α-转化生长因子及其受体在人原发性肝细胞肝癌中的表达意义

目的 探讨α－ 转化生长因子（ ＴＧＦα） 及其受体———表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ） 在人原发性肝细胞肝癌（ ＨＣＣ） 组织蛋白和分子水平上的表达及意义．方法 运用免疫组织化学和原位杂交方法对７０ 例ＨＣＣ 进行研究，并采用５ 例正常人类肝脏做为对照．结果 ①７０ 例ＨＣＣ 中ＴＧＦ－ α的阳性率为７４－３ ％ ；ＥＧＦＲ 的阳性率为３８－６ ％ ． ②ＴＧＦα与 ＨＣＣ 的分化程度有关（ Ｐ ＜０－０５） ，在高分化ＨＣＣ 中ＴＧＦα的阳性率明显高于低分化的ＨＣＣ． ③有９３－６ ％ 的ＥＧＦＲ 阳性组织同时表现为ＴＧＦα阳性，二者的表达在 ＨＣＣ 组织中呈显著正相关（ Ｐ＜ ０－０５ ，γ＝ ０－４０） ． ④在 ＨＣＣ 癌旁组织中，ＴＧＦ － α的阳性率为８８－１ ％ ，ＥＧＦＲ 的阳性率为５４－２ ％ ，与其在ＨＣＣ 组织中相比，无显著差异（ Ｐ ＞ ０－０５ ） ，ＴＧＦα与 ＥＧＦＲ 呈显著正相关（ Ｐ＜ ０－０５ ，γ＝ ０－３５） ． ⑤ＴＧＦα与ＥＧＦＲ 的原位杂交结果略高于免疫组织化学结果，但二者之间无显著差异（ Ｐ＞ ０－０５） ．结论 ＴＧＦα，ＥＧＦＲ 可能与ＨＣＣ 的发生有关，在ＨＣＣ 发生中可能存在ＴＧＦα的自?

抗肝癌单链抗体融合人突变型TNFα的构建与表达

目的鼠/人源化抗人肝癌单链抗体(m/hscFv_(25))融合人突变型 TNFα(mTNFα)原核表达载体的构建及表达.方法用 Oligo 软件分析并设计人 mTNFα的5′及3′端引物,化学合成并用 PCR 方法扩增 mTNFα,经限制性内切酶酶切后,连接在原核表达载体 pGEX4T-1中的 m/hscFv_(25)之后,构建成pGEX4T-1/m/hscFv_(25)-mTNFα融合蛋白表达载体,转化大肠杆菌 JM109后,通过 IPTG 诱导进行目的蛋白的初步表达.结果经 DNA 电泳分析表明,mTNFα基因全长约460 bp,并通过酶切鉴定证明成功构建了抗人肝癌单链抗体融合 mTNFα的原核表达载体,融合蛋白产物经 SDS-PAGE 显示,相对分子质量(Mr)为68 000的蛋白谱带,与预期设计完全一致,光密度扫描结果表明,GST-mscFv_(25)-mTNFα和 GST-hscFv_(25)-mTNFα融合蛋白分别占菌体总蛋白的15%和12%,表达产物主要以不溶性包涵体形式存在.结论成功构建并表达了鼠/人源化抗人肝癌单链抗体融合人mTNFα的双功能抗体基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为进一步研究 HCC 的治疗奠定了基础.

热休克肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞瘤苗对原位接种结肠肿瘤的免疫预防作用

目的:研究热休克肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞的体内抗肿瘤作用以及对原位接种结肠肿瘤小鼠的免疫保护作用. 方法:肿瘤细胞CT-26经热休克处理后制备冻融抗原,体外负载树突状细胞,免疫同源小鼠(热休克组).以IFN-γELISPOT实验、LDH释放实验检测小鼠体内肿瘤特异性T细胞免疫反应,以原位接种结肠肿瘤的体积以及荷瘤小鼠的生存时间来评价该树突状细胞瘤苗对结肠原位接种CT-26小鼠的免疫保护作用,并与非热休克肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞的免疫效果(非热休克组)作一比较. 结果:热休克处理肿瘤细胞可提高肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞表面MHC-Ⅱ类分子(66.3% vs 59.1%)、共刺激分子CD86的表达(39.4% vs 36.7%);热休克组小鼠脾淋巴细胞中肿瘤特异性CTL数量高于非热休克组(P=0.001),相同效靶比下前者肿瘤特异性细胞毒活性强于后者:热体克组与非热休克组小鼠原位接种结肠肿瘤14 d后的肿瘤体积均明显小于单纯DC免疫组(P=0,000),但HSCT-26DC免疫组与CT-26 DC免疫组间差异无显著性(P=0.480).单纯DC免疫组50% (3/6)可见腹膜转移,CT-26 DC免疫组以及HSCT- 26DC免疫组均未见腹腔转移;热休克组小鼠荷瘤生存时间显著长于非热休克组(P=0.0384). 结论:热休克处理肿瘤细胞可以提高肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞的体内抗肿瘤作用,热休克肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞瘤苗对原位接种结肠肿瘤小鼠具有良好的免疫保护作用.

维甲酸诱导多种肿瘤细胞凋亡相关基因克隆的研究(英文)

目的应用基于聚合酶链式反应(PCR)技术的改良消减杂交方法克隆肿瘤凋亡相关基因,验证维甲酸调控生物细胞增殖、分化,诱导多种肿瘤细胞凋亡的作用。方法以全反式维甲酸(all-transretinoicacid)诱导前列腺癌DU-145细胞、早幼粒白血病HL-60细胞和乳腺腺癌MCF-7细胞产生凋亡,在此基础上,采用基于PCR技术的改良消减杂交方法克隆肿瘤细胞凋亡相关基因。结果在维甲酸诱导前列腺癌DU-145细胞、早幼粒白血病HL-60细胞和乳腺腺癌MCF-7细胞产生凋亡过程中,有TNF、泛素、热休克蛋白和C-erbB-2基因参与,并成功克隆出多条可能与凋亡密切相关的未知基因,均被GenBank收录,登录号为AF174394,AF144056,AF141882。结论这种基于PCR技术的改良消减杂交方法对于差异表达基因的克隆是十分有效的。

2450MHz微波照射小鼠睾丸对胚胎发育的影响

目的观察微波局部照射小鼠睾丸后两个月与雌鼠交配对胚胎发育的影响。方法雄性BALB/c小鼠随机分为1、2、3次照射组和对照组,应用2450MHz微波局部照射小鼠睾丸,待小鼠肛温升至(41±0.5)℃后维持15min。于雄鼠受照后两个月与雌鼠交配,致雌鼠怀孕第18天脱颈处死孕鼠,辨认性别、活胎、死胎、吸收胎并对胎鼠称重。骨骼畸形采取茜素红染色,解剖显微镜观察。结果照射组中吸收胎和死胎率均略高于对照组,平均每胎的植入数入数在各照射组均稍低于对照组,性别比各组均以雌性略高于雄性,仔鼠畸形的发生率有随着雄鼠受照射次数的增加而增加的趋势,但各指标在照射组和对照组间均无显著性差异(P>0.05)。结论微波局部照射小鼠睾丸对生精细胞有潜在的远后效应,一定程度上影响胚胎的发育,注意微波对生殖细胞的过量照射。

DNA疫苗对小鼠HCV-C皮下移植瘤的防治

目的:从病理组织学方面验证DNA疫苗对小鼠HCV-C皮下移植瘤的预防及治疗作用,为将来的临床应用提供动物实验依据.方法:利用脂质体转染技术将pcDNAHCV-C质粒转染SP2/0细胞并将稳定表达HCVC抗原的SP2/0细胞皮下接种于Balb/c小鼠,成瘤后取小鼠瘤组织,用病理组织学方法验证DNA疫苗对HCV-C皮下移植瘤的预防及治疗作用.结果:肿瘤组织中以T淋巴细胞浸润为主;HCV-C抗原表达主要在SP2/0细胞的细胞质和胞膜上,少数位于胞核中;对照组HCV-C抗原表达明显强于实验组.结论:HCV-CDNA疫苗对HCV的感染有预防和治疗作用.

子宫颈癌组织中抗凋亡基因BAG-1表达

目的 :应用组织芯片技术 ,探讨子宫颈癌、慢性宫颈炎伴黏膜上皮增生和正常子宫颈组织中抗凋亡基因BAG 1的表达及其意义。 方法 :组织芯片采用免疫组化DAKOEnvision法检测子宫颈癌组织、宫颈增生组织、正常宫颈组织中BAG 1的表达。 结果 :组织芯片中BAG 1在子宫颈癌组织中的表达比宫颈黏膜上皮增生组织、正常子宫颈组织中高 ,其阳性表达率为 5 2 .2 % ,在宫颈增生中的表达率为 1 3.0 % ,在正常宫颈组织中的表达率为 8.3% ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。 结论 :BAG 1在子宫颈癌组织中表达较宫颈增生组织和正常子宫组织显著增高。凋亡相关基因BAG

机械性脑白质损伤后皮层神经元凋亡的证据及其分布特征

目的 探讨细胞凋亡在机械性脑白质损伤后皮层神经细胞病理变化中的作用及其分布特征。方法 雄性健康SD大鼠 3 6只随机分为假手术组 (1 2只 )和模型组 (2 4只 ) ,用模型组动物制作大脑皮层下横切模型。于致伤后不同时间处死动物 ,用TUNEL原位末端标记和常规病理组织学方法观察损伤区及相应皮层神经细胞变化的性质和规律。结果 致伤后横切处出血 ,损伤组织内神经元出现坏死改变 ,胶质细胞增多。大脑皮层Ⅱ Ⅴ层神经细胞多出现萎缩改变。伤后 1 2d时 ,相应皮层内即出现散在早期凋亡神经元 ,随后逐渐增多 ,7d后又趋减少 ,伤后 1 9d皮层内仍可检出凋亡神经元。在损伤区凋亡神经元少见 ,可见部分胶质细胞凋亡。结论 脑白质损害时 ,损伤相应部位皮层神经元主要表现为凋亡。在损伤区 ,神经元和胶质细胞主要表现为坏死。皮层内凋亡神经元主要分布于第Ⅱ Ⅴ层 ,其时间分布呈一单峰状曲线 ,凋亡峰出现在伤后第 7d前后 ,至少持续 1 9d。

褪黑素对大鼠酒精性肝纤维化的作用

目的:观察褪黑素对酒精性肝纤维化的作用,并了解其是否有剂量依赖性。方法:实验于2004-03/12在解放军第四军医大学基础部病理学实验室进行。取SD雄性大鼠40只,随机分为正常对照组、模型组和褪黑素0.25,0.5,1.0mg/kg组5组(n=8)。①除正常对照组外,其他各组大鼠每天固定时间灌胃白酒-玉米油-吡唑混合液(酒的摄入量为10g/kg),连续12周复制酒精性肝纤维化大鼠模型。②造模成功后褪黑素各剂量组分别经尾静脉注射褪黑素0.25,0.5,1.0mg/(kg·d),正常对照组及模型组大鼠经尾静脉注射2.5mL/kg体积分数为0.02的乙醇,连续28d。③给药后颈椎脱臼处死大鼠,经苏木精-伊红染色观察肝组织的病理学变化,并检测大鼠肝匀浆液中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的水平。结果:40只大鼠进入结果分析。①模型组大鼠肝小叶结构紊乱,有大量纤维组织沉积,炎症细胞浸润,肝细胞脂肪变性。褪黑素1.0mg/kg组纤维组织沉积减少,仅有少量炎症细胞的浸润。②超氧化物歧化酶活性:模型组显著低于正常对照组(P<0.01);褪黑素0.25,0.5,1.0mg/kg组显著高于模型组(P<0.05,0.01),剂量越大,效果越好。③谷胱甘肽过氧化物酶活性:模型组显著低于正常对照组(P<0.05);褪黑素0.25,0.5,1.0mg/kg组显著高于模型组(P<0.05),剂量越大,效果越好。结论:褪黑素对酒精性肝纤维化具有剂量依赖性的保护作用,其机制可能与增强肝脏超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶的活性有关。

Bcl-2核酶对SMMC7721细胞的促凋亡机制

目的 观察Bcl-2核酶对SMMC-7721细胞的作用,探讨bcl-2抑制细胞凋亡的机制。 方法 经脂质体介导的方法将PMTr-neo(正向Bcl-2核酶真核表达载体)导入SMMC 7721细胞中,细胞克隆转移扩大培养后,采用TUNEL,TRAP结合ELISA流式细胞仪,免疫组化技术检测SMMC 7721/PMTr-neo细胞增殖及细胞凋亡。 结果 较对照组SMMC 7721/PMTr-neo细胞bcl-2表达水平显著下降,伴有显著细胞凋亡现象及端粒酶活性下降。 结论 Bcl-2核酶可促进SMMC 7721细胞发生凋亡,并降低细胞端粒酶活性,为反义技术在肝癌治疗中应用提供理论依据。

抑制性消减杂交构建凋亡肝癌细胞差异表达cDNA文库

目的应用抑制性消减杂交技术构建肝癌细胞凋亡消减杂交cDNA文库,以期克隆肝癌细胞凋亡相关基因。方法用三氧化二砷诱导人肝癌HCC-9204细胞凋亡,提取poly A' RNA,反转录合成 cDNA,消化成短片段后分成两组,分别与两种不同的接头连接,再与普通肝癌细胞的cDNA进行两次杂交及两次抑制性PCR扩增,将PCR产物与PT-Adv线性载体连接,转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑取克隆进行酶切鉴定,反向Northern blot分析差异基因的可靠性。结果成功地构建了具有高消减效率的人肝癌凋亡细胞cDNA文库,随机挑取200个克隆制备质粒并酶切分析,其中83.5％的克隆均具有100bp-600bp左右的插入片段,随机选取30个插入片段,分别以未凋亡和凋亡的肝癌细胞cDNA为探针,进行Reverser Northern Blot,其中21个被证明为差异表达的细胞凋亡相关基因cDNA片段。结论应用抑制性消减杂交技术成功构建了人肝癌凋亡细胞cDNA消减文库,为大批量筛选、克隆肝癌细胞凋亡相关的未知新基因奠定了基础,有助于了解细胞凋亡的分子机制。

双特异性单克隆抗体介导的单核－巨噬细胞抗肝癌作用

目的研究双特异性单克隆抗体介导的单核－巨噬细胞抗肝癌作用。方法采用化学交联法，用异型化学交联剂Ｎ－琥珀酰亚氨基－３－（２－二硫吡啶）丙酸酯（ＳＰＤＰ），将具有高亲和性的抗肝癌单抗ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２与抗单核－巨噬细胞的单抗ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２联结成双特性单抗ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２，经ＦＰＬＣＳｅｐｈａｃｒｙ１Ｓ－２００纯化。用间接免疫荧光法鉴定其特性。结果ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２及ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２对肝癌细胞间接免疫荧光染色阳性，ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２及ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２对单个核细胞染色为阳性。而这些抗体对肺腺癌细胞均呈阴性；单纯ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２无导向单核－巨噬细胞杀伤肝癌细胞作用，ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２及ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）２均可介导单核－巨噬细胞对肝癌细胞起杀伤作用，并且前者强于后者。结论ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ′）２－ＭＡｂ７Ｆ（ａｂ′）是一种具有双特异性的单克隆抗体，可以提高人单核－巨噬细胞杀伤肝癌细胞的作用。