藏红花素对糖基化终产物诱导视网膜微血管内皮细胞凋亡的影响

目的糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)中糖基化终产物(advanced glycosylation end products,AGE)可引起细胞内产生过氧化物和炎症因子,导致视网膜微血管内皮细胞(retinal microvascular endothelial cell,RMEC)凋亡,视功能破坏。文中观察藏红花素对在AGE作用下RMEC活性、凋亡比例、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)产物、细胞内和上清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α含量的干预,探讨藏红花素对AGE引起RMEC凋亡的保护机制。方法采用免疫磁珠法分离培养RMEC,浓度为10、50和100μmol/L藏红花素培养液作用于RMEC,观察4d内细胞增生变化并记录生长曲线。不同浓度藏红花素溶液作用于AGE处理的RMEC 12 h,锥虫蓝染色计数活细胞率,流式细胞术检测凋亡细胞比例,荧光光度计测定细胞内ROS含量,采用蛋白电泳和ELISA测定RMEC内和上清中TNF-α含量。结果 RMEC在10、50μmol/L藏红花素的培养液中可以继续增生。培养至3 d和4 d时,100μmol/L藏红花素可使细胞增生受到抑制。与对照组相比,100 mg/L AGE处理12 h和24 h后RMEC活细胞比例明显下降。10、50和100μmol/L藏红花素可不同程度保护AGE处理后RMEC活细胞比例。与对照组相比,100 mg/L AGE处理12 h后凋亡细胞比例明显升高。10、50和100μmol/L藏红花素处理12h后凋亡细胞比例均有下降。AGE处理12h后RMEC内ROS水平明显升高。10、50和100μmol/L藏红花素可不同程度抑制AGE处理后RMEC内ROS水平。AGE处理后RMEC内和上清液中TNF-α水平明显升高。10、50和100μmol/L藏红花素可明显抑制AGE处理后RMEC内和上清液中TNF-α水平。结论藏红花素可能通过抑制AGE诱导RMEC中ROS产生并减少TNF-α合成途径,防止细胞凋亡。