸饮食与慢性萎缩性胃炎发生的关系。方法:实验于2004-09/2005-07在西安市中心医院动物中心及解放军第四军医大学基础部电子显微镜中心完成。选择7周龄健康、性成熟的雄性SD大鼠64只,随机数字表法分为3组,即正常喂养组24只、灌胃对照组20只和盐水组20只。用盐水灌胃建立大鼠萎缩性胃炎动物模型。正常喂养组为正常喂养,饮凉白开水;灌胃对照组在正常喂养的基础上以25℃白开水灌胃,2.5mL/次,1次/d;盐水组在正常喂养的基础上以25℃150g/L盐水灌胃,2.5mL/次,1次/d。实验开始,先处死4只正常喂养组大鼠,并留取胃大体标本作为对照。以后各组分别于4,8,12,24,32周各抽取4只处死,光镜观察胃黏膜病理组织学改变,扫描电镜和透射电镜观察胃黏膜上皮细胞超微结构的变化。结果:纳入动物64只,均进入结果分析。①光镜见正常喂养组和灌胃对照组大鼠胃黏膜表面光滑,无糜烂,固有层无炎细胞浸润,黏膜下层无水肿,肌层无炎细胞浸润。盐水灌胃后第24周,大鼠胃黏膜出现腺体明显缩小,黏膜肌层的平滑肌呈束状增生插入黏膜固有层中。腺体上1/3至2/3腺上皮萎缩,腺管腔增宽,胃小凹颈部黏膜宽度变窄。②扫描电镜见正常喂养组和灌胃对照组大鼠胃黏膜被纵横交错的小沟分隔成许多胃小区,呈网状,胃小凹(胃腺开口)壁衬有圆形或椭圆形上皮细胞,体积基本一致,有短而稀的微绒毛。上皮细胞排列规则,被覆一薄层连续的黏液。盐水组大鼠在24周时胃黏膜表面扁平,腺细胞表面粗糙,腺腔间黏膜变宽,腺腔增大;并见局限性黏膜剥脱;到32周时,见胃黏膜上皮细胞萎缩、腺腔直径增大、细胞表面破溃,出现大小不等、形状不规则的糜烂面并见纤维性渗出。③透射电镜透见正常喂养组和灌胃对照组胃黏膜腺体饱满,腺腔完整,与周围连接紧密,腺细胞形态饱满,分泌颗粒丰富。盐水组24周,腺体萎缩,纤维结缔组织增生包绕腺体。腺细胞萎缩,胞质内细胞器减少,滑面内质网扩张,部分腺细胞代偿性增生,胞质内可见大量的线粒体,但细胞间距明显增大。盐水组32周,腺体萎缩更加明显,并可见少量细胞的核膜扩张,胞核常染色质减少,异染色质增多,靠近核膜,出现早期凋亡现象。结论:盐水灌胃可引起胃黏膜组织细胞损害,长期过咸刺激可损伤胃黏膜诱发黏膜萎缩。

大鼠小肠移植早期应用趋化因子受体拮抗剂抑制移植物急性排斥反应(英文)

背景:排斥反应的发生是导致小肠移植失败的主要原因,趋化因子RANTES及其受体介导的细胞免疫在急性排斥反应中具有重要作用。目的:观察小肠移植术后早期应用趋化因子受体拮抗剂Met-RANTES对排斥反应的免疫抑制作用及其与他克莫司的协同效应。设计:随机化完全区组设计,观察对照动物实验。单位:解放军第四五一医院普通外科、解放军第四军医大学西京医院胃肠外科实验室及解放军第四军医大学基础部电子显微镜中心。材料:实验于2003-09/2005-03在解放军第四军医大学西京医院胃肠外科实验室完成。以96只SD大鼠为供者,96只Wistar大鼠为受者,施行异基因节段性异位小肠移植。方法:移植后的大鼠以随机化完全区组设计分为4组(n=24):对照组、Met-RANTES组(200μg/d)、他克莫司组(0.5mg/(kg·d))及Met-RANTES+他克莫司组(Met-RANTES200μg/d+他克莫司0.5mg/(kg·d))。后3组均于移植术后腹腔注射给药,共7d;对照组移植前后不作任何处理。术后观察移植大鼠的一般状况、存活时间以及免疫细胞浸润情况,并于移植术后3,5,7d分别取各组大鼠移植肠标本(n=6)进行组织病理学检查,采用免疫荧光染色和激光扫描共聚焦显微镜技术对移植肠RANTES和CD4+,CD8+,CD25+T淋巴细胞的表达进行连续定量测定。每组剩余6只大鼠作存活时间观察,观察期限为5周。主要观察指标:①各组大鼠移植术后存活时间。②各组大鼠移植肠的病理改变。③各组大鼠移植肠RANTES及T淋巴细胞亚群的表达。结果:移植术后96只Wistar受体大鼠全部进入结果分析。①Met-RANTES组、他克莫司组和Met-RANTES+他克莫司组大鼠平均存活时间显著长于对照组(P<0.01);Met-RANTES+他克莫司组大鼠存活时间最长,与Met-RANTES组、他克莫司组差异均有显著性意义(P<0.01)。②对照组全部死于急性排斥反应及感染,组织病理学检查显示移植后第3,5,7天分别符合轻、中、重度排斥反应。Met-RANTES组、他克莫司组和Met-RANTES+他克莫司组病理学检查无明显排斥反应征象。③对照组大鼠的移植肠RANTES表达在术后各时段均显著高于其他3组(P<0.01),其动态变化与急性排斥反应的进程成正相关;Met-RANTES组和Met-RANTES+他克莫司组大鼠移植肠RANTES、CD4+、CD8+和CD25+T细胞的表达均低于对照组(P<0.01)。结论:Met-RANTES能明显抑制小肠移植急性排斥反应,有效保护移植肠功能,显著延长移植物的存活时间,并可增强小剂量(0.5mg/(kg·d))他克莫司的免疫抑制作用。

免疫荧光及激光共聚焦检测萎缩性胃炎大鼠胃黏膜组织细胞Bcl-2及cox-2蛋白表达

目的:采用免疫荧光及激光扫描共聚焦显微镜技术,检测热水灌胃导致大鼠萎缩性胃炎后胃黏膜组织细胞Bcl-2及cox-2蛋白的表达。方法:实验于2004-09/2005-07在西安市中心医院动物中心及解放军第四军医大学基础部电子显微镜中心完成。①选取7周龄健康、性成熟的雄性SD大鼠48只,随机数字表法分为正常对照组、萎缩性胃炎组,24只/组。②萎缩性胃炎组大鼠采用55℃热水灌胃建立萎缩性胃炎模型,2.5mL/次,1次/d,共90d。正常对照组不造模,给予等量25℃白开水灌胃。③两组分别于造模4,8,12,24,32,65周各取4只大鼠,按身体质量与给药容积比值为0.5%腹腔注射戊巴比妥麻醉,取大鼠胃窦组织制备切片。采用激光共聚焦免疫荧光双标方法检测胃黏膜组织Bcl-2和cox-2蛋白表达的情况。结果:48只SD大鼠全部进入结果分析。造模后两组大鼠胃黏膜组织cox-2和Bcl-2蛋白表达的检测结果:①正常对照组:在造模后各时相点胃黏膜组织细胞均未见cox-2和Bcl-2阳性表达。②萎缩性胃炎组:激光共聚焦显微镜观察显示,造模第24周细胞浆中可见cox-2和Bcl-2表达,呈均质颗粒状,到第32,65周时表达更加明显;免疫荧光双标记中造模第24,65周均可见cox-2和Bcl-2共同表达。结论:胃黏膜出现萎缩后Bcl-2及cox-2表达增加,免疫荧光与激光扫描共聚焦显微检测技术具有分辨率高、灵敏度高等特点,为细胞和组织内部超微结构的分析提供了良好的技术平台。

大鼠小肠移植排斥反应期移植肠RANTES的表达(英文)

背景：同种异体移植排斥反应是影响移植物功能和存活的最大障碍，小肠移植排斥反应的诊断与治疗尤为困难。目的：探讨移植肠RANTES的表达在小肠移植急性排斥反应中的意义，以及他克莫司对它的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2003-09／2005—03在解放军第四五一医院普通外科、解放军第四军医大学附属西京医院胃肠外科实验室、解放军第四军医大学基础部电子显微镜中心为大专院校的实验室完成。材料：选用健康成年雄性SD和Wistar大鼠各72只。以SD大鼠为供者，Wistar大鼠为受者，施行异位小肠移植。方法：实施大鼠异位小肠移植，按照不同品系的组合将移植大鼠分为4组（n=18）：非手术对照组，Wistar大鼠作为正常对照，不实施小肠移植；同基因移植组，将Wistar大鼠的小肠移植给同品系的Wistar大鼠；异基因移植未治疗组，将SD大鼠的小肠移植给Wistar大鼠，移植后不给予免疫抑制剂治疗；异基因移植他克英司治疗组，将SD大鼠的小肠移植给Wistar大鼠，移植后0～7d肌肉注射他克莫司，1mg／（kg·d）。移柏后3，5，7d每组各处死6只大鼠，切取移植肠标本进行组织病理学检查，并采用免疫荧光染色和激光扫描共聚焦湿微镜技术对移植肠RANTES的表达进行连续定量测定。主要观察指标：①各组大鼠移植肠的组织病理学改变。②不同时间点移植物内RANTES阳性细胞的表达变化。③他克莫司对异基因移植大鼠移植肠RANTES表达的抑制作用。结果：72只受体大鼠均进入结果分析。异基因移植未治疗组大鼠后3，5，7d移植肠符合轻、中、重度急性排斥反应的病理学诊断标准；他克莫司治疗组大鼠和同基因移植对照组大鼠在观察期内未发现明显排斥反应征象。异基因移植未治疗组大鼠的移植肠RANTES表达在术后均显著高于其他3组（P〈0．01），其动态变化与急性排斥反应的进程呈正相关；他克莫司治疗组大鼠移植肠RANTES的表达明显低于未治疗组（P〈0．01）。结论：RANTES阳性细胞在小肠移植急性排斥反应中发挥了重要作用，动态检测移植肠RANTES的表达变化，可能成为小肠移植急性排斥反应有效的诊断指标之一。

大鼠小肠移植排斥反应期移植肠RANTES表达的变化

目的:探讨移植肠RANTES(regulated upon activation, normal T cell expressed and secreted活化T细胞调节的,正常T细胞表达和分泌的因子)的表达在小肠移植急性排斥反应中的意义,以及他克莫司(FK506)对他的影响. 方法:选用成年健康♂SD和Wistar大鼠进行全小肠异位移植.实验分4组,第1组:非手术对照组(Wistar);第2组:同基因移植对照组(Wistar→Wistar);第3组:异基因移植组(SD→Wistar);第4组:FK506治疗组[SD→Wistar+FK506 (1 mg/kg-1/d-1,im)].移植术后3,5,7 d取各组大鼠移植肠标本进行病理学检查,并采用免疫荧光染色和激光扫描共聚焦显微镜技术对移植肠RANTES的表达进行连续定量测定. 结果:异基因移植组大鼠的移植肠RANTES表达在术后均非常显著高于其他3个对照组(P<0.01),其动态变化与急性排斥反应的进程呈正相关;FK506治疗组大鼠移植肠RANTES的表达明显低于未治疗组(P<0.01). 结论:RANTES阳性细胞在小肠移植急性排斥反应中发挥了重要作用,动态检测移植肠RANTES的表达变化,可能成为小肠移植急性排斥反应有效的诊断指标之一.